"МУК 4.1.1467-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Бромуконазола в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых колосовых культур, ягодах черной смородины и винограда методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: Рон-Пуленк.

Торговое название: Вектра, Гранит.

Название действующего вещества по номенклатуре ИСО: Бромуконазол.

Название действующего вещества по номенклатуре ИЮПАК: 1-[(2RS,4RS:2RS,4SR-4-бромо-2-(2,4-дихлорфенил) тетрагидрофуранил] 1Н-1,2,4-триазол.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0,01 мг/кг массы человека;

ОДК в почве - 0,1 мг/кг;

ПДК в воде водоемов - 0,002 мг/куб. дм;

ОБУВ в воздухе рабочей зоны при применении - 0,1 мг/куб. м;

ОБУВ в воздухе атмосферы при применении - 0,005 мг/куб. м;

МДУ в продукции (мг/кг): зерно хлебных злаков, яблоки, груши, виноград - 0,04; черная смородина - 0,08 (ВМДУ).

Область применения препарата: Бромуконазол - системный фунгицид защитного и лечебного действия из группы триазолов, ингибирующих синтез стеринов. Он эффективно подавляет развитие целого ряда патогенных грибов, включая аскомицеты, базидиомицеты и несовершенные грибы.

Зарегистрирован в России в качестве фунгицида под фирменными названиями:

Вектра, СК, 100 г/л - против парши и мучнистой росы яблони, оидиума винограда, септориоза, антракноза, американской мучнистой росы смородины с нормой расхода 0,2 - 0,3 л/га, до 4-х обработок за сезон;

Гранит, к.с., 200 г/л - против мучнистой росы, ржавчины, септориоза, фузариоза колоса зерновых культурах (пшеница яровая, озимая, ячмень яровой, рожь) с нормой расхода 1 л/га. До 2-х обработок за сезон.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Бромуконазола с помощью газожидкостной хроматографии (капиллярные и набивные колонки) с детектором электронного захвата после экстракции органическим растворителем и очистки экстракта перераспределением в хлороформ. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при интенсивной технологии выращивания сахарной свеклы. Избирательность метода в значительной степени увеличивается при использовании капиллярной колонки с программированием температуры термостата колонок.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологические характеристики метода приведены в таблицах 1 - 2.

2.2.1. Реактивы и материалы

Азот газообразный особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-87.

Бромуконазол, стандартный раствор в ацетоне с содержанием д.в. 100 мкг/мл (раствор N 1) и 10 мкг/мл (раствор N 2).

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Кислота хлороводородная (соляная), концентрированная, х.ч., ГОСТ 3118-77.

Кислота соляная, 0,1н р-р.

Насадка для хроматографической колонки: Хроматон-N-супер с 5% OV-17 (0,16 - 0,20), Хемапол ЧССР и Хроматон-N-супер с 3% ХЕ-60 (0,125 - 0,160), Хемапол ЧССР.

Натрия гидроокись, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Натрия гидроокись, 4 н р-р.

Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, х.ч., ТУ-6-09-4263-76.

2.2.2. Приборы, аппаратура, посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ-64-1-1091-73.

Весы аналитические по ТУ 64-1-1065.

Воронки делительные на 250, 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные на 50 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы круглодонные на 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные на 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы плоскодонные конические на 100, 250, 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Мельница для размола образцов, ТУ-46-22-23-79.

Микрошприц МШ-10А по ТУ 64-1-2850.

Пипетки мерные на 0,1; 1,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ-25-11-917-74.

Сито металлическое с диаметром отверстий 1 - 2 мм.

Универсальная индикаторная бумага.

Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ-6-09-1678-77.

Хроматограф "ЦВЕТ-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов или "Цвет 550".

Хроматографическая колонка стеклянная спиральная, 1500 х 3 мм, содержащая 5% OV-17 на Хроматоне-N-супер (0,16 - 0,20), или 3% ХЕ-60 на Хроматоне-N-супер (0,125 - 0,160).

Хроматограф "Кристалл 2000м" с детектором по захвату электронов.

Хроматографическая колонка капиллярная кварцевая НР - 5 (Crosslinked 5% РН МЕ Siloxane), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Цилиндры мерные на 30, 100, 250 мл, ГОСТ 1770-74.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше +4 °С.

Пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Растительные образцы для длительного хранения замораживаются и хранятся в холодильнике при -18 °С, предварительно определяется содержание влаги. Образцы ягод замораживают и хранят в холодильнике при -18 °С не более 1 месяца.

Перед анализом ягоды черной смородины и винограда гомогенизируют (растирают в ступке). Образцы воды фильтруют.

2.5.1. Вода. 500 мл воды помещают в делительную воронку объемом 500 мл и экстрагируют Бромуконазол хлороформом трижды по 150 мл. Объединенный экстракт осушают, пропуская через слой натрия сернокислого безводного, и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл.

2.5.2. Почва. Навеску почвы 50 г, предварительно просеянной через сито, помещают в колбу объемом 250 мл, увлажняют 10 - 15 мл воды, заливают 100 мл водно-ацетоновой смеси (1:7) и встряхивают в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще дважды. Экстракты объединяют, упаривают на испарителе при t = 40 °С до водной фазы. Водную фазу количественно переносят в делительную воронку, пропуская через бумажный фильтр, и Бромуконазол экстрагируют трижды по 30 мл хлороформом, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, пропуская через безводный сернокислый натрий, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. При необходимости экстракт очищают как указано для зерна и растений в разделе 2.5.3.

2.5.3. Зерно, растения. Навеску зерна 25 г, измельченную на электромельнице, а также навеску растений 25 г, измельченную ножницами, помещают в коническую колбу на 500 мл, заливают 100 мл ацетона и встряхивают на встряхивателе в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще дважды. Экстракты объединяют, объединенный экстракт упаривают досуха при t = 40 °С. Остаток в колбе смывают 3 раза по 20 мл 0,1 н раствором соляной кислоты и количественно переносят в делительную воронку, пропуская раствор через бумажный фильтр. Подщелачивают раствор 4 н раствором гидроокиси натрия до рН среды 8 - 9. по индикаторной бумаге. Из щелочной среды Бромуконазол экстрагируют 3 раза хлороформом по 30 мл, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, пропуская через безводный сернокислый натрий, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40 °С.

Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

2.5.4. Ягоды черной смородины и винограда

Навеску ягод 25 г, измельченную в ступке, помещают в коническую колбу на 500 мл, заливают 50 мл ацетонитрила и встряхивают на встряхивателе в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще трижды. Экстракты объединяют, объединенный экстракт упаривают досуха при t = 40 °С. Остаток в колбе разводят в 50 мл 0,1 н раствором соляной кислоты, подщелачивают 4 н раствором гидроокиси натрия до рН среды 8. Из щелочной среды Бромуконазол переэкстрагируют 3 раза хлороформом по 25 м, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40 °С.

Сухой остаток растворяют в 10 мл ацетона и хроматографируют.

2.6.1. Условия хроматографирования

2.6.1.1. Почва, зерно и зеленая масса зерновых колосовых культур

Каждую анализируемую пробу вводят в колонку хроматографа 3 раза. Образцы, дающие пики выше стандартного пика, разбавляют.

2.6.1.2. Вода, ягоды черной смородины, винограда

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика. Образцы, дающие пики больше чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют.

2.6.2. Обработка результатов анализа

Количественный расчет двух изомеров Бромуконазола в анализируемой пробе проводят по следующей формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Кивачицкая М.М., Скурьят А.Ф., Карченя Г.К., БелНИИЗР, п. Прилуки, Минский р-он.

Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук; Калинина Т.С., ст. н. сотр., канд. с.-х. наук; Рыбакова О.И., н. сотр.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева.

127550, Москва, Тимирязевский пр., 2, кафедра химических средств защиты растений.

Телефон: 976-43-26.