"МУК 4.1.1405-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств метрибузина в воде, почве, клубнях картофеля, плодах томатов, зерне кукурузы, семенах и масле сои методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены в действие с 30 июня 2003 г.

5. Введены впервые.

Фирма-производитель: ЗАО Фирма "Август".

Торговое название: ЛАЗУРИТ, СП.

Действующее вещество (д.в.): метрибузин.

Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: 4-амино-6-трет-бутил-3-метилтио-1,2,4-триазин-5(4Н)-он.

Структурная формула д.в. (не приводится).

Растворимость д.в. (г/1000 мл) при 20 °С: в воде - 1,2, в гексане - 2,0, этаноле - 10, метаноле - 450, ацетонитриле - > 600, ацетоне - 820, хлороформе - 850.

Стабильность д.в.: устойчив к действию разбавленных кислот и щелочей от pH 2,0 до pH 12,5 при 20 °С.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов санитарно-бытового пользования - 0,1 мг/л, в воде рыбохозяйственных водоемов присутствие препарата не допускается, ПДК в почве - 0,2 мг/кг, МДУ в картофеле и томатах - 0,25 мг/кг, ВМДУ в семенах сои - 0,25 мг/кг и масле сои - 0,1 мг/кг, МДУ для зерна кукурузы не установлен.

Область применения препарата. ЛАЗУРИТ, СП - гербицид для борьбы с однолетними двудольными и злаковыми сорными растениями.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении остаточных количеств метрибузина из анализируемого объекта органическими растворителями, проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на хроматографической колонке с силикагелем. Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД) или детектора электронного захвата (ДЭЗ).

2.1.2. Избирательность метода

Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование селективных детекторов позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на анализ метрибузина.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в табл.

2.4.1. Подготовка и очистка растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.4.2. Подготовка и кондиционирование набивной колонки

Подготовленной насадкой (5% SE-30 на хроматоне N-Super или другом носителе) заполняют стеклянную колонку и уплотняют ее под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют ее при рабочем расходе газа-носителя и температуре 250 °С в течение 8 - 10 ч.

2.4.3. Приготовление стандартных растворов

Основной раствор метрибузина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 1,0; 2,0; 4,0 и 8,0 мкг/мл (при использовании ТИД) или 0,2; 0,4; 0,8 и 1,6 мкг/мл (при использовании ДЭЗ) готовят из основного стандартного раствора метрибузина соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более месяца.

При изучении в модельных опытах полноты извлечения метрибузина используют ацетоновые растворы стандартного вещества.

2.4.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 - 2 мкл рабочего раствора метрибузина с концентрацией 1,0; 2,0; 4,0 и 8,0 мкг/мл (при использовании ТИД) или 0,2; 0,4; 0,8 и 1,6 мкг/мл (при использовании ДЭЗ). Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации метрибузина в растворе в мкг/мл.

2.4.5. Подготовка хроматографической колонки с силикагелем

Силикагель прогревают в сушильном шкафу при 150 °С в течение 4 ч и охлаждают до комнатной температуры. Стеклянную колонку размером 30,0 х 1,0 см заполняют суспензией 3,0 г активированного силикагеля в 15 мл дихлорметана. После стекания растворителя до верхнего края сорбента над слоем силикагеля помещают слой безводного сульфата натрия высотой ~1,0 - 1,5 см и перед использованием промывают содержимое колонки 15,0 мл смесью дихлорметан - эфир этиловый (80:20).

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.79 N 2051-79.

Пробы воды при наличии взвеси фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" и хранят в закрытой стеклянной таре при температуре 4 - 6 °С не более 3 дней.

Пробы почвы просушивают до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света и хранят при комнатной температуре в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Клубни картофеля и плоды томатов после отбора проб моют, обсушивают фильтровальной бумагой и хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в закрытой полиэтиленовой таре.

Пробы семян сои и зерна кукурузы просушивают до стандартной влажности и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Пробы масла сои хранят при 4 - 6 °С в закрытой стеклянной таре.

Пробы почвы перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пестиком разминают крупные комки, из проб пинцетом удаляют включения: корни растений, насекомых, камни, стекло, кости, уголь и другие. После этого пробы почвы растирают в ступке пестиком, просеивают через сито с диаметром отверстий 1,0 мм и после перемешивания отбирают усредненную аналитическую пробу.

Перед анализом из каждого клубня пробы картофеля или плода пробы томатов по осевой линии вырезают 1/4 часть. Полученную среднюю пробу измельчают и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

Пробы семян сои и зерна кукурузы перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пинцетом удаляют включения. Семена и зерно измельчают на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

2.7.1. Вода

2.7.1.1. Экстракция метрибузина

Аналитическую пробу воды объемом 100 куб. см помещают в делительную воронку емкостью 250 мл, добавляют 10,0 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и 1,0 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси калия. В воронку добавляют 50 мл дихлорметана и энергично встряхивают содержимое воронки в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя ~1,0 - 1,5 см), помещенный в воронке для фильтрования на ватный тампон, в колбу-концентратор емкостью 100 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 30 мл дихлорметана. После этого верхний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным дихлорметановым фильтратом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают дихлорметан досуха при температуре 40 °С.

После охлаждения колбы-концентратора до комнатной температуры сухой остаток растворяют в 1 мл (при использовании ТИД) или в 5 мл (при использовании ДЭЗ) ацетона и проводят количественное определение метрибузина по п. 2.7.6.

2.7.1.2. Очистка экстракта

При обнаружении в хроматографируемой пробе коэкстрактивных веществ, мешающих определению, проводят очистку экстракта на хроматографической колонке с силикагелем по п. 2.7.4.2.2.

2.7.2. Почва

2.7.2.1. Экстракция метрибузина

Аналитическую пробу почвы массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 100 мл смеси ацетон - дистиллированная вода (95:5), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент также фильтруют в делительную воронку.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 100 мл смеси ацетон - бидистиллированная вода (95:5) и встряхивают в течение 60 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент также фильтруют в делительную воронку.

К объединенному ацетоно-водному фильтрату, находящемуся в делительной воронке, добавляют 150 мл бидистиллированной воды, 10,0 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и 1,0 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси калия. В делительную воронку добавляют 50 мл дихлорметана и энергично встряхивают содержимое воронки в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя ~1,0 - 1,5 см), помещенный на бумажный фильтр "синяя лента", в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 30 и 20 мл дихлорметана. После этого верхний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным дихлорметановым фильтратом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители досуха при температуре 40 °С.

После охлаждения колбы-концентратора до комнатной температуры сухой остаток растворяют в 1 мл (при использовании ТИД) или в 5 мл (при использовании ДЭЗ) ацетона и проводят количественное определение метрибузина по п. 2.7.6.

В случае обнаружения в хроматографируемой пробе коэкстрактивных веществ, мешающих определению, проводят очистку экстракта на хроматографической колонке с силикагелем по п. 2.7.4.2.2.

2.7.3. Клубни картофеля, плоды томатов

2.7.3.1. Экстракция метрибузина

Аналитическую пробу клубней картофеля или плодов томатов массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 50 мл ацетона, слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 минут. После этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр "белая лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. К остатку образца, находящемуся в колбе, приливают 50 мл ацетона и процедуру экстрагирования и фильтрования повторяют.

При использовании аппарата для встряхивания в колбу с аналитической пробой вносят 80 мл ацетона и встряхивают в течение 60 мин. Содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр "белая лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент также фильтруют в делительную воронку.

К объединенному фильтрату в делительную воронку добавляют 150 мл бидистиллированной воды, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 1,0 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси калия и 50 мл дихлорметана. Воронку встряхивают в течение 2 мин. и после 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя ~1,0 - 1,5 см), помещенный на бумажный фильтр "синяя лента", в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 30 и 20 мл дихлорметана. Водноацетоновый слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным дихлорметановым фильтратом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители досуха при температуре 40 °С.

2.7.3.2. Очистка экстракта

Очистку экстракта проводят на хроматографической колонке с силикагелем по п. 2.7.4.2.2.

2.7.4. Семена сои, зерно кукурузы

2.7.4.1. Экстракция метрибузина

Аналитическую пробу семян сои или зерна кукурузы массой 10 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, добавляют 100 мл смеси ацетон - гексан (80:20), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 50 мл смеси ацетон - гексан (80:20) и экстрагент также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 100 мл смеси ацетон - гексан (80:20) и встряхивают в течение 60 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 50 мл смеси ацетон - гексан (80:20) и экстрагент также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным ацетоно-гексановым фильтратом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители до объема 10 - 20 мл при температуре 40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 мл бидистиллированной воды, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильную камеру на 60 мин. и выдерживают при 4 - 6 °С или в морозильную камеру на 15 мин., где выдерживают при температуре -18 °С. После этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. В делительную воронку добавляют 1,0 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси калия и 65 мл дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя ~2,0 - 2,5 см), помещенный на бумажный фильтр "синяя лента", в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 30 и 20 мл дихлорметана. После этого верхний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным дихлорметановым фильтратом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают дихлорметан досуха при температуре 40 °С.

2.7.4.2. Очистка экстракта

2.7.4.2.1. Очистка экстракта перераспределением в системе гексан - ацетонитрил.

Сухой остаток экстракта, находящийся в колбе-концентраторе, растворяют 50 мл гексана (насыщенного ацетонитрилом) и переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. Колбу-концентратор промывают 25 мл ацетонитрила (насыщенного гексаном) и этот объем также переносят в делительную воронку.

Содержимое делительной воронки встряхивают в течение 1-й минуты и после 5-минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в чистую колбу-концентратор емкостью 100 мл. В делительную воронку добавляют еще 25 мл ацетонитрила (насыщенного гексаном), содержимое воронки встряхивают, отстаивают и нижний ацетонитрильный слой объединяют в колбе-концентраторе с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.

Колбу-концентратор подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают ацетонитрил досуха при температуре 50 °С.

После охлаждения колбы-концентратора до комнатной температуры проводят дополнительную очистку экстракта на хроматографической колонке с силикагелем по п. 2.7.4.2.2.

2.7.4.2.2. Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе-концентраторе растворяют в 3,0 мл дихлорметана и переносят его в подготовленную хроматографическую колонку с силикагелем. В хроматографической пробе (пробы воды и почвы, п. п. 2.7.1.2 и 2.7.2.2) упаривают ацетон досуха в токе азота при температуре 40 °С. После охлаждения до комнатной температуры сухой остаток экстракта растворяют в 3,0 мл дихлорметана, переносят его для очистки в подготовленную колонку с силикагелем.

Метрибузин элюируют двумя объемами по 5,0 мл смеси дихлорметан - эфир этиловый (80:20), собирая элюат в коническую пробирку емкостью 15 мл. Растворители элюата упаривают досуха в токе азота.

Сухой остаток элюата растворяют в 1 мл ацетона (при использовании ТИД) или в 5 мл ацетона (при использовании ДЭЗ) и анализируют его на содержание метрибузина по п. 2.7.6.

2.7.5. Масло сои

2.7.5.1. Экстракция метрибузина

Аналитическую пробу масла массой 10,0 +/- 0,1 г растворяют в 50 мл гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 мл и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку емкостью 250 мл. Колбу промывают 25 мл ацетонитрила (насыщенного гексаном) и переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 мл. Колбу промывают еще 25 мл ацетонитрила (насыщенного гексаном) и также переносят в воронку (250 мл). Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин., отстаивают и нижний ацетонитрильный слой объединяют с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.

К объединенному ацетонитрильному экстракту, находящемуся в делительной воронке емкостью 500 мл, добавляют 200 мл дистиллированной воды, 1,0 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси калия и содержимое воронки перемешивают встряхиванием в течение 1-й минуты. После этого в воронку добавляют 65 мл дихлорметана и содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя ~2,0 - 2,5 см), помещенный на бумажный фильтр "синяя лента", в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Экстрагирование и фильтрование повторяют еще два раза с использованием последовательно 30 и 20 мл дихлорметана. После этого верхний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным дихлорметановым фильтратом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители досуха при температуре 40 °С.

2.7.5.2. Очистка экстракта

Очистку экстракта проводят на хроматографической колонке с силикагелем по п. 2.7.4.2.2.

Внимание! Сухой остаток элюата после очистки на колонке с силикагелем растворяют в 0,5 мл ацетона (при использовании ТИД) или в 2,5 мл ацетона (при использовании ДЭЗ) и анализируют его на содержание метрибузина по п. 2.7.6.

2.7.6. Условия хроматографирования

2.7.6.1. При использовании набивной колонки

Газовый хроматограф "Цвет-560" с ТИД или ДПР.

Колонка хроматографическая набивная длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125 - 0,16 мм.

Скорость движения ленты самописца: 0,25 см/мин.

Температура испарителя: 250 °С.

Температура колонки: 210 °С.

Температура детектора: 310 °С.

Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) - 40 куб. см/мин., водорода и воздуха к ТИД - 20 и 300 куб. см/мин. соответственно.

Объем вводимой пробы: 2 мкл.

Время удерживания метрибузина: 3,1 +/- 0,2 мин.

Предел детектирования: 0,5 нг для ТИД и 0,1 нг для ДПР.

Линейный диапазон детектирования: 1,0 - 10,0 нг для ТИД и 0,2 - 5,0 нг для ДПР.

2.7.6.2. При использовании капиллярной колонки

Газовый хроматограф с ТИД или ДЭЗ (ДПР).

Колонка хроматографическая капиллярная длиной 15 м и внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, 0,4 мкм.

Температура колонки с программированием от 80 °С (1 мин.) до 280 °С (15 мин.) со скоростью 10 °С/мин.

Температура испарителя: 250 °С.

Температура детектора: 300 °С.

Расход газов: газа-носителя (гелий марки "А") - 2,0 куб. см/мин., водорода и воздуха к ТИД - 30 и 300 куб. см/мин. соответственно, дополнительного газа (гелий марки "А") к ТИД - 30 куб. см/мин., дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ - 40 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы: 1 мкл.

Время удерживания метрибузина: 14,5 +/- 0,1 мин.

Предел детектирования: 0,5 нг для ТИД и 0,1 нг для ДЭЗ.

Линейный диапазон детектирования: 1,0 - 10,0 нг для ТИД и 0,2 - 5,0 нг для ДЭЗ.

2.7.7. Обработка результатов анализа

Содержание метрибузина рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

ВНИИ защиты растений.