"МУК 4.1.1230-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тралкоксидима в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 16.03.2003)

1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик контроля указаны в конце каждой из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.

4. Введены впервые.

Фирма производитель: Зенека (Великобритания).

Торговое название: Грасп 80% ВДГ.

Действующее вещество: тралкоксидим [2-1(этоксиимино)пропил]-3-гидрокси-5-мезитилциклогекс-2-енон (номенклатура ИЮПАК).

Структурная формула: (не приводится).

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ПДК в воде - 0,008 мг/куб. дм;

ОДК в почве - 0,06 мг/кг;

МДУ в зерне хлебных злаков - 0,02 мг/кг.

Область применения. Грасп 80% в.д.г. - послевсходовый селективный системный гербицид для борьбы с сорняками в посевах пшеницы и ячменя.

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении тралкоксидима методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции вещества из воды хлороформом, из почвы и растительного материала ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе вода - хлороформ и на концентрирующих патронах-колонках Диапак-диол и Диапак-амин. Идентификация тралкоксидима проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

Методика специфична в присутствии пестицидов, применяемых на зерновых культурах.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.

--------------------------------

<*> Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с перманганатом калия, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.1979). Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С - в течение месяца. Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице, почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

2.5.1. Подготовка и очистка растворителей

Гексан сушат над хлоридом кальция, затем перегоняют над пен-токсидом фосфора. Диэтиловый эфир сушат двумя порциями хлорида кальция, периодически встряхивая, затем перегоняют над хлоридом кальция.

2.5.2. Приготовление стандартных растворов

Взвешивают 100 мг тралкоксидима и растворяют его в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл, получая стандартный раствор N 1 с концентрацией тралкоксидима 1 мг/мл. Берут 1 мл этого раствора в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки ацетонитрилом, получая стандартный раствор N 2. Стандартные растворы N 1 и 2 можно хранить в холодильнике в течение 3 месяцев.

Рабочие стандартные растворы тралкоксидима концентрацией 2,5; 1,25; 0,5; 0,25; 0,1; 0,05 мкг/мл готовят из стандартного раствора N 2 методом последовательного разведения ацетонитрилом. Их используют для построения калибровочного графика и фортификации образцов (внесения в образцы для оценки полноты извлечения тралкоксидима). Эти стандартные растворы можно использовать в течение 7 дней при хранении в холодильнике.

2.5.3. Приготовление подвижной фазы

Для ВЭЖХ анализа тралкоксидима используют подвижную фазу, содержащую 80% ацетонитрила и 20% воды (по объему). Перед анализом фазу дегазируют, пропуская через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин. в течение 5 мин. и помещая сосуд с фазой в ультразвуковую ванну на 1 мин.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика вводят в инжектор хроматографа последовательно 5 раз по 100 мкл каждого рабочего стандартного раствора, измеряют высоты или площади пиков, рассчитывают среднее значение высоты или их площади для каждой концентрации и строят график зависимости высоты или площади пика от концентрации тралкоксидима.

2.5.5. Кондиционирование патронов-колонок Диапак-диол и Диапак-амин

Патрон устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл, который используют как емкость для элюента. Патрон промывают два раза 3 мл гексана.

Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой экстрактов образцов со скоростью не более 2 мл/мин., не допуская высыхания поверхности патрона.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения тралкоксидима на концентрирующих патронах-колонках Диапак

2.5.6.1. Диапак-диол. Приливают в круглодонную колбу на 10 мл 1 мл стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1 мкг/мл, добавляют 3 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и наносят на кондиционированный патрон. Обмывают колбу 6 мл этой же смеси и также наносят на патрон. Элюирование проводят под вакуумом со скоростью не более 1 мл/мин. Элюат собирают в круглодонную испарительную колбу, упаривают его, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по п. 2.7, которое должно составлять около 100% от внесенного количества.

2.5.6.2. Диапак-амин. Наносят на кондиционированный патрон 1 мл стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1 мкг/мл и элюируют его 10 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Элюат собирают в испарительную колбу, упаривают, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по п. 2.7, которое должно составлять около 100% от внесенного количества.

2.6.1. Вода

Образец предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл переносят в делительную воронку на 500 мл, добавляют 30 мл 0,01 М раствора тетрабората натрия и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до объема примерно 1 мл и остатки раствора высушивают током азота. Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по п. 2.7.

2.6.2. Почва

2.6.2.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую плоскодонную колбу на 100 мл помещают навеску почвы 20 г, приливают 40 мл ацетонитрила и встряхивают в течение 45 мин. Экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "синяя лента". К остатку почвы в колбе добавляют еще 40 мл ацетонитрила и процедуру экстракции повторяют. Почву на фильтре промывают 20 мл ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту 50 мл, эквивалентную 10 г почвы, добавляют 15 мл деионизированной воды и раствор упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до водного остатка. Водный остаток количественно переносят в делительную воронку на 100 мл, добавляют 20 мл хлороформа и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции хлороформом повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С примерно до 1 мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую очистку проводят по п. 2.6.2.2.

2.6.2.2. Очистка экстрактов на патронах-колонках Диапак. Сухой остаток растворяют в 4 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и наносят на кондиционированный патрон Диапак-диол. Затем 6 мл этой же смеси обмывают колбу и также наносят на патрон. Элюат собирают, наносят на кондиционированный патрон Диапак-амин и после пропускания через патрон отбрасывают. Тралкоксидим элюируют из патрона Диапак-амин 10 мл ацетона в круглодонную испарительную колбу. Ацетоновый раствор упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до объема примерно 1 мл, который высушивают током азота. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют по п. 2.7.

Нанесение растворов на патроны и элюирование проводят под вакуумом со скоростью не более 1 мл/мин.

2.6.3. Зерно и солома

2.6.3.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую колбу на 250 мл помещают измельченный образец зерна (10 г) или соломы (5 г). Приливают 50 мл (для соломы - 80 мл) ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "синяя лента". Процедуру экстракции повторяют еще раз, и фильтруют экстракт через тот же фильтр. Растительные остатки на фильтре промывают 20 мл ацетонитрила. Экстракты объединяют, берут аликвоту - 60 мл для зерна и 90 мл для соломы, добавляют к ним 15 мл деионизированной воды и упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до водного остатка. Далее остаток подвергают центрифугированию (2 °С, 20000 об./мин., 15 мин.) и фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" в делительную воронку на 100 мл, добавляют 20 мл хлороформа и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции хлороформом повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С примерно до 1 мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую очистку проводят по п. 2.6.2.2, а анализ на хроматографе - по п. 2.7.

Содержание тралкоксидима рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук, Горбатов В.С., вед. научн. сотр., канд. биол. наук, Бондарева Т.А., научн. сотр. Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".