"МУК 4.1.1247-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств бентазона в семенах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 16.03.2003)

1. Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева; при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России.

Разработчики методик указаны в конце каждой из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.

4. Введены с 1 июля 2003 г.

5. Введены впервые.

Фирма-производитель: Август.

Торговое наименование: Корсар.

Действующее вещество: бентазон.

Структурная формула: (не приводится).

3-изопропил-1H-2,1,3-бензотиадиазин-4(3H)-он 2,2-диоксид (IUPAC)

3-(1-метилэтил)-1H-2,1,3-бензотиадиазин-4(3H)-он 2,2-диоксид (С.А.)

Молекулярная масса: 240,3.

Бесцветное кристаллическое вещество.

Температура плавления: 139,4 - 141 °С.

Давление паров при 20 °С: 0,17 мПа.

Вещество очень устойчиво к гидролизу как в кислой, так и в щелочной средах, рКа 3,3 (24 °С). Разлагается на свету.

Гигиенические нормативы. ВМДУ бентазона в сое (семена и масло) - 0,1 мг/кг.

Область применения препарата. Корсар - селективный контактный гербицид. Адсорбируется главным образом листвой. Используется для защиты зимних и весенних зерновых, бобовых и других культур.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении бентазона методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов этилацетатом или водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.

2.1.3. Избирательность метода

Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы семян хранятся до анализа в морозильной камере при температуре - 18 °С, перед проведением анализа их измельчают на лабораторной зерновой мельнице.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

2.5.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Берут точную навеску бентазона (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил - 0,02 М ортофосфорная кислота [40:60, по объему]). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

Внимание! Бентазон в растворах достаточно быстро разлагается под воздействием света, поэтому следует избегать длительного нахождения проб и стандартных растворов на свету.

При определении полноты извлечения для внесения в образец используют растворы бентазона, приготовленные из стандартного раствора последовательным разбавлением ацетонитрилом.

2.5.5. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация бентазона в растворе) в хроматограф вводят по 50 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации бентазона в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-этилацетат (20:80, по объему) и 30 мл смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.7. Проверка хроматографического поведения бентазона на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора бентазона с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 50 мл элюента N 1, затем 50 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание бентазона по п. 2.6.4.

Фракции, содержащие бентазон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.6.4. Рассчитывают содержание бентазона в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: параметры удерживания бентазона и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.5.8. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6.1. Определение бентазона в семенах сои

<**> В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб (п. 2.6.3) дает удовлетворительные результаты, дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.

2.6.2. Определение бентазона в масле сои

--------------------------------

<***> В случае образования сравнительно стойких эмульсий на стадии экстракции бентазона водным ацетоном для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку небольшое количество (до 5 мл) этилового спирта.

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. п. 2.6.1 и 2.6.2 экстрактов семян или масла сои, количественно переносят двумя 5 мл порциями смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.6). Промывают колонку 50 мл элюента N 1, которые отбрасывают. Бентазон элюируют 60 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.4. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки, или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка Symmetry - С18 (250 x 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.

Температура колонки 30 +/- 1 °С.

Предколонка Waters Symmetry С-18 для защиты аналитической колонки.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,02 М ортофосфорная кислота в соотношении 40:60 (по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 214 нм

Объем вводимой пробы: 50 мкл

Время удерживания бентазона: 12,2 +/- 0,2 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2,00 мкг/мл

2.6.5. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание бентазона в образце семян или масла сои (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, мл;

P - навеска анализируемого образца, г;

C - концентрация стандартного раствора бентазона, мкг/мл.

Содержание остаточных количеств бентазона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор бентазона 2 мкг/мл, разбавляют.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Долженко В.И., Цибульская И.А., Юзихин О.С., Короткова Н.В. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.