"МУК 4.1.1456-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Кломазона в воде, почве, зерне, соломе риса, семенах и масле сои хроматографическими методами"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: "ФМСи" (США).

Торговое название: Комманд.

Название действующего вещества по ИСО: Кломазон.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-(2-хлорбензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он или 2-(2-хлорбензил)-4,4-диметилзоксазолидин-3-он.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 239,7.

Химически чистый Кломазон представляет собой вязкую светло-коричневую жидкость с удельной массой 1,192 г/куб. см (при 20 °С) и температурой кипения 275,4 °С.

Давление паров: 19,2 мПа (при 25 °С).

Растворимость в воде при 25 °С: 1,1 г/л; в органических растворителях - хорошо смешивается: с хлороформом, ацетоном, циклогексаноном, н-гексаном, метанолом, ацетонитрилом, хлористым метиленом, толуолом, гептаном.

Устойчив при хранении; при комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50 °С - в течение 3 мес.

Период полуразложения на свету в водном растворе более 30 сут., в почве - 30 - 135 сут. (в зависимости от почвенно-климатических условий).

В России установлены следующие гигиенические нормативы для Кломазона:

ДСД - 0,04 мг/кг массы тела человека.

ОБУВ в воздухе атмосферы при применении - 1,0 мг/куб. м.

ОБУВ в воздухе рабочей зоны при применении - 1,0 мг/куб. м.

ПДК в воде водоема - 0,02 мг/л.

ПДК для воды рыбохозяйственных водоемов - 0,01 мг/л.

ПДК/ОДК в почве - не нормирован.

ВМДУ (мг/кг): рис - 0,2; рис (солома) - 0,1; соя (семена и масло) - 0,01.

Область применения препарата. Кломазон - гербицид избирательного, системного действия, блокирующий биосинтез фотосинтетических пигментов. Он хорошо проникает в растения через корни и листья и подавляет рост и развитие двудольных и злаковых сорняков в посевах сои, кукурузы, рапса, гороха и риса при довсходовом, послевсходовом или предпосевном внесении. Норма расхода гербицида - 0,35 - 0,5 кг/га по действующему веществу. В смесях с другими гербицидами (в дозах 50 - 150 г/га по д.в.) используется для борьбы с сорняками в посевах рапса, картофеля, хлопчатника и ряда бобовых культур.

Кломазон зарегистрирован в России под торговым названием Комманд, 480 г/л, к.э. и 360 г/л, МКС, в качестве гербицида для подавления однолетних двудольных и злаковых сорняков в посевах сои 0,7 - 1,0 л/га и риса 1,0 - 1,2 л/га соответственно.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на определении Кломазона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектором после его экстракции из воды и растительного материала н-гексаном, из почвы смесью ацетонитрила с водным раствором хлорида кальция, из масла сои подкисленным водным ацетонитрилом с последующей переэкстракцией в н-гексан, очистки экстракта на колонке с оксидом алюминия. Для семян сои предлагаются альтернативные методики с использованием газожидкостной или тонкослойной хроматографии.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки для ВЭЖХ и ГЖХ, а для метода ТСХ - визуального сравнения хроматографических пятен аналитического стандарта и пробы.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода приведена в таблицах 1 - 2.

2.1.3. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен и может применяться для анализа Кломазона в почве, растительном материале риса и масле сои, обрабатываемых другими пестицидами.

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы

Кломазон аналитический стандарт (FMC 57020) с содержанием 99,7% д.в.;

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74;

Аммиак водный, 25%, ч.д.а.;

Аммиак водный, ГОСТ 3760-79;

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79;

Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-06-1092-83;

Бумага универсальная индикаторная, Merck;

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72;

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78;

Кальций хлористый, pure, Art. 2388, Merck;

Кислота уксусная ледяная, ч.д.а., ГОСТ 61-75;

Кислота уксусная, х.ч., ГОСТ 61-75;

Кислота хлороводородная, 6 М раствор;

Кислота хлороводородная, х.ч., ГОСТ 3118-77;

Метанол, х.ч., ТУ 6-09-11-1643-82;

Натр едкий, ч.д.а., ГОСТ 4328-77, 20%-ный раствор;

Натрия сульфат безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76;

Неподвижные фазы для ГЖХ:

- SE-30, 5%, на Хроматоне N-AW-DMCS, зернение - 0,125 - 0,16 мм;

- OV-17, 1,5% и QF-1, 1,95%, на Хроматоне N-AW-DMCS, зернение - 0,125 - 0,16 мм, Хеманол, Чехия;

Серебра нитрат, х.ч., ГОСТ 1277-75;

Стекловата для хроматографии, Serva;

Фильтры бумажные "синяя лента" диаметром 11,0 см, обеззоленные, ТУ 6-09-1678-86.

2.2.2. Посуда и оборудование

Хроматограф жидкостный "Beckman System Gold" с ультрафиолетовым детектором "Spectroflow 757" или другой аналогичного типа;

Колонка для ВЭЖХ стальная Ultrasphere ODS (4,6 х 250 мм), 5 мкм;

Хроматограф газовый "Цвет 106" с ДПР или аналогичный;

Колонки стеклянные для ГЖХ, длина 1 и 2 м, диаметр 3 мм;

Хроматограф газовый "Кристалл-2000" с ДЭЗ и аналого-вычислительным комплексом и испарителем для капиллярной колонки или аналогичный;

Колонка капиллярная с OV-1, длина 25 м, внутренний диаметр - 0,2 мм;

Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-7, или другой аналогичного типа;

Баня водяная СН-9230 FLAWIL/SG, Buchi, или другая аналогичного типа;

Весы аналитические FX-40 A&D Company, АД-20, ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или другие аналогичного типа;

Весы лабораторные технические ВЛТК-500 или другие аналогичного типа;

Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-80;

Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 10054-75;

Воронки химические конические, ГОСТ 25336-82Е;

Иономер модель И-135, ТЗАП или другой аналогичного типа;

Испаритель ротационный Rotavapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, с водяной баней или другой аналогичного типа;

Источник УФ-света ртутно-кварцевый, ТУ 16-535-280-74, или аналогичный;

Камера хроматографическая;

Колбы Бунзена, ГОСТ 6514-74;

Колбы грушевидные (концентраторы), ГОСТ 10394-72;

Колбы конические плоскодонные вместимостью 100, 250 и 500 мл, КШП-100, КШП-250, ГОСТ 10394-72;

Колбы мерные вместимостью 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74;

Колонка хроматографическая стеклянная или пластиковая диаметром 15 мм и длиной 15 см;

Концентраторы грушевидные (конические) НШ29 КГУ-100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72;

Мельница (для размола зерна и соломы) электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная;

Микропипетки (для нанесения растворов) вместимостью 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 20292-74;

Микрошприцы Hamilton company на 50 и 100 мкл или другие аналогичного типа;

Микрошприц МШ-1И на 10 мкл или аналогичный, ГОСТ 20292-74Е;

Палочки стеклянные, ГОСТ 25336-82Е;

Пипетка цифровая автоматическая с максимальной емкостью 5 мл, Aldrich Chemical Company, Wheaton, или другая аналогичного типа;

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82Е;

Самописец модель ВД40 Kipp & Zonen или другой аналогичного типа;

Скальпель или нож;

Стаканы химические стеклянные на 100 мл, ГОСТ 6236-72;

Цилиндры мерные на 25 и 100 м, ГОСТ 1770-74Е.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79.

Пробы воды в стеклянной или инертной полиэтиленовой таре хранят при температуре 0 - 4 °С в течение не более 7 суток, для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при -18 °С. Отобранные пробы соломы и зерна риса подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при температуре 0 - 4 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года.

Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, солому и зерно риса измельчают на лабораторной мельнице. Пробы масла сои в стеклянной или инертной полиэтиленовой таре хранят при температуре 0 - 4 °С в течение не более 7 сут., для длительного хранения пробы хранятся при -18 °С.

2.4.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В колбу на 1000 мл вносят 600 мл метанола, добавляют 390 мл бидистиллированной воды и 10 мл уксусной кислоты. Полученный раствор метанол:вода:уксусная кислота (60:39:1 по объему) фильтруют и дегазируют.

2.4.2. Кондиционирование колонки

Промывают колонку для ВЭЖХ системой метанол:вода:уксусная кислота (60:39:1 по объему) в течение 30 мин. при скорости подачи подвижной фазы 1,5 мл/мин. Включают детектор и ожидают стабилизацию базовой линии (10 - 20 мин.).

2.4.3. Подготовка хроматографической колонки, заполненной оксидом алюминия, для очистки экстракта масла сои

На дно стеклянной или пластиковой хроматографической колонки помещают пробочку из стекловаты или специальный фильтр. В колонку вносят, осторожно присыпая сверху, 6 г оксида алюминия и затем осторожно вносят на поверхность адсорбента 2 г безводного сернокислого натрия. При заполнении колонки по ее стенкам слегка постукивают картонной трубкой для равномерного уплотнения (распределения) фазы.

Активацию готовой колонки проводят, пропуская 5 мл н-гексана. Смывы отбрасывают. Хроматографическую колонку плотно закрывают пробкой и хранят до использования.

2.4.4. Проверка хроматографического поведения Кломазона на колонке

При отработке методики или поступлении новой партии оксида алюминия проводят изучение поведения Кломазона на колонке.

В концентратор объемом 50 мл вносят 1 мл стандартного раствора Кломазона в гексане с концентрацией 1 мкг/мл и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 - 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и полученную смесь наносят на подготовленную (пункт 2.4.3) колонку. Затем промывают колонку 5 мл гексана и элюат отбрасывают. Кломазон элюируют с колонки последовательно 5-ю порциями объемом 5 мл каждая смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и упаривают досуха при температуре не выше 25 - 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и 100 мкл пробы вводят в хроматограф.

Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и определяют необходимый объем элюата для полного смыва Кломазона с колонки.

2.4.5. Приготовление рабочих растворов

2.4.5.1. Приготовление 0,05 н раствора хлористого кальция (гидрофилита)

2,75 г хлористого кальция переносят в мерную колбу на 1 л, добавляют 600 - 700 мл бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества и доводят водой до метки.

2.4.5.2. Приготовление 0,024 н раствора соляной кислоты

2 мл концентрированной соляной кислоты переносят в мерную колбу на 1 л, добавляют 600 - 700 мл бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества и доводят водой до метки.

2.4.5.3. Приготовление раствора "А"

50 мл метанола вносят в мерную колбу вместимостью 1 л, добавляют 600 - 700 мл 0,024 н раствора соляной кислоты, перемешивают до полного растворения вещества и доводят 0,024 н раствором соляной кислоты до метки.

2.4.6. Приготовление стандартных растворов

ВЭЖХ - 10 мг Кломазона (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют навеску в метаноле и доводят объем до метки метанолом (стандартный раствор N 1, концентрация 100 мкг/мл). Раствор хранится в холодильнике до 120 сут.

Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 раствором "А", готовят рабочие растворы Кломазона с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/мл, которые могут храниться в холодильнике не более 30 сут.

ГЖХ и ТСХ. 10 мг Кломазона (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют навеску в н-гексане и доводят объем до метки гексаном (стандартный раствор N 2, концентрация 100 мкг/мл). Раствор хранится в холодильнике до 120 сут.

ГЖХ. Методом последовательного разбавления исходного раствора N 2 гексаном готовят рабочие растворы Кломазона с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/мл, которые могут храниться в холодильнике не более 30 суток.

ТСХ. Методом последовательного разбавления исходного раствора N 2 гексаном готовят рабочие растворы Кломазона с концентрацией 5; 20 и 50 мкг/мл.

2.4.7. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика в жидкостный хроматограф вводят по 100 мкл (газожидкостный - 5 мкл) раствора Кломазона с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/мл. Проводят не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации Кломазона в растворе в мкг/мл (рис. 1 - не приводится).

2.4.8. Приготовление проявляющего реагента

Взвешивают 0,5 г нитрата серебра, переносят навеску в мерную колбу объемом 100 мл и растворяют нитрат серебра в 5 мл дистиллированной воды. После полного растворения кристаллов в колбу прибавляют 7 - 10 мл аммиака, перемешивают раствор и доводят объем до метки ацетоном. Для обработки одной пластинки берут 10 мл реагента. После обработки проявляющим реагентом хроматограмму облучают УФ-светом в течение 30 - 40 мин.

2.5.1. Вода

Образец воды объемом 100 мл фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) в делительную воронку на 250 мл, подкисляют 1 н соляной кислотой до рН 2,0 и к нему добавляют 15 мл н-гексана. Воронку встряхивают в течение 2-х минут, и после разделения слоев водную фракцию сливают в коническую колбу. Гексановую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию Кломазона из воды повторяют еще два раза, используя каждый раз по 15 мл н-гексана и встряхивая воронку две минуты. Экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С досуха. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

2.5.2. Почва

Навеску почвы 20 г (в пересчете на воздушно-сухую почву) помещают в коническую колбу на 100 мл, приливают 40 мл смеси ацетонитрила с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). Встряхивают колбу в течение 1 часа. После этого экстракт фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) методом декантации в колбу на 100 мл. Экстракцию повторяют еще раз, используя 20 мл растворителя и встряхивая в течение 20 минут. Экстракты объединяют и из объединенного экстракта отбирают аликвоту объемом 30 мл в концентратор. При температуре 55 °С, используя ротационный вакуумный испаритель, выпаривают ацетонитрил до водного остатка.

К водному остатку добавляют 1 н соляной кислоты для достижения рН 1 - 2, переносят его в делительную воронку на 100 мл и экстрагируют Кломазон н-гексаном (трижды по 20 мл), как указано выше. Объединенный гексановый экстракт собирают в концентраторе и упаривают при температуре 40 °С на вакуумном ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

2.5.3. Зерно и солома риса

Растительную пробу, измельченную в порошок на электрической мельнице (зерно - 10 г, солома - 5 г), помещают в коническую колбу на 250 мл. Приливают 50 мл н-гексана и экстрагируют при встряхивании 1 час. Экстракт фильтруют в колбу на 250 мл через безводный сульфат натрия, помещенный на двойной складчатый фильтр (синяя лента). Экстракцию повторяют с 50 мл н-гексана в течение 30 минут. Фильтр с осадком промывают дважды 5 мл н-гексана. Объединенный фильтрат переносят в концентратор и при температуре 40 °С выпаривают н-гексан досуха, используя вакуумный ротационный испаритель. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

2.5.4. Семена сои

Пробу семян сои, измельченную на мельнице массой 10 г, помещают в коническую колбу на 250 мл. Приливают 25 мл н-гексана и экстрагируют при встряхивании в течение 30 мин. Экстракт фильтруют в колбу на 250 мл через безводный сульфат натрия, помещенный на двойной складчатый фильтр (синяя лента). Экстракцию повторяют с 25 мл н-гексана в течение 30 минут. Фильтр с осадком промывают дважды 5 мл н-гексана. Объединенный фильтрат переносят в концентратор и при температуре 40 °С выпаривают н-гексан досуха, используя вакуумный ротационный испаритель.

Методы хроматографирования:

ВЭЖХ - Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

ГЖХ - Сухой остаток растворяют в 0,1 мл н-гексана и аликвоту 5 мкл вводят в газовый хроматограф.

ТСХ - Сухой остаток растворяют в 0,1 мл н-гексана и весь объем наносят на пластинку.

2.5.5. Масло сои

2.5.5.1. Экстракция Кломазона

Навеску масла сои (10 г) помещают в колбу вместимостью 250 мл, приливают 30 мл смеси ацетонитрил: 0,024 н соляная кислота (1:1) и в течение 5 мин. на аппарате для встряхивания содержимое колбы перемешивают. После расслаивания прозрачный верхний слой отфильтровывают через бумажный фильтр "синяя лента" в концентратор вместимостью 100 мл. Операцию повторяют еще два раза, используя 30 мл подкисленного водного раствора ацетонитрила (1:1) каждый раз и объединяя водно-ацетонитрильную фазу в концентраторе. Из объединенных экстрактов при 55 °С, используя ротационный вакуумный испаритель, выпаривают ацетонитрил.

Водный остаток переносят в делительную воронку, добавляют 10 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют Кломазон трижды н-гексаном, добавляя каждый раз 15 мл растворителя и встряхивая 1 мин. Водную фазу отбрасываю. Гексановые экстракты объединяют в концентраторе, пропуская через безводный сернокислый натрий, и упаривают досуха при 40 °С.

2.5.5.2. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия

Сухой остаток в концентраторе тщательно растворяют в 1,0 мл гексана и переносят на колонку. После впитывания раствора на колонку наносят 5 мл н-гексана, предварительно ополоснув им концентратор, и после прохождения через колонку фракцию отбрасывают. Промывают колонку 5 мл смеси гексан:ацетон (4:1), которые отбрасывают. Кломазон смывают с колонки последующими 10 мл смеси гексан:ацетон (4:1). Собранный элюат помещают в концентратор и упаривают досуха при температуре 45 °С.

Сухой остаток после очистки растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

Примечание: При необходимости подобную очистку можно применять при анализе зерна риса и семян сои.

2.6.1. Условия хроматографирования

2.6.1.1. ВЭЖХ

Высокоэффективный жидкостный хроматограф "Beckman System Gold" с УФ-детектором "Spectroflow 757".

Колонка стальная для ВЭЖХ Ultrasphere ODS с внутренним диаметром 4,6 мм и длиной 250 мм, зернением сорбента 5 мкм.

Абсолютное время удержания Кломазона - 9 мин.

Чувствительность: 0,01 ед. оптической плотности на шкалу.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

Минимально детектируемое количество Кломазона в анализируемом объеме - 2 нг.

Объем вводимой пробы - 100 мкл.

Подвижная фаза - метанол + вода + 1%-ный водный раствор уксусной кислоты (60:39:1 по объему).

Рабочая длина волны - 240 нм.

Скорость потока - 1,5 мл/мин.

Скорость движения ленты самописца - 1 мм/мин.

Температура колонки - комнатная.

Альтернативные условия.

Хроматограф жидкостный микроколоночный "Милихром".

Детектор спектрофотометрический.

Длина волны: 240 нм.

Микроколонка "Силасорб 600, 5 мкм, Хемапол, Чехия.

Подвижная фаза гептан или смесь гексана с ацетоном в соотношении 6:1.

Скорость потока: 200 мкл/мин.

Поддиапазон чувствительности: 3,2 А, время измерения: 0,6 с.

Скорость движения ленты самописца - 12 мм/мин.

Объем удерживания Кломазона 295 мкл.

2.6.1.2. ГЖХ с набивными колонками

Колонка стеклянная спиральная, длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм.

Носитель Хроматон-N-AW-DMCS, размер частиц 0,125 - 0,16 мм, неподвижная фаза 5% SE-30.

Скорость газа-носителя - азота (через колонку) - 60 мл/мин.

Поддув в детектор - 160 мл/мин.

Объем, вводимый в испаритель, - 5 мкл.

Линейность детектирования - 0,25 - 5 нг.

Время удерживания относительно альдрина - 0,68.

Скорость движения ленты самописца - 5 мм/мин.

Альтернативные условия

Колонка стеклянная спиральная, длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм.

Носитель Хроматон-N-AW-DMCS, размер частиц 0,125 - 0,16 мм, неподвижная фаза 1,5 % OV-17 + 1,95% QF-1.

2.6.1.3. Метод капиллярной ГЖХ

Хроматограф "Кристалл 2000" с детектором по захвату электронов и ДВК-3.

Колонка капиллярная кварцевая, длина 25 м, внутренний диаметр 0,2 мм, жидкая фаза OV-1.

Режим работы хроматографа - нормальный.

Температура термостата колонки - 175 °С.

Температура испарителя - 250 °С, детектора - 250 °С.

Относительное время удерживания Кломазона по отношению к альдрину 0,81.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют.

2.6.1.4. Метод ТСХ

Пробу 0,1 мл количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластинку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от края пластинки. Колбу с экстрактом обмывают порциями ацетона, который также наносят в центр пятна. Справа и слева наносят серию стандартных растворов Кломазона, содержащих 0,5, 2 и 5 мкг вещества.

Пластинку помещают в хроматографическую камеру, содержащую подвижную фазу: н-гексан:ацетон в соотношении 4:1 (время насыщения камеры 30 мин.). После подъема фронт подвижной фазы на 15 - 17 см пластинку извлекают из камеры, подсушивают и обрабатывают проявляющим раствором.

Пластинки для тонкослойной хроматографии:

Подвижная фаза: хлороформ:ацетон в соотношении 9:1.

Проявляющий раствор - раствор азотнокислого серебра.

Облучение УФ-светом.

Нижний предел обнаружения - 0,5 мкг.

2.6.2. Обработка результатов анализов

2.6.2.1. Методы ГЖХ и ВЭЖХ

Содержание Кломазона в пробах воды, почвы, зерна, соломы риса, семенах и масле сои при анализе методом ГЖХ и ВЭЖХ рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Кломазона 1,0 мкг/мл, разбавляют.

2.6.2.2. Метод ТСХ

Содержание Кломазона в пробах при анализе методом ТСХ рассчитывают по формуле:

где:

А - количество Кломазона, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

Р - навеска пробы, г.

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами и электронагревательными приборами.

Клисенко М.А., докт. биол. наук, профессор; Демченко В.Ф., м. н. сотр., Давидюк Е.И., инж., ВНИИГИНТОКС, лаборатория аналитической химии, г. Киев, Республика Украина.

Семена сои - ВЭЖХ, ГЖХ, ТСХ.

Спиридонов Ю.Я., зав. отделом гербологии ВНИИФ, чл. - корр. РАСХН, докт. биол. наук профессор; Ларина Г.Е., ст. науч. сотр., канд. биол. наук.

Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии, отдел гербологии. Вода, почва, зерно, зеленая масса риса и масло сои (ВЭЖХ), 2000 г.

Телефон: (8)233-41107 (из Москвы) или (096)-33-41107.

Факс: (096)33-40902.

E-mail: spiridonov@)vniif.rosmail.com.

Galina_larina@vniif.rosmail.com.

Методические указания отредактированы и подготовлены к переизданию в соответствии с новыми требованиями проф. Калининым В.А. в 2001 г.