"МУК 4.1.815-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций дибиомицина в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 30.12.1999)

Методические указания подготовлены коллективом специалистов в рамках Проблемной Комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии". Утверждены Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, Председателем Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко в декабре 1999 г.

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (сборник 35) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Методические указания разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и меньше их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в ГН 2.2.5.686-98 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.687-98 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

(Структурная формула не приводится)

М. м. 1216,1

Дибиомицин - {N,N'-дибензилэтилендиаминовая соль хлортетрациклина, или 7-хлор-4-(диметиламино)-1,4,4а,5,5а,6,11,12-октагидро-3,6,10,12,12а-пентагидрокси-6-метил-1,11-диоксо-2-нафтаненкарбоксамид, соединение с 1 N,N'-бис-(фенилметил)-1,2-этандиамином (2:1)} - кристаллическое вещество светло-коричневого цвета. Растворим в водных растворах минеральных кислот и фосфатных буферах с pH выше 7,2. Мало растворим в воде. pH насыщенного раствора 6,0 - 7,0. Не растворим в этиловом и метиловом спиртах. Ограниченно растворим в ацетонитриле. Не растворим в эфире и хлороформе. Разлагается при нагревании свыше 100 °С.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает общетоксическим действием.

ПДК в воздухе - 0,1 мг/куб м.

Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы - 0,225 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе дибиомицина - 0,05 мг/куб. м (при отборе 50 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе дибиомицина от 0,05 до 1 мг/куб. м.

Определению не мешает присутствие доксорубицина и рубомицина.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.

Время выполнения измерения, включая отбор пробы, около 30 минут.

Микроколоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором.

Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром <...> мм, заполненная сорбентом "Силасорб CN" с размером зерен <...> мкм.

Электроаспиратор ЭА-1, ОСТ 95.10052-84.

Фильтродержатель, ТУ 95-7205-77.

Микроскоп отсчетный типа МПБ-2, ТУ 3.3-824-79.

Стеклянная ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5 (или другая такого же типа).

Колбы мерные вместимостью 25, 100 мл и 1 л, ГОСТ 1770-74.

Пипетки вместимостью 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 мл, ГОСТ 10515-75.

Дибиомицин фармакопейный, содержание основного вещества не менее 98%.

Калий марганцовокислый (калий перманганат), ТУ 20490-75.

Ацетонитрил очищенный. Ацетонитрил очищенный получают из ацетонитрила, ТУ 6-09-3534-82, ч., путем ректификации с предварительной химической обработкой, которая заключается в кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л растворителя. Кипячение проводится до полного перехода перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта N 4. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 81,6 °С (атмосферное давление) в пределах колебаний +/- 0,1 °С.

0,067 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 23,986 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л.

0,067 М раствор калийфосфата готовят растворением 9,078 г калия фосфорнокислого однозамещенного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л.

0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2) готовят смешивая 720 мл 0,067 М раствора динатрийфосфата и 280 мл 0,067 М раствора калий фосфата.

Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца.

Растворитель: 0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2).

Элюент: 0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2) - ацетонитрил (7:1).

Стандартный раствор N 1 с концентрацией дибиомицина 500 мкг/мл готовят растворением 0,05 г дибиомицина в растворителе в мерной колбе вместимостью 100 мл.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией дибиомицина 10 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 растворителем. Растворы устойчивы в течение суток.

Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 85-743-80.

Воздух с объемным расходом 5 мл/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 0,5 ПДК достаточно отобрать 50 л воздуха.

Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Хроматографическая колонка промышленного изготовления.

Количественный анализ проводят методом абсолютной калибровки с использованием градуировочных растворов, которые готовят с концентрацией от 0,0005 до 0,01 мкг/мкл путем соответствующего разбавления стандартного раствора N 2 растворителем.

Растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике в закрытых сосудах.

Инжектируют в хроматограф от 0,225 до 4,5 мкг дибиамицина. Для этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл растворителя, затем 150 мкл градуировочного раствора и наносят набранные 250 мкл на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза, после чего наносят еще 150 мкл хроматографируемого раствора и включают подачу элюента.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков (кв. мм) от содержания дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы (мкл).

Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочных графиков следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл растворителя и оставляют на 15 минут при комнатной температуре и периодическом помешивании. Степень десорбции с фильтра дибиомицина - не менее 96,5%.

450 мкл анализируемого раствора инжектируют в колонку хроматографа. Для этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл растворителя, затем 150 мкл раствора и наносят набранные 250 мкл на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза, после чего наносят еще 150 мкл раствора и включают подачу элюента.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тем же элюентам, что и при построении градуировочных графиков.

Количественное определение содержания дибиомицина в хроматографируемом объеме проводят по соответствующему предварительно построенному градуировочному графику.

Концентрацию дибиомицина "С" в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где:

а - содержание дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятый для анализа, мл;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле: