"МУК 4.1.0.374-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Фотометрическое измерение концентраций каталазы в воздухе рабочей зоны. Методические указания"
(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)

1. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) утверждены и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.

3. Введены впервые.

4. Включенные в данный выпуск методики контроля разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТа 12.1.016-79. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ", ГОСТа Р 1.5-92, п. 7.3, ГОСТа 8.101-90 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений". Методические указания одобрены комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию госкомсанэпиднадзора России и Проблемной комиссией "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также заинтересованных министерств и ведомств.

Ответственный исполнитель: Г.А. Дьякова.

Исполнители: Г.А. Дьякова, Л.Г. Макеева, Е.М. Малинина, С.М. Попова, Н.С. Горячев, М.И. Аржанова, Т.В. Рязанцева, Е.Н. Грицун.

Каталаза представляет собой темно-зеленый кристаллический порошок. Оптимальные условия проявления ферментативной активности: Т - 35 - 45 °C; pH - 6,0 - 7,0. Хорошо растворима в воде.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Является малоопасным веществом, обладает умеренным кумулятивным и слабым раздражающим действием.

ПДК в воздухе - 5 мг/куб. м.

Метод основан на реакции взаимодействия остаточных количеств пероксида водорода (после взаимодействия фермента) с молибдатом аммония и последующим фотометрическим измерением окрашенного продукта реакции при длине волны лямбда = 415 нм. Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме - 0,5 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе - 0,5 мг/куб. м (при отборе 5 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций от 0,5 до 50 мг/куб. м.

Измерению мешают: неорганические вещества, содержащие фосфор, а также азид, гидроксиламид, цианистый водород.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 10%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, - 50 мин.

Стандартный раствор каталазы. 10 мг каждого стандартного образца препарата с различной активностью растворяют в 100 мл дистиллированной воды. При отсутствии набора стандартов каталазы различной активности стандартные растворы соответствующей активности готовят из раствора фермента в 1000 единиц активности, разводя этот раствор в 200; 40; 20; 10; 5; 2,5; 2,0 раза. Для анализа берут по 0,1 мл каждого раствора, что соответствует 0,5; 2,5; 5,0; 10; 20; 40 и 50 ед. активности.

Воздух с объемным расходом 5 л/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", закрепленный в фильтродержателе. Для измерения 0,5 ПДК следует отобрать не более 5 л воздуха.

Пробы могут сохраняться в течение 7 дней в холодильнике.

Градуировочные растворы (устойчивы 2 часа) готовят согласно таблице.

Для построения градуировочного графика исходные растворы смешивают и прогревают 1 мин. при 37 °C, затем добавляют пероксид водорода и инкубируют 3 мин. при 37 °C (pH 6,8). Реакцию останавливают внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты, затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления растворы перемешивают. Через 20 мин. измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 415 нм. Измерение оптической плотности растворов проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения, не содержащего каталазу. Искомую оптическую плотность градуировочных растворов находят по разности оптических плотностей раствора сравнения и анализируемого раствора.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения разности оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им концентрации препарата в мкг с известной активностью.

Проверку градуировочного графика проводят 1 раз в месяц или в случае использования новой партии реактивов.

Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, заливают 5 мл дистиллированной воды и оставляют на 10 мин., периодически перемешивая. Полученный раствор прогревают при 37 °C в течение 1 мин. Затем добавляют 1 мл 3%-ного раствора пероксида водорода и инкубируют 3 мин. при 37 °C (pH 6,8). Останавливают реакцию внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты. Затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления реактива следует хорошо перемешать смесь. Через 20 мин. измеряют оптическую плотность полученного анализируемого раствора по сравнению с контрольным раствором, которым является вытяжка с чистого фильтра, обработанная одновременно и аналогично пробе. Искомую оптическую плотность пробы находят по разности оптических плотностей контрольного и анализируемого растворов.

Количественное определение концентрации каталазы в анализируемой пробе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Концентрацию вещества (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где:

а - содержание каталазы в анализируемом объеме пробы, мкг;

в - объем раствора пробы, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Методические указания разработаны Киевским госуниверситетом, Украина.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °C и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле: