"МУК 4.1.0.358-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Фотометрическое измерение концентраций глюкозооксидазы в воздухе рабочей зоны. Методические указания"
(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)

1. Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) утверждены и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.

3. Введены впервые.

4. Включенные в данный выпуск методики контроля разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТа 12.1.016-79. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ", ГОСТа Р 1.5-92, п. 7.3, ГОСТа 8.101-90 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений". Методические указания одобрены комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Госкомсанэпиднадзора России и Проблемной комиссией "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 32) предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также заинтересованных министерств и ведомств.

Ответственный исполнитель: Г.А. Дьякова.

Исполнители: Г.А. Дьякова, Л.Г. Макеева, Е.М. Малинина, С.М. Попова, Н.С. Горячев, М.И. Аржанова, Т.В. Рязанцева, Е.Н. Грицун.

Ферментный препарат глюкозооксидазы

Глюкозооксидаза представляет собой желтый кристаллический порошок. Оптимальные условия проявления ферментативной активности: Т - 30 - 35 °C; pH - 5,8 - 6,0. Хорошо растворим в воде.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Является малоопасным веществом, обладает умеренным кумулятивным и слабым раздражающим действием.

ПДК в воздухе - 2,0 мг/куб. м.

Метод основан на реакции взаимодействия остаточных количеств пероксида водорода (после воздействия фермента на глюкозу) с молибдатом аммония и последующим фотометрическим измерением окрашенного продукта реакции при длине волны лямбда = 415 нм. Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме - 0,5 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе - 0,2 мг/куб. м (при отборе 2,5 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций от 0,2 до 20 мг/куб. м.

Измерению мешают: неорганические вещества, содержащие фосфор, а также азид, гидроксиламин, цианистый водород.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 10%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, - 50 мин.

Стандартный раствор глюкозооксидазы. 10 мг каждого стандартного образца препарата с различной активностью растворяют в 100 мл дистиллированной воды. При отсутствии набора стандартов глюкозооксидазы различной активности стандартные растворы соответствующей активности готовят из раствора фермента в 1000 единиц активности, разводя этот раствор в 200; 40; 20; 10; 5; 2,5; 2,0 раза. Для анализа берут по 0,1 мл каждого раствора, что соответствует 0,5; 2,5; 5,0; 10; 20; 40 и 50 ед. активности.

Натрий-ацетатный буферный раствор готовят смешиванием 0,5 мл 1 н уксусной кислоты и 9,5 мл ацетата натрия - 1 г в 100 мл.

Воздух с объемным расходом 1 л/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", закрепленный в фильтродержателе. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 2,5 л воздуха.

Пробы могут сохраняться в течение 7 дней в холодильнике.

Градуировочные растворы (устойчивы 2 часа) готовят согласно таблице.

Для построения градуировочного графика исходные растворы смешивают и прогревают 1 мин. при 30 °C, затем добавляют 1 мл 33%-ного раствора глюкозы и инкубируют 3 - 5 мин. при 30 °C (pH 5,8). Реакцию останавливают внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты, затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления растворы перемешивают. Через 20 мин. измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 415 нм. Измерение оптической плотности растворов проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения, не содержащего глюкозооксидазу.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им концентрации препарата (в мкг) с известной активностью.

Проверку градуировочного графика проводят 1 раз в месяц или в случае использования новой партии реактивов.

Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, заливают 5 мл дистиллированной воды и оставляют на 10 мин., периодически перемешивая. Отжимают фильтр стеклянной палочкой, фильтрат переносят в пробирку, доводят объем до 5 мл.

Полученный раствор прогревают при 30 °C в течение 1 мин. Затем добавляют 1 мл 33%-ного раствора глюкозы и инкубируют 3 - 5 мин. при 30 °C (pH 5,8). Останавливают реакцию внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты. Затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления реактива следует хорошо перемешать смесь. Через 20 мин. измеряют оптическую плотность полученного анализируемого раствора по сравнению с контрольным раствором, которым является вытяжка с чистого фильтра, обработанная одновременно и аналогично пробе.

Количественное определение концентрации глюкозооксидазы в анализируемой пробе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

При определении активности глюкозооксидазы в присутствии каталазы, последнюю инактивируют. Для этого к 4,5 куб. см испытуемого комплексного ферментного раствора, содержащего не более 50 ед./куб. см каталазы, прибавляют 0,5 куб. см 1 н раствора муравьиной кислоты (в конечной концентрации 0,1 н) и определяют активность глюкозооксидазы описанным выше методом.

Концентрацию вещества (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где:

а - содержание глюкозооксидазы в анализируемом объеме пробы, мкг;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Методические указания разработаны Киевским госуниверситетом, Украина.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °C и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле: