"МУК 4.1.3841-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации (+/-)-1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси)метил]фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино]-2-пропанола фумарата (2:1) (соль) (бисопролола фумарат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 18.01.2023)

1. Разработаны АО "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (М.И. Голубева, Л.И. Крымова), ООО "НАНОЛЕК" (Е.И. Терентьева, И.С. Перминова, М.Б. Хомяков), ФГБНУ "Научно-исследовательский институт медицины труда им. академика Н.Ф. Измерова" (Л.Г. Макеева).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 18 января 2023 г.

3. Введены впервые.

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 205-07/RA.RU.311787/2020.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,005 - 0,05 мг/м³.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области качества и безопасности воздуха рабочей зоны по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Физико-химические свойства бисопролола фумарата.

Эмпирическая формула: [C₁₈H₃₁NO₄]₂·C₄H₄O₄.

Молекулярная масса: 766,958.

Регистрационный номер CAS: 104344-23-2.

Бисопролола фумарат - белый или почти белый кристаллический порошок с температурой плавления плюс 100 - 105 °C, растворим в воде, этаноле, метаноле, диметилсульфоксиде.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика бисопролола фумарата:

- гипотензивное, антиангинальное, антиаритмическое средство, высокоактивный кардиоселективный длительного действия, при передозировке наблюдается брадикардия, артериальная гипотензия, сердечная недостаточность;

- умеренно опасен при введении внутрь, кумулятивная активность слабая, обладает общетоксическим действием.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации бисопролола фумарата метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

4.1. Измерение массовой концентрации бисопролола фумарата выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Метод основан на разделении бисопролола фумарата и других компонентов анализируемой смеси на хроматографической колонке, заполненной сорбентом с последующей регистрацией бисопролола фумарата с помощью ультрафиолетового детектора. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации бисопролола фумарата.

Измерение проводят при длине волны 225 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое содержание бисопролола фумарата в анализируемом объеме пробы - 0,04 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе - 0,005 мг/м³ (при отборе 800 дм³ воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе бисопролола фумарата. Измерению не мешают: кальция гидрофосфат безводный, крахмал кукурузный, кремния диоксид коллоидный, целлюлоза микрокристаллическая, кросповидон, магния стеарат, гипромеллоза, макрогол 400.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

Примечание. Допускается применение оборудования, вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <6>.

--------------------------------

<6> Таблицы 2.1 и 2.2 СанПин 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и/или безвредности для человека факторов среды обитания", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021 регистрационный N 62296).

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.2. Приготовление основного раствора бисопролола фумарата: основной раствор бисопролола фумарата с массовой концентрацией 500 мкг/см³ готовят растворением (0,0500 +/- 0,0002) г бисопролола фумарата в спирте метиловом в мерной колбе вместимостью 100 см³. Срок хранения раствора 2 недели в холодильнике.

9.3. Приготовление рабочего раствора бисопролола фумарата N 1: рабочий раствор бисопролола фумарата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/см³ готовят разбавлением 10,0 см³ основного раствора бисопролола фумарата спиртом метиловым в мерной колбе вместимостью 50 см³. Срок хранения раствора 1 неделя в холодильнике.

9.4. Приготовление рабочего раствора бисопролола фумарата N 2: рабочий раствор бисопролола фумарата N 2 с массовой концентрацией 20 мкг/см³ готовят разбавлением 10,0 см³ рабочего раствора бисопролола фумарата N 1 спиртом метиловым в мерной колбе вместимостью 50 см³. Срок хранения раствора 1 сутки в холодильнике.

Примечание. Растворы бисопролола фумарата следует предохранять от света путем обертывания мерных колб алюминиевой фольгой или используя посуду из темного стекла.

9.5. Приготовление подвижной фазы A: 0,8%-й раствор ортофосфорной кислоты в воде особо чистой: в мерную колбу вместимостью 2000 см³, наливают 1400 см³ воды особо чистой, с помощью пипетки вместимостью 25 см³ добавляют 11,8 см³ ортофосфорной кислоты 85% и перемешивают, доводят водой особо чистой до метки и снова перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 месяц в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в холодильнике.

9.6. Приготовление подвижной фазы B: 0,8%-й раствор ортофосфорной кислоты в ацетонитриле: в мерную колбу вместимостью 2000 см³ наливают 1400 см³ ацетонитрила, с помощью пипетки вместимостью 25 см³ добавляют 11,8 см³ ортофосфорной кислоты 85% и перемешивают, доводят объем ацетонитрилом до метки и снова перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 месяц в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в холодильнике.

9.7. Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.8. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной градуировки по шести сериям измерений по семи концентрациям вещества в каждой серии и контрольного раствора N 0 согласно табл. 2.

На аэрозольные фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 см³ наносят рабочий раствор бисопролола фумарата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/см³ и рабочий раствор бисопролола фумарата N 2 с массовой концентрацией 20 мкг/см³ в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5,0 см³, приливают по 5,0 см³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в мерные пробирки вместимостью 10 см³. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же пробирки и доводят объем до 10,0 см³ спиртом метиловым. Далее растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографические виалы. Аналогично обрабатывается чистый аналитический аэрозольный фильтр (контрольный раствор).

Инжектируют в хроматограф по 0,1 см³ каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочных растворов (мкг).

9.9. Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб:

- подвижная фаза A (далее - ПФ A) - 0,8% раствор ортофосфорной кислоты в воде особо чистой;

- подвижная фаза B (далее - ПФ B) - 0,8% раствор ортофосфорной кислоты в ацетонитриле;

- время удерживания бисопролола фумарата не менее (22,0 +/- 1,0) мин.

9.10. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества по п. 9.8 (соответствующих началу, середине и концу диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

где S_изм, S_гр - значение площади пика (приборные единицы) бисопролола фумарата в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;

К_гр - норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное хроматографирование этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика не стабильна и условие (1) не выполняется для двух или более образцов градуировочных растворов, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов (табл. 2) для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

9.11. Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ 12.1.005 и приложением 9 к Р 2.2.2006-05.

Одновременно отбирают две пробы. При отборе проб фиксируется температура воздуха и атмосферное давление.

Воздух аспирируют через аналитический аэрозольный фильтр с площадью рабочей поверхности 20 см², помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации бисопролола фумарата на уровне 0,005 мг/м³ отбирают не менее 800 дм³ воздуха в течение 8 минут. Срок хранения отобранных проб в бюксах в течение суток в холодильнике.

10.1. Аэрозольный фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и с помощью пипетки вместимостью 5 см³ приливают 5,0 см³ спирта метилового, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в мерную пробирку вместимостью 10 см³. Фильтр повторно обрабатывают 5,0 см³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, помешивая стеклянной палочкой, фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Раствор сливают в ту же пробирку, объем раствора доводят до 10 см³ спиртом метиловым. Далее раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу.

Хроматографический анализ проб выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой анализируемой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы.

Устанавливают содержание бисопролола фумарата (а в мкг) в анализируемом объеме пробы по градуировочной характеристике (п. 9.8).

Примечание. Фильтрование проб проводится для удаления нерастворимых в спирте метиловом вспомогательных веществ, входящих в состав препаративных форм бисопролола фумарата.

11.1. Массовую концентрацию бисопролола фумарата в воздухе рабочей зоны C, мг/м³, вычисляют по формуле:

где а - содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

B - общий объем раствора пробы, см³;

б - анализируемый объем раствора пробы, см³;

V₂₀ - объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к условиям в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.), дм³ (приложение 1 к настоящим методическим указаниям).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

где C₁, C₂ - результаты параллельных определений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе, мг/м³;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

12.1. Результат количественного химического анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м³;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация бисопролола фумарата менее 0,005 мг/м³ (более 0,05 мг/м³)".

13.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сравнительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD_0,95 по формуле:

где C_ср1, C_ср2 - средние значения массовой концентрации бисопролола фумарата, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м³;

CD_0,95 - значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в п. 5.3.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

При разногласиях руководствуются в п. 5.3.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

13.2. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показатель правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Приведение объема воздуха, отобранного для анализа, в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.), дм³:

где V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, дм³;

P - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2 к настоящим МУК). Для приведения воздуха к температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферному давлению 101,33 кПа надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.

Коэффициенты для приведения объема воздуха, отобранного для анализа, в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.).