"МУК 4.1.4008-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации хондроитина сульфата натрия в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)

1. Разработаны АО "ВНЦ БАВ" (М.И. Голубева, Л.И. Крымова, Э.А. Федорова); АО Нижфарм" (Н.В. Каменская, Ю.Р. Удалова).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 19 февраля 2024 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) описывают порядок применения метода спектрофотометрии для измерений массовой концентрации хондроитина сульфата натрия в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 1,0 - 5,0 мг/м³.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Физико-химические свойства хондроитина сульфата натрия.

Эмпирическая формула: H₂O(C₁₄H₁₉NNa₂O₁₄S)n.

Молекулярная масса: (503,4) n (15000 - 30000 Da).

Регистрационный номер CAS: 9082-07-09.

Хондроитин сульфата натрия - белый или почти белый аморфный порошок с температурой плавления более плюс 205 °C, гигроскопичен, легко растворим в воде, практически нерастворим в спирте и ацетоне.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика хондроитина сульфата натрия:

- высокомолекулярный мукополисахарид, хондростимулирующее, регенерирующее, противовоспалительное и анальгезирующее средство;

- малоопасен при поступлении внутрь, не раздражает слизистые оболочки глаза и кожные покровы, не оказывает кожно-резорбтивного и сенсибилизирующего действия.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа <1> и методики, изложенной в настоящих МУК, при выполнении измерений массовой концентрации хондроитина сульфата натрия метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 3.1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

--------------------------------

<1> ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

4.1. Измерение массовой концентрации хондроитина сульфата натрия выполняют методом спектрофотометрии. Метод основан на взаимодействии хондроитина сульфата натрия с карбазолом в кислой среде с образованием окрашенных в розово-фиолетовый цвет продуктов реакции и измерении относительной оптической плотности полученных растворов.

Измерение проводят при длине волны 530 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое содержание хондроитина сульфата натрия в анализируемом объеме пробы - 10 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации хондроитина сульфата натрия в воздухе - 1 мг/м³ (при отборе 100 дм³ воздуха).

Метод специфичен в условиях производства лекарственных препаратов, содержащих хондроитин сульфата натрия. Измерению не мешают вещества: натрия дисульфит, мелоксикам, гидроксиэтилцеллюлоза, целлюлоза микрокристаллическая, ланолин, вазелин, моноглицериды дистиллированные, пропиленгликоль, цетостеариловый спирт, повидон-К30, магния гидроксикарбоната пентагидрат, кальция стеарата моногидрат.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <2>.

--------------------------------

<2> Таблицы 2.1, 2.2 СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания", утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021, регистрационный N 62296), с изменениями, внесенными постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 30.12.2022 N 24 (зарегистрировано Минюстом России 09.03.2023, регистрационный N 72558).

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на спектрофотометр.

6.4. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на спектрофотометре, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха плюс (20 +/- 5) °C;

- атмосферное давление 84 - 106 кПа;

- относительная влажность воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.2. Приготовление растворов.

9.2.1. Приготовление основного раствора хондроитина сульфата натрия: основной раствор хондроитина сульфата натрия с массовой концентрацией 2000 мкг/см³ готовят растворением (0,2000 +/- 0,0002) г хондроитина сульфата натрия в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 см³. Срок хранения раствора - трое суток в защищенном от света месте в холодильнике при температуре от плюс 2 до плюс 8 °C.

Примечание: При необходимости в расчет навески вносят поправку на массовую долю основного вещества.

9.2.2. Приготовление рабочего раствора хондроитина сульфата натрия: рабочий раствор хондроитина сульфата натрия с массовой концентрацией 500 мкг/см³ готовят разбавлением 12,5 см³ основного раствора хондроитина сульфата натрия в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 50 см³. Раствор используется свежеприготовленным.

9.2.3. Приготовление 0,1%-го раствора карбазола: навеску карбазола в количестве 0,1 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³ и растворяют в спирте этиловом 96%-м. Срок годности раствора - 1 месяц при хранении в защищенном от света месте.

9.3. Подготовка спектрофотометра.

9.3.1. Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.4. Установление градуировочной характеристики.

9.4.1. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость относительной оптической плотности раствора от содержания хондроитина сульфата натрия в анализируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по шести сериям измерений, состоящим из шести концентраций вещества в каждой серии, и контрольному раствору N 0 согласно табл. 9.1.

На аэрозольные фильтры, помещенные в стаканчики для взвешивания, пипеткой вместимостью 1 см³ наносят основной раствор хондроитина сульфата натрия с массовой концентрацией 2000 мкг/см³ и рабочий раствор хондроитина сульфата натрия с массовой концентрацией 500 мкг/см³ в соответствии с табл. 9.1. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и пипеткой вместимостью 5,0 см³, приливают по 5,0 см³ дистиллированной воды и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в мерные пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 см³. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см³ дистиллированной воды, оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же мерные пробирки и доводят объем в пробирках до 10,0 см³ дистиллированной водой. Аналогично обрабатывается чистый аналитический аэрозольный фильтр (контрольный раствор N 0, табл. 9.1).

Заранее приготавливают лед для охлаждения химических пробирок с растворами и колбы с серной кислотой в ледяной бане.

В коническую колбу вместимостью 250 см³ цилиндром вместимостью 100 см³ вносят 100 см³ концентрированной серной кислоты. Колбу с серной кислотой помещают в ледяную баню и охлаждают в течение 30 минут, периодически перемешивая.

В химические пробирки пипеткой вместимостью 1 см³ вносят по 1 см³ каждого градуировочного раствора согласно табл. 9.1. Для приготовления контрольного раствора в химическую пробирку вносят 1 см³ дистиллированной воды. Пробирки помещают в ледяную баню на 30 минут. По истечении 30 минут пробирки с растворами извлекают из ледяной бани, в каждую пробирку пипеткой вместимостью 10 см³ вносят по 6 см³ охлажденной концентрированной серной кислоты и перемешивают. Содержимое пробирок доводят до комнатной температуры в течение 1 часа и помещают в кипящую водяную баню на 20 минут. Затем пробирки с растворами извлекают из водяной бани, охлаждают до комнатной температуры в течение 1 часа и в каждую пробирку пипеткой вместимостью 1 см³ вносят по 0,2 см³ 0,1%-го раствора карбазола в этиловом спирте 96%-м (п. 9.2.3) и перемешивают. Полученные растворы выдерживают при комнатной температуре в течение часа, тщательно перемешивая их каждые 15 минут. В процессе реакции растворы приобретают розово-фиолетовую окраску.

Измеряют относительную оптическую плотность окрашенных в розово-фиолетовый цвет растворов. Окраска растворов устойчива в течение двух часов.

Относительную оптическую плотность градуировочных растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 530 нм по отношению к контрольному раствору, не содержащему хондроитина сульфата натрия (табл. 9.1, раствор N 0).

По полученным данным строят градуировочную характеристику: на ось ординат наносят средние значения относительных оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им величины содержания хондроитина сульфата натрия в мкг.

Примечание: При выполнении измерений в соответствии с данной методикой используют отдельный набор химической посуды. Вымытую посуду следует тщательно ополаскивать дистиллированной водой многократно, не менее 10 раз. Появление в процессе анализа голубого или зеленого окрашивания раствора может свидетельствовать о загрязненности химической посуды или использовании некачественной серной кислоты.

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

9.5.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности в качестве образца используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовыми концентрациями хондроитина сульфата натрия (п. 9.4.1), соответствующими началу, середине и концу диапазона измерений, которые анализируют в соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):

где: D_изм, D_гр - значение относительной оптической плотности образца для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике;

K_гр - норматив контроля, который определяется по формуле (2):

где: U, % - значение относительной расширенной неопределенности при коэффициенте охвата к = 2 (табл. 3.1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение относительной оптической плотности этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика не стабильна (условие (1) не выполняется для двух или более образцов градуировочных растворов), выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов (табл. 9.1) для установления градуировочной характеристики, предусмотренной методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

9.6. Отбор проб воздуха.

9.6.1. Отбор проб проводят в соответствии с методическими документами <3>.

--------------------------------

<3> ГОСТ 12.1.005 "Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны", утвержденный и введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 N 3388; приложение 9 к Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда", утвержденное Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005.

Отбор проб должен проводиться в зоне дыхания при характерных производственных условиях.

Одновременно отбирают две пробы. При отборе проб регистрируют температуру воздуха и атмосферное давление.

Воздух с объемным расходом 10 дм³/мин аспирируют через аналитический аэрозольный фильтр с площадью рабочей поверхности 10 см², помещенный в фильтродержатель. Для определения массовой концентрации хондроитина сульфата натрия на уровне 1,0 мг/м³ (1/2 ориентировочного безопасного уровня воздействия (ОБУВ) отбирают не менее 100 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб в стаканчиках для взвешивания - трое суток в защищенном от света месте в холодильнике при температуре от плюс 2 до плюс 8 °C.

10.1. Аэрозольный фильтр с отобранной пробой помещают в стаканчик для взвешивания и пипеткой вместимостью 5 см³ приливают 5,0 см³ дистиллированной воды, периодически помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут для лучшего растворения вещества. Затем аэрозольный фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в мерную пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 10 см³ через воронку с бумажным фильтром. Аэрозольный фильтр повторно обрабатывают 5,0 см³ дистиллированной воды и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Раствор сливают через тот же бумажный фильтр в ту же мерную пробирку вместимостью 10 см³, объединяя растворы. Объем раствора в пробирке доводят до 10 см³ водой дистиллированной и далее анализ проводят аналогично градуировочным растворам.

Относительную оптическую плотность полученной анализируемой пробы измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 530 нм по отношению к контрольному раствору, полученному при обработке чистого аэрозольного фильтра.

Устанавливают содержание хондроитина сульфата натрия (а, мкг) в анализируемом объеме пробы по градуировочной характеристике (п. 9.4.1).

Примечание. Фильтрование растворов проб проводят для удаления нерастворимых в дистиллированной воде веществ, входящих в состав лекарственных форм, содержащих хондроитин сульфата натрия.

11.1. Массовую концентрацию хондроитина сульфата натрия в воздухе рабочей зоны C, мг/м³, вычисляют по формуле (3):

где: а - содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

в - общий объем пробы, см³;

б - анализируемый объем пробы, см³;

V₂₀ - объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к условиям в соответствии с методическими документами <4> при температуре плюс 293 К (20 °C) и атмосферном давлении 101,3 кПа (760 мм рт. ст.), дм³ (приложение 1, 2 к настоящим МУК).

--------------------------------

<4> ГОСТ 8.395 "Нормальные условия измерений при поверке. Общие требования", введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 28.07.1980 N 3853.

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (4):

где: C₁, C₂ - результаты параллельных определений массовой концентрации хондроитина сульфата натрия в воздухе рабочей зоны, мг/м³;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 3.1).

Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

12.1. Результат количественного химического анализа представляют в виде формулы (5):

где: - среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м³;

U, % - относительная расширенная неопределенность измерений при коэффициенте охвата к = 2 (табл. 3.1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "Массовая концентрация хондроитина сульфата натрия менее 1,0 мг/м³ (более 5 мг/м³)".

13.1. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят:

- при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

- при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сравнительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD_0,95 по формуле (6):

где C_ср1, C_ср2 - средние значения массовой концентрации хондроитина сульфата натрия, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м³;

CD_0,95 - значение критической разности, % (табл. 3.1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение.

Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, предусмотренные методическими документами <5>.

--------------------------------

<5> Пункт 5.3.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

При разногласиях руководствуются методическими документами <6>.

--------------------------------

<6> Пункт 5.3.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

13.2. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории.

13.2.1. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют в соответствии с методическими документами <7>, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости <8> и показателя правильности <9>.

--------------------------------

<7> ГОСТ Р ИСО 5725-6.

<8> Пункт 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

<9> Пункт 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

1.1. Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре плюс 293 К (20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.) по формуле (7):

где: V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, дм³;

P - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V₂₀ используется таблица коэффициентов (приложение 2 к настоящим МУК). Для приведения воздуха к стандартным условиям умножают V_t на соответствующий коэффициент.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания".

3. Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда".

4. ГОСТ 12.1.005 "Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

6. ГОСТ 8.395 "Нормальные условия измерений при поверке. Общие требования".

7. ГОСТ OIML R 76-1-2011 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

8. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

9. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

10. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

11. ГОСТ 12.4.009 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

12. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

13. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

14. ГОСТ Р 58144 "Вода дистиллированная. Технические условия".

15. ГОСТ Р 56389 "Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья "Классический". Технические условия".

16. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

17. ГОСТ 14262 "Кислота серная особой чистоты".