"Изменение N 1 ГОСТ 28178-89 "Дрожжи кормовые. Методы испытаний"
(утв. и введено в действие Постановлением Госстандарта СССР от 28.06.1991 N 1184)

Раздел 4. Первый абзац. Исключить слово: "или".

Пункты 6.1, 9.1, 10.1. Первый абзац изложить в новой редакции: "Весы лабораторные технические любого типа".

Пункт 6.1. Седьмой абзац. Заменить обозначение: 1-21 на 1-25;

тринадцатый абзац. Заменить обозначение: ХТП на ХПТ (2 раза);

дополнить абзацем (после двадцать третьего): "Бумага индикаторная универсальная";

двадцать седьмой абзац. Заменить обозначение: х.д.а. на ч.д.а.

Пункт 6.2.1 дополнить абзацем (после второго): "Катализатор 3. Смешивают 10 весовых частей сернокислой меди, 100 весовых частей сернокислого калия, смесь тщательно растирают в ступке до получения однородного мелкозернистого порошка".

Пункт 6.3.1. Первый абзац. Заменить значение: (0,5 +/- 0,2) на (0,5 +/- 0,02);

четвертый абзац. Заменить значение: 24 на 25;

дополнить абзацем (после пятого): "Способ 3. Добавляют в колбу 8 г катализатора. После прибавления катализатора осторожно приливают 15 см3 концентрированной серной кислоты".

Пункт 6.3.2 дополнить абзацем: "Допускается для отгонки аммиака применение приборов, изготовленных в соответствии с черт. 1 из других аналогичных деталей с соединением этих деталей на резиновых пробках и с помощью полиэтиленовых трубок. Конец отгонки аммиака проверяют с помощью индикаторной бумаги".

Пункт 6.3.2.1. Первый абзац после слов "отгонки аммиака" дополнить словами: "Допускается отгонку аммиака проводить из колбы Кьельдаля вместимостью 500 см3";

дополнить абзацем (после второго): "Допускается прибавлять раствор гидроокиси натрия до присоединения отгонной колбы к аппарату. В этом случае раствор гидроокиси натрия добавляют в отгонную колбу по стенке, стараясь перемешивать его с минерализатом. После добавления всего объема колбу сразу соединяют с аппаратом для отгонки аммиака";

последний абзац. Заменить слова: "50 - 75 см выше уровня жидкости" на "50 - 70 см3 жидкости. Окончание отгонки аммиака проверяют с помощью индикаторной бумаги".

Пункт 8.1 дополнить абзацем (после третьего): "Колбонагреватель любого типа, обеспечивающий постоянство температуры (100 +/- 2) °C";

четвертый абзац изложить в новой редакции: "Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр любого типа, обеспечивающий измерение в области 530 - 545 нм";

седьмой абзац. Заменить обозначение: ХТП на ХПТ (2 раза);

восьмой абзац после слова "круглодонная" дополнить словами: "К-1-1000-29/32 ТС или";

десятый абзац исключить;

одиннадцатый абзац после обозначения Гр-25-14/23 ТС дополнить словами: "или колба остродонная ОГ-2-50-14/23 ТС, или ОГ-3-25-14/23 ТС, или круглодонная К-1-25-14/23 ТС";

дополнить абзацем (после тринадцатого): "Насадки типа Н1-14/23-14/23-14/23 ТС или Н2-14/23-14/23 ТС по ГОСТ 25336";

двадцатый абзац. Заменить слова: "вместимостью не менее 20 мкл" на "или автоматические пипетки любого типа вместимостью 10 - 50 мкл";

двадцать восьмой абзац. Заменить обозначение: ч.д.а. на "или технический";

тридцать второй абзац после слова "моногидрохлорид" дополнить словами: "или дигидрохлорид";

дополнить абзацем (перед последним): "Кальций оксид (окись кальция) по ГОСТ 8677, ч.".

Пункт 8.2.1. Последний абзац изложить в новой редакции: "Первый отгон - абсолютированный спирт - хранят в сосуде с закрытой пробкой"; дополнить абзацем: "Допускается абсолютирование спирта проводить другими способами, установленными в нормативно-технической документации".

Пункт 8.2.2. Первый абзац. Заменить слова: "состоящем из грушевидной двугорлой колбы" на "состоящем из грушевидной или остродонной, или круглодонной колбы"; после слов "при температуре 60 - 70 °C" дополнить словами: "или на колбонагревателе при температуре не выше 95 °C".

Пункт 8.2.3. Первый абзац. Заменить значение: (0,0065 +/- 0,0005) на (0,065 +/- 0,005);

второй абзац после слов "свежеперегнанного фурфурола" дополнить словами: "или фурфурола перегнанного, хранящегося в запаянных вакуумированных ампулах".

Пункт 8.2.5 изложить в новой редакции: "8.2.5. В стеклянной колбе или склянке с пришлифованной пробкой смешивают соответствующие в зависимости от плотности концентрированной соляной кислоты объемы этой кислоты и дистиллированной воды".

Пункт 8.2.7.1. Заменить значение: (0,0078 +/- 0,001) на (0,078 +/- 0,001); после слов "монохлорида лизина" дополнить словами: "или соответствующее количество дигидрохлорида".

Пункт 8.2.8. Второй абзац. Заменить слова: "Из полоски" на "На полоски";

дополнить абзацем (под таблицей): "Для построения градуировочного графика допускается использование и других количеств лизина".

Пункт 8.3. Первый абзац. Заменить значение: 0,3 - 0,4 на 0,2 - 0,3;

третий абзац после слов "обмывают" дополнить словами: "4 см3 дистиллированной воды (двумя порциями по 2 см3)".

Пункт 8.4. Формула. Исключить значение: 1000;

экспликация к формуле. Исключить слова: "1000 - коэффициент пересчета массы навески в миллиграммы";

второй абзац. Заменить значение: 5% на 10%;

четвертый абзац. Заменить значение: 10% на 20%.

Раздел 9. Первый абзац. Заменить слово: "предварительно" на "продукта"; исключить слово: "продукта и".

Пункт 9.1. Седьмой абзац изложить в новой редакции: "Колба К-1-100-29/32 ТХС или К-1-250-29/32 ТХС, или П-1-100-29/32 ТХС, или Кн-1-100-29/32 ТХС по ГОСТ 25336".

Пункт 9.2. Шестой абзац после слов "вместимостью 100" дополнить словами: "или 250";

четвертый абзац. Заменить слова: "до первого десятичного знака" на "до целых единиц".

Раздел 10. Первый абзац после слов "спектрофотометрическом определении" дополнить словом: "ароматических".

Пункт 10.1 дополнить абзацем (после семнадцатого): "Стаканчики стеклянные вместимостью 25 см3 или бюксы той же вместимости по ГОСТ 25336";

двадцать первый абзац после обозначения 1-1-10 дополнить словами: "или 1-2-10";

дополнить абзацами (после двадцать пятого): "Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166. Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, водный раствор с массовой долей 10%. Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч., концентрированная. Бумага индикаторная универсальная".

Раздел 10 дополнить пунктом - 10.2.3:

"10.2.3. Подготовка гексана

В сухую банку с плотно закрывающейся пробкой вместимостью 1 дм3 помещают 500 см3 гексана и 100 см3 концентрированной серной кислоты. Банку закрывают пробкой, устанавливают на качалку и реакционную смесь перемешивают в течение 2 - 3 ч. Обработку гексана серной кислотой повторяют еще 2 - 3 раза.

Гексан отделяют от серной кислоты в делительной воронке, промывают его дистиллированной водой, 10%-ным водным раствором едкого натра и вновь дистиллированной водой до нейтральной реакции по индикаторной бумаге. Гексан из делительной воронки переносят в сухую банку или коническую колбу, добавляют сернокислый натрий из расчета 100 г осушителя на 1 дм3 гексана и оставляют для высушивания на 1,5 - 2 ч. Гексан отделяют от осушителя декантацией и перегоняют, собирая фракцию при 68 - 69 °C.

Степень чистоты полученного гексана проверяют спектрофотометрически относительно воздуха в кварцевых кюветах с толщиной оптического слоя 10 мм при длине волны 210 нм. Оптическая плотность не должна превышать величину 0,5".

Пункт 10.3. Первый абзац после слов "В круглодонную" дополнить словом: "плоскодонную"; после слов "20 г продукта" дополнить словами: "(Результат записывают с точностью до второго десятичного знака)"; перед словами "спиртового раствора гидроокиси" заменить значение: 200 на 250;

третий абзац после слова "встряхивают" дополнить словами: "в течение 30 с";

дополнить абзацем (после десятого): "Допускается упаривать элюат после хроматографической колонки в круглодонной колбе вместимостью 250 см3 до объема 2 - 3 см3, далее остаток элюата переносят в предварительно взвешенный стакан или бюксу и гексан удаляют испарением на воздухе, создавая ток воздуха над стаканчиком или бюксой с помощью комнатного вентилятора. Содержимое бюксы или стаканчика доводят до постоянной массы";

одиннадцатый абзац после слов "10 см3 гексана" дополнить словами: "для спектральных работ";

двенадцатый абзац изложить в новой редакции: "Если величины оптических плотностей полученного раствора при указанных значениях длин волн превышают 0,8, проводят ряд последовательных разведений в 20, 50, 100 и более раз с тем, чтобы значения величин оптических плотностей в максимумах длин волн находились в диапазоне 0,2 - 0,8".

Пункт 10.4.2. Формулу (11) дополнить абзацем: "или ".

Пункт 11.1. Третий абзац дополнить словами: "или аналогичного типа";

четвертый абзац изложить в новой редакции: "Устройство нагревательное любого типа: электрическое, инфракрасное, газовое, снабженное устройством для регулирования температур";

дополнить абзацем (перед последним): "Водорода перекись по ГОСТ 10929, раствор с массовой долей 30%".

Пункт 11.3 дополнить абзацем (после второго): "Допускается в конце минерализации использовать раствор перекиси водорода взамен концентрированной азотной кислоты".

Пункт 12.1. Двадцать четвертый абзац. Заменить слова: "натрий мышьяковистый двузамещенный. 7-водный, х.ч." на "мышьяковистокислый орто двузамещенный, ч. или ангидрид мышьяковистый медицинский препарат ГФХ ст. 5".

Пункт 12.1 дополнить абзацем (перед последним): "Водорода перекись по ГОСТ 10929, раствор с массовой долей 30%";

чертеж 3. Заменить размер: 60 +/- 0,5 на 50 +/- 0,5; подрисуночная подпись. Позиции 4, 6 после слова "трубка" дополнить словами: "(перетяжка в трубке не обязательна)".

Пункт 12.2.6. Первый абзац. Заменить значение: 4 - 5 на 4,5 - 5,5;

второй абзац после значения 1,0 дополнить значением: 1,5;

третий абзац после слов "серной кислоты" дополнить словами: "5 см3 концентрированной соляной кислоты".

Пункт 12.2.6 дополнить абзацем: "Допускается в конце минерализации использовать раствор перекиси водорода взамен концентрированной азотной кислоты".

Пункт 12.3 дополнить абзацем (после второго): "Допускается в конце минерализации использовать раствор перекиси водорода взамен концентрированной азотной кислоты".

Пункт 13.2.2.2 дополнить абзацем: "Очистку дитизона при приготовлении раствора А допускается не проводить, если оптическая плотность раствора Б, приготовленного из неочищенного дитизона, не превышает величину 0,2 при длине волны 490 нм и толщине слоя 10 мм относительно хлороформа".

Пункт 13.2.4. Первый абзац. Заменить значения: 0, 1, 2 и 5 на 0,0; 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0; 0; 0,001; 0,002 и 0,005 на 0,0; 0,0005; 0,0010; 0,0015 и 0,0020; 10 нм на 10 мм.

Пункт 14.2.5. Первый абзац. Заменить значение: 8 на 3.

Пункт 14.3. Четвертый абзац. Заменить значение: 300 мв на 280 - 300 мв.

Пункт 15.1. Третий абзац дополнить словами: "или аналогичного типа";

дополнить абзацем (перед последним): "Водорода перекись по ГОСТ 10929, раствор с массовой долей 30%".

Пункт 15.3 дополнить абзацем (после третьего): "Допускается в конце минерализации использовать раствор перекиси водорода взамен концентрированной азотной кислоты".

Пункт 15.4. Четвертый абзац. Заменить слова: "целого числа" на "первого десятичного знака".

Пункт 16.1. Первый абзац изложить в новой редакции: "Весы лабораторные технические любого типа".

Пункт 17.1 дополнить абзацами (перед последним): "Окситетрациклина дегидрат в таблетках по 0,25 (250 000 ед.).

Стрептомицина сульфат во флаконах по 0,25 (250 000 ед.); 0,5 (500 000 ед.) или 1 г (1000 000 ед.).

Раствор окситетрациклина дегидрата; готовят по ГОСТ 10444.12.

Раствор стрептомицина; готовят по ГОСТ 10444.12.

Сусло-агар с окситетрациклином; готовят по ГОСТ 10444.12".

Пункт 17.2. Первый абзац после слов "коническую колбу" дополнить словами: "или плоскодонную";

третий абзац после слов "до (45 +/- 1) °C" дополнить словами: "При необходимости в сусло-агар добавляют антибиотик окситетрациклин или стрептомицин".

Пункт 18.1. Семнадцатый абзац дополнить словами: "или агар мясо-пептонный (готовят по ГОСТ 10444.1), или агаризованная среда на основе ферментолизата микроорганизмов (готовят по п. 18.2.1 настоящего стандарта)";

дополнить абзацем (после семнадцатого): "Агар голодный; готовят по ГОСТ 10444.1".

Пункт 18.3. Второй абзац. Заменить слово: "палочкой" на "пипеткой";

третий абзац. Заменить слова: "45 °C мясо-пептонного агара" на "температуры 45 °C мясо-пептонного агара или одной из сред, указанных в п. 18.1";

дополнить абзацем (после третьего): "Для того чтобы помешать развитию на поверхности агара спорообразующих микробов и бактерий протея, допускается наслоение расплавленного и охлажденного до температуры 45 - 50 °C голодного агара толщиной 3 - 4 мм".

Пункт 19.1. Пятнадцатый абзац дополнить словами: "или D-глюкоза по ГОСТ 6038";

дополнить абзацами (после двадцатого): "Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный по ГОСТ 4172. Ферментолизат биомассы микроорганизмов осветленный".

Пункт 19.2.1. Заменить слова: "Среду разливают в колбу" на "Среду фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбу".

Раздел 19 дополнить пунктами - 19.2.1а, 19.2.1б, 19.2.1в:

"19.2.1а. Приготовление магниевой среды на основе ферментолизата биомассы микроорганизмов

Приготовление среды аналогично приготовлению магниевой среды по п. 19.2.1. Готовая среда должна иметь pH 7,0.

19.2.1б. Приготовление среды предобогащения на основе пептона

Компоненты растворяют в воде при подогревании до кипения. Фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют при температуре 120 °C в течение 20 мин. Готовая среда должна иметь pH 7,0.

19.2.1в. Приготовление среды предобогащения на основе ферментолизата биомассы микроорганизмов

Приготовление аналогично приготовлению среды предобогащения на основе пептона по п. 19.2.1б. Готовая среда должна иметь pH 7,0".

Пункт 19.2.2 изложить в новой редакции: "19.2.2. Приготовление пептонной воды

К дистиллированной воде добавляют пептон и хлористый натрий, устанавливают значение pH 7,2 - 7,4, кипятят 30 мин, проверяют pH, фильтруют через бумажный фильтр до полной прозрачности и стерилизуют при температуре 120 °C в течение 30 мин".

Раздел 19 дополнить пунктом - 19.2.4а: "19.2.4а. Приготовление среды Клиглера с мочевиной

5,5 г сухого порошка среды Клиглера засыпают в колбу с 100 см3 холодной дистиллированной воды, тщательно перемешивают и на слабом огне доводят до кипения. Кипятят 3 - 5 мин, закрыв колбу ватной пробкой. Среду фильтруют через предварительно смоченный водой и отжатый ватный фильтр. Добавляют 1 см3 20%-ного раствора мочевины, тщательно перемешивают. Разливают в пробирки по 7 см3 и стерилизуют при температуре 112 °C 20 мин или текучим паром 30 мин.

Допускается приготавливать среду без добавления мочевины, но в этом случае в расплавленную после стерилизации среду в пробирке вносят в асептических условиях 0,1 см3 стерильного раствора мочевины".

Пункт 19.3. Первый абзац изложить в новой редакции: "Навеску продукта массой 50 г, взятую с соблюдением правил асептики, переносят в асептических условиях в колбу с 350 см3 среды предобогащения на основе пептона (п. 19.2.1б) или ферментолизата (п. 19.2.1в). Посев инкубируют при температуре 37 °C в течение 16 - 20 ч. После инкубирования стерильно переносят 20 см3 культуральной жидкости в колбу с 200 см3 магниевой среды на основе пептона или ферментолизата. Посев инкубируют при температуре 37 °C в течение 48 ч";

второй абзац после слов "висмут-сульфит агаром" изложить в новой редакции": "и по выбору со средой Плоскирева или Левина (по две чашки) для получения изолированных колоний".

Пункт 19.3 дополнить абзацем: "Реакция агглютинации с поливалентными сальмонеллезными сыворотками считается положительной при наличии феномена хлопьеобразования с поливалентной сальмонеллезной O-сывороткой ABCDE групп, а также феномен агглютинации указывает на наличие бактерий рода сальмонелла".

Пункт 19.4. Заменить слова: "указывает на наличие бактерий из ряда сальмонелл" на "или поливалентной O-сывороткой редких групп, а также феномен агглютинации указывает на наличие бактерий рода сальмонелла".

Пункт 20.1. Последний абзац после слова "конические" дополнить словами: "или плоскодонные".

Пункт 20.4. Второй абзац. Заменить слова: "Продукт считается токсичным" на "и получение аналогичного результата в повторном эксперименте с предварительным кипячением среды УСД с навесками в колбах в течение 10 мин на водяной бане продукт считается токсичным. Если в опыте без кипячения токсичность выявлена, но в повторном опыте с предварительным кипячением токсичность не обнаруживается, то следует провести контроль токсичности исследуемой партии продукта на белых мышах в соответствии с требованиями п. 21".

Пункт 21.1. Первый абзац изложить в новой редакции: "Весы, лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г или весы 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 1 кг по ГОСТ 24104".

Пункт 21.4 дополнить абзацем (после второго): "Продукт токсичный - гибнут все или хотя бы одна мышь - и на вскрытии павших и убитых мышей выявляют геморрагическое воспаление желудочно-кишечного тракта, часто сопровождающееся дегенерацией печени, почек или кровоизлияниями в паренхиматозных органах".

Пункт 22.1. Первый абзац дополнить словами: "или торзионные";

второй абзац после слов "взвешивания 500 г" дополнить словами: "или 1 кг";

семнадцатый, восемнадцатый абзацы исключить;

двадцатый абзац. Заменить слова: "железосинеродистый (желтая кровяная соль)" на "железистосинеродистый (желтая кровяная соль) 3-водный";

дополнить абзацем (перед последним): "Марганец сернокислый по ГОСТ 435".

Пункт 22.2.1. Первый абзац. Заменить значения: 0,5 г на 0,6 г; 150 см3 на 180;

второй абзац после слов "дистиллированной воды" дополнить словами: "в течение 30 мин".

Пункты 22.2.2, 22.2.4 исключить.

Пункты 22.2.9, 22.3 изложить в новой редакции (пункты 22.3.1, 22.3.2 исключить):

22.2.9. Построение градуировочного графика

В восемь колб вместимостью 100 см3 пипетками соответствующей вместимости вносят 0,5; 1; 1,5; 2; 3; 4; 5; 6 см3 стандартного раствора азотнокислого калия, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

В девять сухих пробирок вносят по 0,1 г смеси цинковой пыли с сернокислым марганцем. В восемь пробирок из каждой мерной колбы приливают 1 см3 стандартного раствора, затем добавляют 5 см3 дистиллированной воды, а в девятую пробирку (контрольный опыт) - 6 см3 дистиллированной воды. В девять пробирок добавляют 2 см3 раствора уксусной кислоты с массовой долей 10% и закрывают пробками. Содержимое пробирок встряхивают в течение 2 мин до полного растворения цинковой пыли с сернокислым марганцем. Затем в пробирки добавляют 1 см3 свежеприготовленного реактива Грисса-Илосвая, содержимое перемешивают и оставляют на 30 мин до проявления окраски. Содержимое в пробирках, соответственно, составляет 0,005; 0,01; 0,015; 0,02; 0,03; 0,04; 0,05; 0,06 мг/см3.

Колориметрирование проводят при зеленом светофильтре N 5 с длиной волны 490 нм в кювете с расстояниями между рабочими гранями 10 мм. Раствором сравнения служит дистиллированная вода.

Колориметрирование начинают в порядке возрастания содержания начиная с девятой пробирки (контрольный опыт), затем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 пробирки.

По полученным данным строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс количества в мг/см3, а по оси ординат - соответствующие оптические плотности растворов.

Градуировочный график строят по мере приготовления новых растворов сульфаниловой кислоты и .

22.3. Проведение испытания

5,0 г продукта взвешивают (результат записывают с точностью до третьего десятичного знака) в колбу вместимостью 250 см3. Приливают 70 см3 дистиллированной воды и встряхивают в течение 10 мин, затем центрифугируют при 10 мин. Центрифугат переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. Осадок промывают 15 см3 дистиллированной воды и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость приливают в мерную колбу и доводят объем до метки дистиллированной водой.

Затем 40 см3 водной вытяжки переносят в колбу вместимостью 250 см3, приливают по 20 см3 растворов Карреза 1 и Карреза 2, взбалтывают и фильтруют через плотный фильтр. Если вытяжку не удается обесцветить полностью растворами Карреза, тогда для удаления оставшейся окраски к раствору, полученному после осаждения белков растворами Карреза, прибавляют около 0,4 г активированного угля марки Б, взбалтывают 2 - 3 мин и фильтруют через плотный фильтр.

6 см3 фильтрата вносят в пробирку для анализа, добавляют 0,1 г смеси цинковой пыли с сернокислым марганцем, приливают 2 см3 раствора уксусной кислоты с массовой долей 10% и закрывают пробкой. Содержимое пробирки встряхивают в течение 2 мин до полного растворения цинковой пыли с сернокислым марганцем. Затем в пробирку приливают 1 см3 свежеприготовленного реактива Грисса-Илосвая, содержимое перемешивают и через 30 мин колориметрируют при зеленом светофильтре N 5 с длиной волны 490 нм в кювете с расстояниями между рабочими гранями 10 мм. Раствором сравнения служит дистиллированная вода. Проводят два параллельных определения".

Пункт 22.4 после слов " - объем водной вытяжки" дополнить словами: "равный 100";

последний абзац. Заменить значение: 10 на 20; дополнить словами: "округленных до целого числа".

Пункты 23.1, 23.2, 23.2.1 - 23.2.6, 23.3, 23.4 изложить в новой редакции:

Сущность метода заключается в экстракции нефраса из продукта при обработке водой и этиловым спиртом и количественном определении содержания нефраса в полученном экстракте газохроматографически.

23.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Хроматограф аналитический газовый с пламенно-ионизационным детектором, обеспечивающий чувствительность определения по нефрасу 0,001% в смеси этиловый спирт - вода.

Колонка из нержавеющей стали длиной 2 м и диаметром 3 - 5 мм.

Микрошприц хроматографический типа "Газохром 101" или аналогичный.

Линейка измерительная с ценой деления 1 мм по ГОСТ 427 или любая другая с делениями, расположенными по скошенной грани.

Лупа измерительная с ценой деления 0,1 мм по ГОСТ 25706.

Шприц медицинский вместимостью 1 - 2 см3 с иглой.

Испаритель ротационный лабораторный любого типа.

Чашка фарфоровая диаметром не менее 130 мм по ГОСТ 9147.

Аппарат для встряхивания жидкости в сосудах.

Ступка фарфоровая с пестиком диаметром 75 - 110 мм по ГОСТ 9147.

Склянка вместимостью 50 см3 с завинчивающейся пластмассовой крышкой; перед приготовлением растворов под крышку подкладывают резиновую прокладку с диаметром, равным диаметру горла склянки, и толщиной 2 - 2,5 мм; для прокладок используют силиконовую резину или любую другую, не набухающую от паров органических растворителей; в центре крышки просверливают отверстие диаметром 3 - 4 мм.

Колбы конические Кн-1-50-14/19, Кн-1-500-29/32 по ГОСТ 25336.

Пипетки 1-1-2 или 1-2-2; 2-1-5 или 2-2-5; 2-1-25 или 2-2-25 по ГОСТ 20292.

Колбы мерные 2-100-1 или 2-100-2; 2-50-1 или 2-50-2 по ГОСТ 1770.

Цилиндры мерные 1-100 и 1-500 по ГОСТ 1770.

Стаканчики для взвешивания СВ-14/8 по ГОСТ 25336.

Гелий газообразный или азот газообразный по ГОСТ 9293.

Водород технический, высший сорт по ГОСТ 3022.

Воздух сжатый с давлением в линиях в пределах 0,25 - 0,70 МПа (2,5 - 7,0 кгс/см2).

Ацетон по ГОСТ 2603.

Хлороформ технический по ГОСТ 20015.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300 или спирт пищевой по ГОСТ 5962.

Нефрас, используемый для экстракции на промышленной установке.

Гексан, ч.

Триэтаноламин.

Хроматон N-AW или хроматон N-AW-HMAS, или хроматон N-AW-AMCS, фракция 0,16 - 0,20 мм производства ЧССР или другой диатомитовый носитель для газовой хроматографии.

Вода дистиллированная.

23.2. Подготовка к испытанию

23.2.1. Подготовка газохроматографической колонки

В стаканчике взвешивают 1,5 г триэтаноламина (результат записывают с точностью до второго десятичного знака). С помощью этилового спирта навеску количественно переносят в круглодонную колбу вместимостью 500 см3 и добавляют этиловый спирт для растворения триэтаноламина. Общее количество спирта должно составлять около 150 см3. Мерным цилиндром вместимостью 100 см3 отмеривают 60 см3 хроматона или другого диатомитового носителя и вносят в ту же колбу. Смесь тщательно перемешивают в течение 15 - 20 мин. Затем спирт отгоняют на ротационном испарителе насколько возможно полно. Носитель вместе с триэтаноламином переносят в фарфоровую чашку и оставляют при комнатной температуре на 10 - 12 ч для удаления остатков этилового спирта.

Колонку последовательно промывают хлороформом, ацетоном, дистиллированной водой, этиловым спиртом, гексаном, высушивают током воздуха при комнатной температуре и заполняют носителем с триэтаноламином. Затем колонку помещают в термостат хроматографа, один конец ее присоединяют к испарителю, другой - оставляют свободным.

Колонку подвергают стабилизации. Для этого через нее пропускают поток газа-носителя со скоростью 30 см3/мин, затем нагревают до 80 °C, выдерживают 5 ч, далее поднимают температуру до 100 °C и выдерживают еще 1,5 - 2 ч. Колонку охлаждают в токе газа-носителя и свободный конец ее присоединяют к детектору.

23.2.2. Приготовление смеси этиловый спирт - вода

В коническую колбу вместимостью 500 см3 вливают 200 см3 этилового спирта и 100 см3 дистиллированной воды, отмеряя их количество мерным цилиндром. Смесь тщательно перемешивают и используют для приготовления стандартных растворов.

23.2.3. Условия газохроматографического испытания

В зависимости от марки используемого хроматографа (конструкции пламенно-ионизационного детектора, формы и размера колонок и др.) условия газохроматографического испытания подбирают так, чтобы обеспечить достаточное разделение пиков нефраса, этилового спирта и примесей, присутствующих в водно-спиртовых экстрактах при малых концентрациях нефраса. Для хроматографа ЛХМ-80 рекомендуются следующие условия, которые могут быть уточнены в процессе работы:

колонка стальная длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм;

насадка - 10% триэтаноламина на хроматоне N-AW-HMДS (0,16 - 0,20 мм);

температура колонки - 80 °C;

температура испарителя - 140 °C;

скорость газа-носителя и водорода - 30 см3/мин;

скорость воздуха - 250 - 300 см3/мин;

объем пробы - 1 мкл;

скорость движения бумаги - 720 мм/ч.

Количество нефраса рассчитывают по любому из параметров пика: высоте или площади, полученной путем умножения высоты пика на его ширину, измеренную на середине высоты с помощью лупы.

Типичная хроматограмма нефраса в водно-спиртовом экстракте приведена на черт. 5.

23.2.4. Проверка чистоты смеси этиловый спирт - вода

Смесь этиловый спирт - вода, приготовленную по п. 23.2.2, подвергают хроматографическому анализу в условиях, выбранных по п. 23.2.3, при чувствительности детектора, которая необходима для анализа стандартного раствора с минимальной концентрацией нефраса. Если на хроматограмме появляется пик, время удерживания которого совпадает с временем удерживания нефраса, то анализ смеси проводят 3 раза и рассчитывают среднее арифметическое значение высоты или площади этого пика, которое учитывают при проведении градуировки прибора и выполнении анализа.

23.2.5. Приготовление стандартных растворов

В предварительно взвешенную склянку (результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака) с завинчивающейся крышкой приливают мерным цилиндром 40 см3 смеси этиловый спирт - вода, приготовленной по п. 23.2.2. Склянку плотно закрывают завинчивающейся крышкой с резиновой прокладкой, взвешивают и рассчитывают массу добавленной смеси. Затем медицинским шприцем через отверстие в крышке и прокладку в склянку вводят 0,5 - 0,55 см3 нефраса. Склянку взвешивают и рассчитывают массу добавленного нефраса. Раствор тщательно перемешивают. Рассчитывают массовую долю нефраса в процентах в исходном стандартном растворе, исходя из определенных взвешиванием количеств нефраса и смеси этиловый спирт - вода.

Пипеткой отбирают 2 см3 этого исходного стандартного раствора, переносят их в мерную колбу вместимостью 100 см3, содержимое колбы доводят до метки смесью этиловый спирт - вода и раствор перемешивают. Рассчитывают точное значение массовой доли нефраса в полученном растворе (раствор А). Далее из раствора А с помощью мерных колб и пипеток соответствующей вместимости приготовляют стандартные растворы с точно рассчитанными массовыми долями, приблизительно равными 0,002; 0,005 и 0,01%, по следующей схеме:

23.2.6. Построение градуировочного графика

Линейность зависимости площади пика нефраса от его массовой доли проверяют в пределах концентраций от 0,002 до 0,02% при налаживании метода, а затем периодически после вынужденной остановки прибора, связанной с заменой колонки, с ремонтом или другими причинами.

Для каждого стандартного раствора, приготовленного по п. 23.2.5, записывают три хроматограммы, вводя микрошприцем по 1 мкл каждого из них в хроматограф при соответствующей чувствительности, и измеряют высоты или площади пиков нефраса по п. 23.2.3. Для каждого раствора рассчитывают среднее арифметическое значение выбранного параметра пика нефраса.

Если при проверке чистоты смеси этиловый спирт - вода было обнаружено наличие примеси, мешающей определению нефраса, то величина среднего арифметического значения параметра пика этой примеси вычитается из величин средних арифметических значений параметров пиков нефраса для стандартных растворов с учетом чувствительности детектора, при которой были записаны соответствующие хроматограммы.

Полученные значения высот или площадей пиков, определенных при различных чувствительностях детектора, пересчитывают умножением на соответствующие множители на одну чувствительность, наиболее удобную в работе. По полученным значениям строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс концентрации нефраса в стандартных растворах, а по оси ординат - соответствующие им средние арифметические значения высот или площадей пиков нефраса. Градуировочный график должен представлять собой прямую линию.

23.3. Проведение испытания

Продукт растирают в фарфоровой ступке.

В предварительно взвешенную склянку или коническую колбу вместимостью 50 см3 взвешивают (1,0 +/- 0,1) г измельченного продукта (результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака) и затем пипеткой вносят 5 см3 дистиллированной воды и плотно закрывают. Смесь тщательно перемешивают и оставляют стоять 10 мин. По истечении 10 мин туда же пипеткой вносят 10 см3 этилового спирта, смесь перемешивают и склянку или колбу плотно закрывают и вновь взвешивают с той же точностью. Рассчитывают массу смеси этиловый спирт - вода. Затем содержимое колбы перемешивают на аппарате для встряхивания 30 мин.

Записывают две хроматограммы, вводя микрошприцем в хроматограф по 1 мкл раствора, образовавшегося после оседания продукта.

Проводят два параллельных определения.

Затем записывают две хроматограммы для любого стандартного раствора, также вводя в хроматограф по 1 мкл пробы. Высоты или площади пиков нефраса на всех хроматограммах измеряют, как указано в п. 23.2.3, и рассчитывают средние арифметические значения из параметров пиков для каждого из растворов. Расхождение между высотами или площадями пиков и их средним арифметическим значением не должно превышать 10%.

Если в смеси этиловый спирт - вода были обнаружены мешающие примеси, их содержание учитывают, как указано в п. 23.2.6.

23.4. Обработка результатов

Массовую долю нефраса в процентах вычисляют по формуле

где и - среднее значение высоты или площади пика нефраса в растворе, полученном после оседания продукта, и стандартном растворе, соответственно, мм или мм2;

- массовая доля нефраса в стандартном растворе, %;

- масса смеси этиловый спирт - вода, добавленной к продукту, г;

- масса навески продукта, г;

Результат округляют до третьего десятичного знака.

Из результатов двух параллельных определений рассчитывают среднее арифметическое значение с тем же числом знаков после запятой и определяют расхождение между каждым результатом и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 10%, рассчитанных до целого числа.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, которое округляют до первого десятичного знака.

Допускаемое относительное расхождение между окончательными результатами, полученными в разных условиях (в разных лабораториях, в разное время, при работе с разной аппаратурой, разными материалами и реактивами) вычисляют следующим образом: из окончательных результатов испытаний, полученных в разных условиях, определяют среднее арифметическое значение, которое рассчитывают и округляют до третьего десятичного знака. Далее определяют расхождение между каждым окончательным результатом испытания и средним арифметическим значением. Допускаемое относительное расхождение не должно превышать 30%, рассчитанных и округленных до целого числа".