"Временные методические указания по определению актеллика и базудина в чае с помощью тонкослойной и газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 N 3888-85)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1.1.1. Актеллик.

1.1.2. 0,0-диметил-0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-тиофосфат.

1.1.3. Структурная формула:

1.2.1. Базудин.

1.2.2. 0,0-диэтил-0-(2-изопропил-4-метилпиримидил-6) тиофосфат.

1.2.3. Структурная формула:

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции фосфорорганических пестицидов из чая водным ацетоном, последующем перераспределении препарата из водно-ацетоновой фракции в гексан и анализе содержания фосфорорганических пестицидов при помощи газожидкостной хроматографии или хроматографии в тонком слое. В последнем случае необходима предварительная очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

2.1.3. Избирательность метода

Карбофос, протиофос и хостаквик определению не мешают.

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77.

Алюминия оксид для хроматографии, ч, ТУ 6-09-3916-75, I активности, нейтральный.

Пластинки "Силуфол-254", ЧССР.

Хроматон N-AW-DMCS, пропитанный 3% ХЕ-60 (0,160 - 0,200 мм).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород электролитический.

Сжатый воздух.

Проявляющие реагенты:

1. 0,2-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина (ч, ТУ 6-09-05-63-74) в гексане.

2. 2-процентный раствор 4-(n-нитробензил)пиридина (ч, ТУ 6-09-15-93-74) в ацетоне, 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина (ч, ТУ 6-09-05-804-78) в ацетоне.

Стандартные растворы актеллика и базудина в гексане - 1 мкг/куб. см для ГЖХ, 100 мкг/куб. см для ТСХ.

Хроматограф "Цвет-106" или аналогичный прибор с термоионным детектором (ДТИ).

Аппарат для встряхивания колб, ТУ 64-1-1081-73.

Испаритель ротационный вакуумный, ТУ 6-08-917-74, или аналогичный прибор для отгонки растворителей под вакуумом.

Хроматоскоп.

Колбы конические со шлифами и пробками на 250 куб. см или 300 куб. см, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные со шлифами на 100 куб. см, ГОСТ 10394-72.

Воронки делительные на 500 куб. см, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Воронки, ГОСТ 8613-81.

Колонки для адсорбционной хроматографии (300 х 15 мм).

Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.

Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-74.

Пипетки на 0,1 и 1,0 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные на 50, 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.

Термостат.

Колонки стеклянные для газожидкостной хроматографии (1000 х 3 мм).

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб производят в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

Средняя проба чая для анализа - 10 г.

2.4.2. Приготовление хроматографической колонки

Стеклянные хроматографические колонки (1000 х 3 мм) заполняют хроматоном N-AW-DMCS (0,160 - 0,200), пропитанным 5% ХЕ-60 по стандартной методике (см. Столяров, Савиков, Витенберг. Руководство к практическим работам по газовой хроматографии, 1978 г.).

2.4.3. Построение градуировочного графика

Для количественного определения актеллика и базудина во введенной аликвоте используют метод абсолютной калибровки, который заключается в построении графической зависимости высоты (площади) хроматографического пика от содержания вещества в стандартной пробе.

По оси ординат откладывают значения высот (площадей) хроматографических пиков в мм (кв. мм или мкВ х сек.), а по оси абсцисс - абсолютное количество исследуемого вещества, соответствующее данному пику.

Градуировочный график необходимо строить в день газохроматографического анализа проб в тех же условиях, особенно при работе с ДТИ.

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов чая

Из проб чая актеллик, базудин извлекают 75 - 100 куб. см смеси ацетона с водой (1:1). Экстрагируют при встряхивании 30 - 60 мин. После этого растительные экстракты помещают в холодильную камеру для вымораживания восков. Затем пробы фильтруют через бумажные фильтры. Далее проводят переэкстракцию актеллика, базудина из объединенного фильтрата в гексан, прибавляя последний порциями по 25 куб. см, каждый раз встряхивая в делительной воронке в течение 3 - 5 минут. Экстракцию повторяют 3 раза. Гексановые фракции высушивают фильтрованием через слой безводного сернокислого натрия (20 - 25 г), объединяют и концентрируют до небольшого объема (1 - 0,5 куб. см) под вакуумом при температуре 40 °С.

Экстракты из проб чая нуждаются в дополнительной очистке, которая проводится на колонке (300 х 15 мм), заполненной последовательно сернокислым натрием (3 - 4 г), окисью алюминия (4 - 5 г) и снова сернокислым натрием (1,5 - 2 г). Колонку предварительно промывают бензолом (30 - 40 куб. см). Актеллик, базудин элюируют бензолом (20 куб. см), растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема. Количество инсектицида в пробе определяют хроматографическими методами.

При газожидкостной хроматографии очистку экстрактов чая можно не проводить.

2.5.2. Условия хроматографирования в тонком слое

Проба с помощью капилляра или микропипетки наносится на хроматографическую пластинку "Силуфол-UV 254". Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 3,5 и 10 мкг действующего вещества актеллика или базудина. Хроматографируют в системе гексан - ацетон (4:1), проветривают. Для обнаружения определяемых соединений пластины просматривают в УФ-свете хроматоскопа и обрабатывают либо 0,25-ным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, затем нагревают в течение 30 секунд в термостате при температуре 100 - 120 °С, либо 2-процентным раствором 4-(р-нитробензил) пиридина с последующим нагреванием при 100 - 120 °С и обработкой 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина.

где:

А - количество препарата, найденное по хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

Р - навеска исследуемой пробы, мг;

Х - содержание препарата в пробе, мг/кг.

2.5.3. Условия газожидкостного хроматографирования

Время удерживания актеллика в данных условиях - 2 мин. 51 сек., базудина - 54 сек.

Количественное определение препарата в анализируемой пробе проводят с помощью градуировочного графика (см. 2.4.3).

Содержание препарата в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

где:

Х - содержание препарата в анализируемой пробе, мг/кг;

С - общий объем раствора, куб. см;

У - объем аликвоты, введенный в хроматограф, куб. мм;

К - количество препарата в аликвоте, определенное по градуировочному графику, нг;

Р - навеска анализируемого вещества, г.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору известное количество гексана или разбавляя отобранную аликвоту до определенного объема.

2.6. Обработка результатов анализов приведена в 2.5.2 и 2.5.3.

Общепринятые требования безопасности при работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами.

Петрова Т.М., Красникова Н.Г., Мельникова З.В. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, Ленинград.