"Временные методические указания по определению дилора в меде методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 N 3884-85)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

Дилор (2,4,5,6,7,8,8-гептахлор-4,7-эндометиленбицикло/4.3.0/нонен-5).

Структурная формула:

Синонимы: БЛ 2487, ГС 9160, бета-дигидрогептахлор.

Дилор - кристаллическое вещество кремового цвета со слабым запахом, температура плавления 135 - 137 °С. Плохо растворим в воде (при 21 °С 0,014 мг/л), но хорошо растворим почти во всех органических растворителях.

Разрешен для применения в борьбе с колорадским жуком на картофеле, свекловичным долгоносиком на сахарной свекле, листовой филлоксерой на виноградной лозе и другими вредителями растений.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении дилора из водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан, упаривании экстракта и очистке на колонке с окисью алюминия и определении хроматографией на пластинках "Силуфол УФ-254".

Количественное определение препарата проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандарта.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

- Диапазон определения концентраций - 0,5 - 20 мкг пестицида в анализируемой пробе;

- предел обнаружения - 0,5 мкг или 0,05 мг/кг;

- размах варьирования - 88,4 - 97,4%;

- среднее значение определения стандартных количеств дилора - 94,1%;

- стандартное отклонение - 3,54;

- относительное стандартное отклонение - 0,037;

- доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 9 - 94,1 +/- 2,7.

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен. Другие хлорорганические пестициды определению не мешают.

Алюминия окись II степени активности, просеянная через сито 250 меш и задержанная на сите 100 меш, ТУ 6-09-3916-75;

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79;

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78;

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76;

Свинец уксуснокислый, ТУ 6-09-4140-75;

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81;

Спирт этиловый 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77;

Эфир диэтиловый, хч, ГОСТ 6262-79;

Дилор, хч, или 80% с.п.

Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный, ТУ 1-1081-73;

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76;

Весы торсионные ВТ, ТУ 64-1-990-77;

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82;

Камеры хроматографические, ГОСТ 10565-75;

Камера для опрыскивания хроматограмм, ТУ 25-11-430-70;

Колонки хроматографические стеклянные с внутренним диаметром 8 - 9 мм - пипетки на 5 мл, ГОСТ 20292-74;

Пластинки для хроматографирования "Силуфол УФ-254" производства ЧССР;

Посуда химическая по ГОСТ 23932-79Е (колбы на 100 мл, микропипетки, пипетки, цилиндры мерные, стаканы химические, пробирки);

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74;

Чашки фарфоровые выпарительные, ГОСТ 9147-73;

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.

2.4.1. Приготовление стандартного раствора дилора: 10 мг препарата хч или 12,5 мг 80% смачивающегося порошка растворяют в 100 мл гексана. Содержание пестицида составляет 100 мкг в 1 мл. Хранят в холодильнике в герметично закрытой посуде.

2.4.2. Приготовление проявляющего реактива

0,5% раствор азотнокислого серебра в этаноле - 0,5 г нитрата серебра растворяют в 2 - 3 мл дистиллированной воды и доводят 96% этиловым спиртом до 100 мл. Хранят в герметично закрытой посуде в защищенном от света месте. Пригоден для анализа не менее месяца при хранении в указанных выше условиях.

2.4.3. Приготовление хроматографических колонок

В качестве хроматографических колонок используют пипетки на 5 мл с внутренним диаметром 8 - 9 мм. Для этого в узкой градуированной части отрезают часть пипетки (отрезок 5 - 6 см), а в узкий конец оставшейся большей части пипетки вставляют ватный тампон и через воронку насыпают последовательно слой натрия сернокислого безводного, окиси алюминия II степени активности и натрия сернокислого безводного. Высота слоя окиси алюминия - 2 см, натрия сернокислого безводного - по 1 см. Подготовленную таким образом колонку фиксируют в штативе. Готовят колонку обычно перед использованием.

2.4.4. Приготовление хроматографических пластинок "Силуфол УФ-254".

Пластинку помещают в камеру с водой и после прохождения воды через всю пластинку ее вынимают и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 65 - 70° в течение 5 - 10 минут. Пластинки могут быть использованы непосредственно после приготовления или через 1 - 2 суток.

2.4.5. Отбор проб проводят в соответствии с унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, за N 2051-79.

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

В колбу отвешивают 10 г меда, помешивая стеклянной палочкой, растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Из водного раствора меда препарат экстрагируют 30 мл ацетона путем встряхивания пробы в течение 15 минут. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку. После разделения слоев нижний (водный раствор меда) сливают в колбу и повторно экстрагируют 10 - 15 мл ацетона, встряхивая колбу в течение 10 минут. С помощью делительной воронки отделяют ацетоновый экстракт и объединяют его с первой порцией ацетона. Затем объединенный ацетоновый экстракт переносят в делительную воронку, добавляют 60 мл дистиллированной воды и 15 мл гексана и встряхивают в течение 2 минут. После разделения слоев нижний (водно-ацетоновый экстракт) сливают в чистую колбу, а верхний (гексановый) - в чистый химический стакан. Водно-ацетоновый экстракт переносят в ту же делительную воронку и дилор повторно реэкстрагируют 10 мл гексана. Гексановые экстракты объединяют в делительной воронке, промывают 1 - 2 раза дистиллированной водой порциями по 50 мл, затем сушат 5 - 10 г безводного сернокислого натрия в течение 15 - 20 минут и отгоняют в фарфоровой чашке при температуре водяной бани в пределах 40 - 45 °С до объема 2 - 3 мл. Сконцентрированный гексановый экстракт в объеме 2 - 3 мл вносят в хроматографическую колонку, предварительно промытую 3 мл смеси гексан - эфир в соотношении 10:1, и дилор элюируют еще 3 мл этой же смеси. Элюат отгоняют под вытяжкой при комнатной температуре до объема 0,4 - 0,5 мл и переносят в мерную центрифужную пробирку.

2.5.2. Хроматография в тонком слое

Очищенный и упаренный гексановый экстракт с помощью микрошприца или микропипетки наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол УФ-254" на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края в одну точку. Диаметр пятна не должен превышать 5 - 6 мм. Рядом с пробой наносят известные количества дилора в гексане (стандарты). Затем пластинку развивают в хроматографической камере с гексаном и при подъеме подвижного растворителя на высоту 10 см от линии старта ее вынимают из камеры. После испарения гексана пластинку опрыскивают 0,5% раствором нитрата серебра в этаноле и сразу же помещают под лампу ПРК-4 на 5 - 10 минут в зависимости от концентрации препарата. На опрыскивание одной пластинки используют 2 - 3 мл проявляющего реактива (до появления глянца).

Количество дилора в меде определяют путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов препарата с использованием формулы расчета:

Для более точного определения количества дилора в меде проводят два параллельных исследования проб. С этой целью рядом с опытной пробой первой повторности на пластинке наносят 2 и 8 мкг дилора в гексане. При определении содержания дилора по второй повторности пробы рядом с ней на пластинку наносят количества препарата в гексане, наиболее близкие к выявленному в пробе меда первой повторности и исходя из полученных результатов проводят расчет согласно приведенной выше формуле.

Соблюдаются обычные требования безопасности, рекомендуемые для работы с химическими реактивами.

Временные методические указания подготовлены Ярошенко В.И. (Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии, г. Харьков).

Методические указания апробированы в Прибалтийском филиале ВИЗР (Горкун Г.А. и Ипатова Т.Н.).