"Временные методические указания по определению стомпа методом газожидкостной хроматографии в табаке"
(утв. Минздравом СССР 12.04.1985 N 3252-85)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

Стомп (пеноксалин, праул, аккотаб, хербатокс) - 3,4-диметил-2,6-динитро-N(пентил-3)анилин - кристаллическое вещество оранжево-желтого цвета.

Молекулярная масса 281,3.

Температура плавления - 56 - 57 °С.

Растворимость в воде при 20 °С - 0,3 мг/л.

Хорошо растворяется в хлорированных и ароматических углеводородах. Стабилен в щелочных и кислых средах.

Технический препарат выпускается в форме 33-процентного концентрата эмульсии, 50-процентного смачивающегося порошка и 3-процентного гранулята.

Как селективный почвенный гербицид эффективен для борьбы с одно- и двудольными сорными растениями на посевах кукурузы, хлопка, риса, соевых, табака. Рекомендуется вносить перед посадкой. Применяется также для химического пасынкования табака.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на газохроматографическом определении стомпа с детектором постоянной скорости рекомбинации на неподвижной фазе ECSS-X после экстракции смесью вода - соляная кислота - этанол, очистки экстракта жидкость-жидкостным перераспределением в гексан и на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

Диапазон определяемых концентраций - 0,03 - 0,5 мг/кг.

Минимально детектируемое количество - 0,2 нг.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 1.

2.1.3. Избирательность метода

Трефлан и паарлан, применяемые в настоящее время в табаководстве, определению не мешают.

Этиловый спирт ректификат, ТУ 6-09-1710-77.

Соляная кислота, ч, ГОСТ 3118-77.

н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-75.

Сернокислый натрий безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Солянокислый этанол (к 200 мл дистиллированной воды приливают 20 мл концентрированной соляной кислоты и доводят до метки этанолом в 1 л в мерной колбе).

1 н раствор соляной кислоты.

Смесь гексан - бензол (8:2).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Силикагель для колоночной хроматографии Л 0,1/0,2 мм (ЧССР).

ECSS-X 5% на Газ-Хром 0 0,1 - 0,12 мм.

Стандартный раствор стомпа в бензоле конц. 0,0005 мг/мл.

Хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации.

Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ 5-2.833.0.24.

Ротационный вакуум-испаритель, ТУ 25-11-917-74.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73.

Гомогенизатор.

Сушильный шкаф, ТУ 64-1-1411-76.

Колбы конические со шлифом на 250, 500 мл, ГОСТ 10394-72.

Колба Бунзена, ГОСТ 6514-75.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-73.

Хроматографические колонки диам. 20 х 500 мм.

Колбы мерные на 1 л, ГОСТ 1770-74.

Воронки делительные на 500, 1000 мл, ГОСТ 8613-75.

Стаканы химические на 100, 150 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные на 100 мл, ГОСТ 10394-74.

Воронки химические разные, ГОСТ 8613-75.

Пипетки разные, ГОСТ 20292-74.

Фильтры бумажные, ТУ 6-60-1678-77.

Вата, ГОСТ 5556-75, обезжиренная.

2.4.1. Установление линейного динамического диапазона

Готовят раствор стомпа в бензоле концентрацией 0,005 мг/мл. В 10 колб емкостью по 50 мл вносят пипеткой 1 - 10 мл раствора стомпа в бензоле, доводят до метки бензолом, перемешивают и полученные растворы поочередно вводят в хроматограф 4 мкл порциями. До хроматографирования растворы необходимо хранить в защищенном от света месте, так как препарат разлагается под действием ультрафиолетовых лучей.

2.4.2. Приготовление силикагеля для колоночной хроматографии

Силикагель марки Л 0,1/0,2 мм (ЧССР) перед употреблением высушивают в течение 4-х часов при температуре 140 °С и переносят в склянку с притертой пробкой. К остывшему силикагелю осторожно при перемешивании приливают небольшими порциями дистиллированную воду из расчета 20 мл на 80 г силикагеля, тщательно перемешивают встряхиванием до исчезновения комочков и оставляют на 24 часа для равномерного распределения воды. Проверяют активность каждой вновь приготовленной порции силикагеля.

2.4.3. Отбор, хранение и доставка пробы

Отбор и хранение проб табака производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб...", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за N 2051-79 от 21 августа 1979 г.

2.5.1. Экстракция и очистка экстракта

Навеску 10 - 20 г измельченного табака помещают в стакан гомогенизатора и заливают солянокислым этанолом (соотношение экстрагирующей смеси к весу образца 20:1). Гомогенизируют 4 мин. при 5000 об./мин. или встряхивают на механическом встряхивателе в течение 2-х часов. Фильтруют экстракт под вакуумом, промывают остаток на фильтре 2 х 15 мл солянокислым этанолом и переносят в делительную воронку. Добавляют к экстракту 100 мл 1 н раствора соляной кислоты, 50 мл гексана и экстрагируют в течение 1 мин. Отделяют гексановый слой и повторяют экстракцию 3 х 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуум-испарителе.

В хроматографическую колонку вносят 14 г активированного силикагеля в гексане, уплотняют сорбент, вносят слой безводного сернокислого натрия высотой 1 - 1,5 см и промывают колонку 30 мл гексана. Скорость прохождения растворителя через колонку устанавливают 2 капли в секунду. Сухой остаток в колбе растворяют в 10 мл смеси гексан - бензол и вносят в колонку. Колбу промывают 3 х 5 мл смеси гексан - бензол и каждый новый объем вносят в колонку после того, как мениск предыдущего достигнет поверхности силикагеля. Промывают колонку 50 мл гексана, установив скорость прохождения растворителя через колонку 3 - 4 капли в секунду, и собранный элюат отбрасывают. Стомп элюируют из колонки 130 мл смеси гексан - бензол. Первые 30 мл элюата отбрасывают, а последующие 100 мл собирают, упаривают досуха на ротационном вакуум-испарителе при температуре водяной бани 40 °С, растворяют осадок в 2 - 5 мл бензола и аликвоты, по 4 - 6 мкл вводят в хроматограф.

2.5.2. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации.

Колонка стеклянная 1000 х 3 мм.

Твердый носитель Газ-Хром 0 0,1 - 0,12 мм.

Неподвижная фаза ECSS-X, 5%.

Температура детектора - 230 °С, колонки - 190 °С, испарителя - 250 °С.

Скорость газа-носителя (азота) 32 мл/мин.; продувочного газа (азота) - 94 мл/мин.

Время удерживания стомпа при этих условиях 3,2 мин.

В испаритель вводят 4 мкл рабочего раствора в бензоле.

Количественное определение проводят путем сравнения пиков стандартного и исследуемого растворов по высоте. Содержание остаточных количеств стомпа в анализируемой пробе вычисляют как среднее их трех параллельных определений.

Расчет производится по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

4. Методические указания разработаны:

Пережогина Т.А., Всесоюзный научно-исследовательский институт табака и махорки им. А.И. Микояна (НПО "Табак").