"Временные методические указания по определению действующего вещества препарата гибберсиб в воде и почве методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 27.11.1984 N 3162-84)

Гибберсиб представляет собой мелкий однородный гигроскопичный порошок, получаемый высушиванием на распылительной сушилке продуктов метаболизма грибка Fusarium moniliforme Sheld. Гибберсиб является смесью натриевых солей гибберелловой, карбоновых кислот и карбоната натрия.

Растворимость гибберсиба в воде при 20 °C - 2 г/л. Растворим в этиловом и метиловом спиртах, этилацетате, ацетоне. Нерастворим в бензоле, гексане.

Применяется в качестве регулятора роста растений (томаты, виноград) в период цветения.

2.1.1. Принцип метода

Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) ч, ГОСТ 8981-78.

Хлороформ медицинский, фармакопея СССР.

Метанол чда, ГОСТ 6995-77.

Кислота серная хч, ГОСТ 4204-77, 70-процентный раствор.

Аммиак водный технический, ГОСТ 9-77.

Ультрахемископ типа "Хроматоскоп".

Центрифуга типа ЦЛС-31М.

Ротационный испаритель ИР-1М или любой другой.

Весы аналитические типа ВЛР-200 (отсчет до 0,0001 г).

Весы технические типа ВЛТК-500.

Универсальная встряхивающая машина типа К-203 лабор. 2162.

Камера для хроматографии из комплекта КТХ-01 или сосуды цилиндрические типа СЦ.

Пульверизатор стеклянный.

pH-метр типа pH-262.

Воронка делительная типа ВД-1-250, ГОСТ 25336-82.

Колбы типа КнКШ-100, 250-29/32, ГрКШ-10-14/23, ГОСТ 25336-82.

Пипетка 1-1-1, ГОСТ 20292-74.

Линейка измерительная металлическая, ГОСТ 427-75.

Микрошприц 100 мкл.

Капилляры стеклянные.

Сито с отверстиями 1 мм.

2.4.1. Приготовление системы растворителей

Смешивают хлороформ с метанолом в соотношении 10:1 (система I) и хлороформ, метанол с уксусной кислотой в соотношении 10:1:0,1 по объему (система II).

2.4.2. Отбор проб

Отбор пробы производится в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (МЗ СССР, ГСЭУ, Москва, 1980 г., N 2051-75 от 21.02.79).

Анализы производят в день отбора проб или на следующий день.

2.5.1. Экстракция гиббереллина

Вода. К 200 мл воды приливают 80 мл 0,5% раствора аммиака, смешивают на встряхивающей машине в течение 15 мин. и доводят pH раствора до 2,2 +/- 0,2. Затем приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями по 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от воды на центрифуге (10 мин. при 5000 об./мин.) и упаривают до объема ~ 0,1 - 0,2 мл.

Почва. Почву просеивают через сито с отверстиями 1 мм. К 100 г почвы приливают 80 мл 0,5-процентного раствора аммиака, гомогенизируют в течение 15 мин. на встряхивающей машине и осаждают на центрифуге в течение 10 мин. при 5000 об./мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок промывают 30 мл 0,5-процентного раствора аммиака, еще раз центрифугируют. Объединяют обе порции и доводят pH до 2,2 +/- 0,2. Приливают 25 мл насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют в делительной воронке этилацетатом порциями по 50, 40, 40 мл. Этилацетатный экстракт освобождают от хлопьев и воды на центрифуге (при 5000 об./мин., 10 мин.). Экстракт сливают, отделяя воду на делительной воронке, а осадок промывают 10 мл этилацетата, еще раз центрифугируют, объединяют с экстрактом и упаривают до объема ~ 0,1 - 0,2 мл.

2.5.2. Хроматографирование и проявление

Экстракт из почвы. На хроматографическую пластинку в левый угол на расстоянии 15 - 20 мм от края пластинки наносят упаренный экстракт из почвы (диаметр пятна 10 - 12 мм) и хроматографируют в системе II (хлороформ - метанол - ледяная уксусная кислота 10:1:0,1). После того как фронт растворителя дойдет до края пластинки, ее извлекают из хроматографической камеры, поворачивают на 90° и помещают в ту же систему для хроматографирования. Так же поступают со стандартным раствором, нанесенным на другую пластинку. После хроматографирования пластинки обрабатывают серной кислотой, как указано для воды.

С помощью линейки или миллиметровой бумаги измеряют размеры пятен на хроматограммах проб и стандартных растворов, вычисляют их площади.

Выполняются требования по технике безопасности, необходимые при работе в химических лабораториях.