"Временные методические указания по определению методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии аналога ювенильного гормона п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне пшеницы, почве, воде и зеленых листьях растений"
(утв. Минздравом СССР 12.04.1985 N 3254-85)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

п-Хлорфениловый эфир гераниола-1-(4-хлорфенокси)-3,7-диметил-2,6-октадиен.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении п-хлорфенилового эфира гераниола органическим растворителем, очистке экстрактов методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, идентификации методом тонкослойной хроматографии и количественном определении методом газожидкостной хроматографии с пламенно-ионизационным детектором на неподвижных фазах SE-30 и XE-60.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0,002 - 5,0 мг/кг. В таблицах 1 и 2 приведены средние значения определений, стандартное отклонение и доверительный интервал для различных концентраций.

2.1.3. Избирательность метода в присутствии пестицидов, близких по химическому строению и области применения

Близким по строению и области применения является р-бромфениловый эфир гераниола, однако в системах гексан - этилацетат (9:1) и гексан - ацетон (4:1) они четко разделяются. Фосфорорганические пестициды не мешают определению п-хлорфенилового эфира гераниола.

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Циклогексан, ч., ТУ 6-09-4357-77.

Диэтиловый эфир, для наркоза.

Натрий сернокислый б/в, х.ч., ГОСТ 4166-81.

Алюминия окись для хроматографии II ст. активности, ТУ 6-09-3916-83.

Алюминия окись II ст. акт. по Брокману, пр-во ВНР "Реахим".

Йод кристаллический.

Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.

Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60.

Стандартный раствор п-хлорфенилового эфира гераниола в гексане - 100 мкг/мл и 10 мкг/мл.

Хроматограф серии "Цвет" с пламенно-ионизационным детектором.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Колбы конические емк. 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные емк. 500, 250, 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Фильтр Шотта N 3.

Воронка делительная емк. 2 л, ГОСТ 8613-75.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Пипетки 1 - 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Микропипетки 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.

Стеклянные пластины для ТСХ размером 8 х 16 мм.

Эксикатор для проявления пластин в парах йода.

Сосуды для ТСХ объемом не менее 1 л с крышками.

Сосуды для препаративной ТСХ (кристаллизаторы с крышками).

Микрошприц емк. 10 мкл, МШ, ТУ 5Е.2.833.024.

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб производят в соответствии с Унифицированными правилами отбора сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79.

Для анализа используют средние пробы измельченной и просеянной почвы массой 50 г, воды объемом 1 л, зерна пшеницы 50 г, зеленых листьев растений - 10 г.

2.5.1. Экстракция, очистка экстракта

Почва. 50 г почвы помещают в коническую колбу, заливают 150 мл диэтилового эфира и встряхивают 1 час. Раствор фильтруют через слой сульфата натрия б/в. Повторяют экстракцию дважды с 70 мл растворителя в течение 15 минут. Объединенные экстракты концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до 1 - 2 мл при температуре 30°. Остаток количественно переносят на пластину с незакрепленным слоем окиси алюминия II ст. активности по Брокману. Толщина слоя - 2 мм. Вещество элюируют циклогексаном в сосуде для препаративной ТСХ, размещая пластину под углом 7 - 10°. Зону, соответствующую п-хлорфениловому эфиру (по сопоставлению со стандартом, который обнаруживают в аналогичных условиях при проявлении в парах йода), количественно переносят на фильтр Шотта N 3 и промывают подогретым до 40 - 50° гексаном. Фильтрат (очищенный экстракт) при необходимости концентрируют на ротационном испарителе и анализируют методами ТСХ и ГЖХ.

Вода. Пробу воды объемом 1 л помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют гексаном порциями 150, 80 и 80 мл по 2 минуты. Органический слой отделяют, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют при температуре не выше 40° и далее очищают и анализируют, как описано выше.

Зерно. 50 г зерна помещают в коническую колбу и экстрагируют гексаном трижды, используя последовательно 70, 30 и 30 мл растворителя в течение 60, 3 и 3 минут. Объединенный экстракт очищают и анализируют, как описано выше.

Зеленые листья растений. Навеску 10 г измельченного растительного материала помещают в коническую колбу и трижды экстрагируют гексаном порциями по 70 мл в течение 40, 10 и 10 минут. Объединенный растительный экстракт очищают и анализируют, как описано выше.

2.5.2. Идентификация и количественное определение п-хлорфенилового эфира гераниола

2.5.2.1. Метод тонкослойной хроматографии

2.5.2.2. Метод газожидкостной хроматографии

Носитель - Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

Неподвижная фаза - 5% XE-60 либо 5% SE-30.

Расход азота - 60 мл/мин. - 40 мл/мин.

Температура испарителя - 210 °С - 230 °С.

Температура колонки - 180 °С - 205 °С.

Линейный диапазон детектирования - 10 - 100 нг.

Минимально детектируемое количество - 10 нг.

Время удерживания - 7,58 мин. (на XE-60) и 4,11 мин. (на SE-30).

Вводимый в колонку газового хроматографа объем анализируемого экстракта - 1 - 2 мкл.

Содержание п-хлорфенилового эфира гераниола в пробе при определении методом ГЖХ рассчитывают по формуле:

В процессе работы по данным Методическим указаниям нужно придерживаться правил техники безопасности, рекомендованных при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

Методические указания подготовлены Албул И.А. - Всесоюзный научно-исследовательский институт биологических методов защиты растений, г. Кишинев.