"Временные методические указания по определению остаточных количеств нафталевого ангидрида в зерне кукурузы, льна и воде тонкослойной хроматографией"
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6096-91)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Нафталевый ангидрид - антидот последействия хлорсульфуроновых гербицидов. Действующее начало - ангидрид 1,8-нафталиндикарбоновой кислоты.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении нафталевого ангидрида из зерна кукурузы или льна хлороформом, очистке экстракта хроматографией на колонке с двуокисью кремния для люминофоров, а затем микросублимацией в вакууме с последующим определением ТСХ.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон измеряемых концентраций - 0,2 - 3,0 мг/кг в растительных пробах, 0,25 - 3,75 мг/л в воде.

Предел обнаружения в хроматографической пробе - 0,05 мкг.

Предел определения в пробе - 0,2 мг/кг в растительных пробах, 0,00025 мг/л в воде.

Среднее определение стандартных количеств нафталевого ангидрида при n = 15 - 75%.

Стандартное отклонение S - +/- 13%.

Доверительный интервал среднего определения - 75 +/- 15% (при n = 5, P = 0,95).

Размах варьирования - 60 - 100%.

2.1.3. Избирательность метода

Метод селективен, ФОП, ХОП определению не мешают. Селективность метода обеспечивается сочетанием альтернативных систем подвижных растворителей различной полярности и трех проявляющих реагентов.

н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ, чда, ГОСТ 20015-74.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-75.

Этиловый спирт, ректификат.

Родамин С, ТУ 856-53, или родамин Б - 1-процентный раствор в этаноле.

Двуокись кремния для люминофора (сход с сита размером 0,4 мм) по ГОСТ 9428-73.

Стандартные растворы нафталевого ангидрида в хлороформе с содержанием 100 мкг/мл (раствор 1) или 1 мкг/мл (раствор 2). Стандартные растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 3 месяцев.

Хроматографические пластинки марки "Силуфол" UV 254.

Камеры хроматографические с пришлифованными крышками, ГОСТ 25336-82, или аналогичные.

Источник УФ-света с длиной волны 254 и 366 нм.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-817-76, или аналогичный с набором колб.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82, или аналогичные.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл.

Колбы плоскодонные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250, 500 мл.

Колонка для хроматографии с краном длиной 15 см, внутренним диаметром 1 см.

Прибор для микросублимации в вакууме.

Пробирки градуированные, ГОСТ 1770-74, с пробками на шлифах.

Пипетки с делениями, ГОСТ 20292-74Е, на 10,0; 1,0; 0,1 мл.

Микрошприц на 100 мкл.

Кофейная мельница бытовая.

Хроматографические камеры за 1 час до начала хроматографирования заполняют смесью гексан - ацетон (2:1) и хлороформ - гексан (95:5) для насыщения камер парами подвижных растворителей. Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 - 1,0 см от уровня дна камеры.

Хроматографическую колонку заполняют на высоту 10 см суспензией двуокиси кремния для люминофоров в гексане. Избыток растворителя сбрасывают при подсоединении слабого вакуума, оставляя слой растворителя на уровне 1 - 3 мл над поверхностью сорбента.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.

Кукурузу и лен размалывают с помощью кофейной мельницы до консистенции манной крупы. Для анализа берут навеску помола кукурузы (10 г), льна (2,5 г).

Кукуруза, лен. Навеску кукурузы (10 г), льна (2,5 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, увлажняют ее 3 мл воды (дистиллированной) и экстрагируют нафталевый ангидрид хлороформом трижды порциями по 70 мл. Экстракт фильтруют в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 7 г) и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 250 мл.

С помощью ротационного вакуумного испарителя концентрируют раствор до объема ~ 0,5 мл. Остаток переносят на подготовленную колонку, заполненную двуокисью кремния для люминофоров в гексане. Перенос осуществляют с помощью бензола. Раствору дают возможность впитаться в сорбент, колбу несколько раз обмывают бензолом и полученный раствор при открытом кране переносят на колонку. Нафталевый ангидрид элюируют с колонки 25 мл бензола.

Бензольный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема ~ 0,5 мл и остаток количественно переносят в патрон сублиматора 25 мл ацетона. Затем нагреванием на горячей водяной бане полностью отгоняют растворитель из патрона, вставив предварительно запаянный капилляр для равномерного кипения раствора. После отгона растворителя в сублиматор вставляют "палец", подсоединяют водяное охлаждение и проводят сублимирование при давлении 0,2 - 0,3 мм рт. ст. на кипящей водяной бане в течение 40 мин.

После окончания сублимации систему разгерметизируют и смывают нафталевый ангидрид с "пальца" сублиматора 20 мл безводного ацетона в грушевидную колбочку вместимостью 50 мл.

Отгоняют ацетон с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха и к сухому остатку добавляют пипеткой 1 мл безводного ацетона. Колбочку закрывают пробкой на шлифе и тщательно обмывают стенки растворителем. Наносят на хроматографическую пластинку с помощью микрошприца аликвоту (50 - 200 мкл) полученного раствора.

Вода. Воду (1 л) помещают в делительную воронку вместимостью 2000 мл и экстрагируют нафталевый ангидрид трижды хлороформом порциями по 50 мл. Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия (~ 10 г). Фильтруют, концентрируют с помощью вакуумного испарителя до объема ~ 0,5 мл, остаток переносят в патрон сублиматора, сублимируют нафталевый ангидрид и проводят все определения, как это описано для кукурузы.

2.7.1. Определение ТСХ

Чувствительность детектирования пятен увеличивается при рассматривании пластинки при лямбда = 366 нм без обработки ее раствором родамина Б. Тогда на темно-фиолетовом фоне пластинки отчетливо видны светящиеся флуоресцентные пятна нафталевого ангидрида с нижним пределом детектирования 0,025 мкг. Линейный диапазон детектирования составляет 0,025 - 0,3 мкг. Пятна стабильны в течение длительного времени.

Количественное определение нафталевого ангидрида в анализируемой пробе проводят сравнивая площади и интенсивность окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. Содержание нафталевого ангидрида в пробе (X) в мг/кг или в мг/л вычисляют по формуле:

Соблюдать все меры предосторожности, необходимые при работе с горючими растворителями.