"ГОСТ 34985-2023. Межгосударственный стандарт. Добавки пищевые. Методы определения красителя Рибофлавины E101"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 03.10.2023 N 1041-ст)

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевых добавок - филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Федеральный научный центр пищевых систем имени В.М. Горбатова" РАН (ВНИИПД - филиал ФГБНУ "ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова" РАН)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 31 августа 2023 г. N 164-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 3 октября 2023 г. N 1041-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34985-2023 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2024 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт распространяется на пищевую добавку Рибофлавины (Riboflavins) E101 (далее - краситель), представляющую собой пищевые красители: Рибофлавин (Riboflavin) E101 (i), Натриевую соль рибофлавин 5-фосфат (Riboflavin 5-phosphate sodium) E101 (ii) и Рибофлавин из Bacillus subtilis (Riboflavin from Bacillus subtilis) E101 (iii), содержащие в своем составе рибофлавин (лактофлавин) и/или натриевую соль фосфорного эфира рибофлавина, и устанавливает:

- идентификационные тесты на основное красящее вещество красителя;

- спектрофотометрический метод измерения массовой доли основного красящего вещества красителя.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.0.004 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.007.0 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 12.4.103 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная, средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация

ГОСТ 61 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 199 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4328 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4517-2016 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 6709 <*> Вода дистиллированная. Технические условия

--------------------------------

<*> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018.

ГОСТ 18995.3 Продукты химические органические. Метод определения величины удельного вращения

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 <**> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

--------------------------------

<**> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 5725-6-2002.

ГОСТ ISO/IEC 17025 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3.1 Для составления суммарной пробы красителя из каждой упаковочной единицы партии красителя отбирают мгновенные пробы.

Партией считают количество красителя, произведенное одним изготовителем по одному нормативному документу за один технологический цикл, в одинаковой упаковке, сопровождаемое товаросопроводительной документацией, обеспечивающей прослеживаемость продукции.

3.2 Выборку упаковочных единиц из партии осуществляют методом случайного отбора в соответствии с таблицей 1.

3.3 Мгновенные пробы отбирают из разных мест каждой упаковочной единицы, попавшей в выборку.

Масса мгновенной пробы - не более 10 г.

Масса мгновенной пробы и число мгновенных проб из каждой упаковочной единицы, попавшей в выборку, должны быть одинаковыми.

Мгновенные пробы отбирают с помощью пробоотборника (щупа или металлической трубки), погружая его в краситель не менее чем на 3/4 глубины.

3.4 Составляют суммарную пробу, для этого мгновенные пробы, отобранные по 3.2, помещают в сухую чистую емкость из стекла или полимерных материалов и тщательно перемешивают.

Рекомендуемая масса суммарной пробы - не менее 50 г.

3.5 Подготовленную суммарную пробу делят на две равные части, которые помещают в чистые, сухие, плотно закрывающиеся стеклянные или полимерные емкости.

Емкость с первой частью суммарной пробы направляют в лабораторию для проведения анализов.

Емкость со второй частью пробы опечатывают, пломбируют и хранят для повторного контроля в случае возникновения разногласий в оценке качества и безопасности красителя. Срок хранения пробы в темном месте при температуре от 5 °C до 8 °C и относительной влажности не более 60% - до окончания срока годности красителя.

3.6 Емкости с пробами снабжают этикетками, на которых должны быть указаны:

- полное наименование красителя и его E-номер;

- наименование и местонахождение изготовителя;

- номер партии;

- масса нетто партии;

- количество упаковочных единиц в партии;

- дата изготовления;

- дата отбора проб;

- срок хранения пробы;

- фамилии лиц, проводивших отбор данной пробы.

4.1 При выполнении анализов необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007 и ГОСТ 12.4.103.

4.2 Помещение, в котором проводят анализы, должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021.

4.3 Электробезопасность при работе с электроустановками - по ГОСТ 12.2.007.0 и по ГОСТ 12.1.019.

4.4 Организация обучения работающих требованиям безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

4.5 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

4.6 Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

При подготовке и проведении измерений должны быть соблюдены следующие условия:

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

К выполнению и обработке результатов анализа допускают специалиста, имеющего высшее или среднее специальное химическое образование и опыт работы в химической лаборатории, владеющего техникой выполнения анализов с применением методов спектрофотометрии, освоившего настоящую методику, прошедшего обучение работе с приборами и инструктаж по технике безопасности.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 специального (I) класса точности с пределами абсолютной допускаемой погрешности в эксплуатации +/- 0,001 г.

Весы утвержденного типа, поверенные в установленном порядке, с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,02 мг.

Спектрофотометр с диапазоном измерения в интервале длин волн от 350 до 700 нм, допустимой абсолютной погрешностью коэффициента пропускания не более +/- 1%, укомплектованный компьютером, принтером и соответствующим аттестованным программным обеспечением.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание заданного режима температуры от 20 °C до 100 °C с погрешностью +/- 2 °C.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Кюветы кварцевые толщиной поглощающего слоя 1 см.

Пипетки градуированные 2-1-2-5, 2-1-2-10 и 2-1-2-25 по ГОСТ 29227.

Колбы мерные из темного стекла со шлифом и пришлифованной пробкой вместимостью 200, 500 см³, 1-го класса точности.

Цилиндры 1-100-1 с ценой наименьшего деления 1 см³ по ГОСТ 1770.

Стаканы любого типа исполнения вместимостью 100, 200 см³ по ГОСТ 25336.

Колбы плоскодонные любого типа исполнения вместимостью 50 см³.

Пробки из пластмассы или стеклянные с конусами 12/21, 14/23 по ГОСТ 1770.

Палочка стеклянная.

Стаканчики для взвешивания СВ-19/9 (24/10) или СН-34/12 по ГОСТ 25336.

Поляриметр, измеряющий величину угла вращения с точностью +/- 0,02°.

Рибофлавин (Riboflavin) E101 (i) с содержанием основного красящего вещества не менее 98% в сухом веществе.

Натриевая соль рибофлавин 5-фосфат (Riboflavin 5-phosphate sodium) E101 (ii) с содержанием основного красящего вещества не менее 95% в пересчете на C₁₇H₂₀N₄NaO₉P·2H₂O.

Рибофлавин из Bacillus subtilis (Riboflavin from Bacillus subtilis) E101 (iii) с содержанием основного красящего вещества не менее 98% в сухом веществе.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.

Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199, ч.д.а.

Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч. ледяная.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных оборудования и устройств, посуды и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивы по качеству не ниже вышеуказанных.

Раствор соляной кислоты массовой долей 10% готовят по ГОСТ 4517-2016 (пункт 4.89).

Раствор хранят в плотно закрытой емкости в условиях в соответствии с разделом 5 не более 6 мес.

Раствор гидроокиси натрия массовой долей 10% готовят по ГОСТ 4517-2016 (пункт 4.106).

Раствор хранят в плотно закрытой полимерной емкости в условиях в соответствии с разделом 5 не более 6 мес.

В стакане вместимостью 200 см³ взвешивают от 1,00 г красителя Рибофлавин E101 (i) или Рибофлавин E101 (iii). Отмеряют цилиндром 100 см³ дистиллированной воды, добавляют ее в стакан и перемешивают содержимое стакана стеклянной палочкой до полного растворения красителя. Раствор должен иметь зелено-желтый цвет с интенсивной зеленой флюоресценцией в отраженном или ультрафиолетовом свете.

Приготовленный раствор красителя делят на две равные части, помещая каждую в стакан вместимостью 100 см³. Затем к одной части приготовленного раствора красителя пипеткой добавляют по каплям раствор соляной кислоты, приготовленный по 8.1.1, и тщательно перемешивают.

Ко второй части приготовленного раствора красителя пипеткой добавляют по каплям раствор гидроокиси натрия, приготовленный по 8.1.2.

В обоих стаканах после добавления к анализируемым растворам раствора соляной кислоты и раствора гидроокиси натрия зеленая флюоресценция исчезает.

При невыполнении этого условия делают заключение о том, что анализируемый образец не соответствует требованиям, установленным для пищевой добавки красителя Рибофлавины.

Для красителя Рибофлавин E101 (ii) тест не проводится.

Метод основан на измерении удельного оптического вращения при температуре (20,0 +/- 0,5) °C и длине волны 589,3 нм, характеризующем способность рибофлавина вращать плоскость поляризации при прохождении через него поляризованного света.

9.2.1 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 0,05 моль/дм³ (0,05 М)

Готовят раствор гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 2 моль/дм³ (2 М) по ГОСТ 4517-2016 (пункт 4.107).

Раствор хранят в плотно закрытой полимерной емкости в условиях в соответствии с разделом 5 не более 6 мес.

Отбирают пипеткой 1 см³ приготовленного раствора, дозируют его в колбу вместимостью 50 см³. Затем пипеткой прибавляют 39 см³ дистиллированной воды и перемешивают полученный раствор.

Раствор соляной кислоты массовой долей 20% готовят по ГОСТ 4517-2016 (пункт 4.89).

Раствор хранят в плотно закрытой емкости в условиях в соответствии с разделом 5 не более 6 мес.

9.2.3.1 В стаканчик для взвешивания вносят 0,0500 г красителя Рибофлавин E101 (i) или Рибофлавин E101 (iii), затем стаканчик с образцом вместе с крышкой помещают в сушильный шкаф, нагретый до температуры 100 °C, и выдерживают при этой температуре в течение 4 ч. Затем стаканчик закрывают крышкой, помещают в эксикатор и охлаждают до температуры (20 +/- 2) °C.

В стаканчик с высушенным образцом вносят пипеткой 10 см³ раствора, полученного по 9.2.1, и перемешивают до полного растворения образца.

9.2.3.2 В стаканчик для взвешивания вносят 0,1500 г красителя Рибофлавин E101 (ii), затем стаканчик с образцом вместе с крышкой помещают в сушильный шкаф, нагретый до температуры 100 °C, и выдерживают при этой температуре в течение 4 ч. Затем стаканчик закрывают крышкой, помещают в эксикатор и охлаждают до температуры (20 +/- 2) °C.

В стаканчик с высушенным образцом вносят пипеткой 10 см³ раствора, полученного по 9.2.2, и перемешивают до полного растворения образца.

Измеряют удельное оптическое вращение на поляриметре по ГОСТ 18995.3 в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора, не позднее чем через 30 мин с момента приготовления раствора образца.

Значения удельного оптического вращения растворов красителя должны находиться в пределах, указанных в таблице 2.

При невыполнении указанных условий делают заключение о том, что анализируемый краситель не соответствует требованиям, установленным для пищевой добавки красителя Рибофлавины.

Метод основан на определении положения максимумов светопоглощения и отношений соответствующих им значений оптических плотностей, полученных при измерении спектра раствора красителя спектрофотометрическим методом.

Анализ должен проводиться в защищенном от света месте.

В стакане вместимостью 100 см³ взвешивают 1,4 г натрия уксуснокислого, затем прибавляют 98,6 г дистиллированной воды и перемешивают содержимое стаканчика стеклянной палочкой до полного растворения.

Срок хранения раствора в закрытой емкости в условиях в соответствии с разделом 5 не более 6 мес.

10.2.2 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 2 моль/дм³ (2 М)

Готовят раствор гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 2 моль/дм³ (2 М) по ГОСТ 4517-2016 (пункт 4.107).

10.2.3.1 В мерной колбе из темного стекла вместимостью 500 см³ взвешивают пробу красителя Рибофлавин E101 (i) или Рибофлавин E101 (iii) в соответствии с таблицей 3. Пипеткой дозируют в колбу 5 см³ дистиллированной воды и суспендируют краситель в воде, добиваясь полного смачивания пробы красителя.

Прибавляют к полученной суспензии пипеткой 5 см³ раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 2 моль/дм³ (2 М), приготовленного по 10.2.2, и перемешивают до полного растворения красителя.

Отмеряют цилиндром 100 см³ дистиллированной воды и переносят в колбу с раствором красителя.

Затем пипеткой прибавляют 2,5 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

10.2.3.2 Пипеткой отмеряют 20 см³ полученного по 10.2.3.1 раствора и переносят его в мерную колбу из темного стекла вместимостью 200 см³.

Затем прибавляют пипеткой 3,5 см³ раствора ацетата натрия, приготовленного по 10.2.1, и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

10.2.4.1 В мерной колбе из темного стекла вместимостью 500 см³ взвешивают пробу красителя Рибофлавин E101 (ii) в соответствии с таблицей 3.

Затем пипеткой прибавляют 2,5 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

10.2.4.2 Пипеткой отмеряют 20 см³ полученного раствора и переносят его в мерную колбу из темного стекла вместимостью 200 см³.

Затем прибавляют пипеткой 3,5 см³ раствора ацетата натрия, приготовленного по 10.2.1, и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Раствор анализируемого красителя, приготовленный по 10.2.3.2 или по 10.2.4.2, дозируют пипеткой в кювету и регистрируют спектр поглощения относительно оптической плотности дистиллированной воды в диапазоне длин волн от 200 до 700 нм в соответствии с инструкцией по эксплуатации спектрофотометра.

Измерение оптической плотности должно проводиться в свежеприготовленном растворе, так как интенсивность цвета раствора зависит от времени его хранения.

При выполнении условий, указанных в таблицах 2 и 3, идентифицируют анализируемый краситель как пищевой краситель Рибофлавины E101: Рибофлавин (Riboflavin) E101 (i) или Натриевую соль рибофлавин 5-фосфат (Riboflavin 5-phosphate sodium) E101 (ii), или (Riboflavin from Bacillus subtilis) E101 (iii).

Метод основан на определении массовой доли основного красящего вещества красителя по измерению интенсивности окраски его раствора спектрофотометрическим методом при длине волны, соответствующей характеристическому максимуму светопоглощения.

Кювету спектрофотометра заполняют приготовленным по 10.2.3.2 или по 10.2.4.2 раствором анализируемого красителя и измеряют оптическую плотность при длине волны 444 нм относительно оптической плотности дистиллированной воды в соответствии с инструкцией по эксплуатации спектрофотометра.

Измерение оптической плотности должно проводиться в свежеприготовленном растворе, так как интенсивность цвета зависит от времени его хранения.

Массовую долю основного красящего вещества в анализируемом красителе X, %, рассчитывают по формуле

где A - оптическая плотность раствора анализируемого красителя, измеренная по 11.3, ед. опт. пл.;

M - масса раствора анализируемого красителя, рассчитанная по формуле

где V - объем раствора анализируемого красителя по 10.2.3.1 и 10.2.4.1, см³; V = 500 см³;

- плотность раствора анализируемого красителя по 10.2.3.1 и 10.2.4.1; ;

F - фактор разведения; F = 10;

- удельный коэффициент светопоглощения, численно равный оптической плотности раствора красителя, с массовой долей красящего вещества 1% при толщине поглощающего слоя 1 см, ед. опт. пл.·%^-1·см^-1;

;

d - толщина поглощающего слоя, см; d = 1 см;

m - масса пробы анализируемого красителя, взятой для анализа, г, в соответствии с таблицей 3.

Вычисления проводят с записью результата до второго десятичного знака.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений , %, округленное до первого десятичного знака, если выполняются условия приемлемости по 12.2.1.

12.2.1 Абсолютное значение разности между результатом двух параллельных определений, полученными в условиях повторяемости при доверительной вероятности P = 95%, не превышает предела повторяемости r, представленного в таблице 4.

12.2.2 Абсолютное значение разности между результатами двух параллельных определений, полученными в условиях воспроизводимости при доверительной вероятности P = 95%, не превышает предела воспроизводимости R, представленного в таблице 4.

12.2.3 Границы абсолютной погрешности определения массовой доли основного красящего вещества в анализируемом красителе при P = 95% представлены в таблице 4.

Результат определения массовой доли основного красящего вещества в пищевом красителе Рибофлавины E101 представляют в виде при P = 95%.

Контроль качества результатов измерений в лаборатории предусматривает проведение контроля стабильности результатов измерений с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6-2003 (раздел 6).

Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ ISO/IEC 17025.