"ФС.2.1.0691. Фармакопейная статья. Окситоцин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 N 120)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

S^3.1,S^3.6-Цикло(L-цистеинил-L-тирозил-L-изолейцил-L-глутаминил-L-аспарагинил-L-цистеинил-L-пролил-L-лейцилглицинамид).

Содержит не менее 93,0% и не более 102,0% окситоцина C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество.

<*> Существует в форме окситоцина ацетата.

Биологическая активность окситоцина соответствует 600 МЕ на 1 мг окситоцина C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

<*> Гигроскопичен.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, легко растворим в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М.

<*> Растворяется в разбавленном растворе уксусной кислоты.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Проводят определения 1 и 2 или 1 и 3.

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика окситоцина на хроматограмме раствора стандартного образца окситоцина (раздел "Количественное определение").

2. Аминокислотный состав. Определение проводят в соответствии с ОФС "Аминокислотный анализ", гидролиз по методу 1, анализ по методу 1. Относительное содержание каждой аминокислоты рассчитывают в мольных долях, принимая за единицу одну шестую суммарного мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, изолейцина и лейцина по формуле:

где n_i - количество молей соответствующей аминокислоты, мкмоль;

- сумма мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, изолейцина и лейцина, мкмоль.

Относительное содержание аминокислот должно быть в следующих пределах: аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, пролин, глицин, лейцин и изолейцин - от 0,90 до 1,10; тирозин - от 0,7 до 1,05; полуцистин - от 1,4 до 2,1. Остальные аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых количествах.

3. ¹Н-ЯМР-спектроскопия (ОФС "Спектроскопия ядерного магнитного резонанса").

Растворитель. Дейтерия оксид, содержащий 0,02 мг/мл дейтерированного триметилсилилпропионата натрия (ТСП), доводят pH дейтерированной уксусной кислотой до значений 5 - 6. Хранят в контейнере из полиэтилена высокой плотности.

Испытуемый раствор. Готовят раствор субстанции в растворителе с концентрацией окситоцина около 10 мг/мл.

Раствор стандартного образца окситоцина. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца окситоцина для ЯМР идентификации в растворителе с концентрацией окситоцина около 10 мг/мл.

Оборудование. Импульсный ЯМР-спектрометр с рабочей частотой на протонах не менее 300 МГц.

Параметры регистрации ¹Н-ЯМР спектров

Примечание - Спектры испытуемого раствора и раствора сравнения должны записываться без вращения образца и при одинаковой температуре.

Анализ ¹Н-ЯМР спектров. Спектр испытуемого раствора должен соответствовать спектру раствора стандартного образца окситоцина после нормализации обоих спектров с целью уравнивания их по интенсивности. Допускается наличие сигналов протонов уксусной кислоты при 1,9 м.д., воды при 4,9 м.д. и сигналов остаточных растворителей. Допускается различная интенсивность сигналов уксусной кислоты.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 10 мг субстанции в 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,01 М должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен быть бесцветным (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

pH раствора. От 3,0 до 6,0 (2,0% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Подвижная фаза (ПФА). Растворяют 15,6 г натрия дигидрофосфата дигидрата в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.

Подвижная фаза (ПФБ). Ацетонитрил - вода 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси F. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца примеси F окситоцина растворяют в 1,0 мл ПФА.

Раствор для идентификации. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца окситоцина для идентификации, содержащий примеси B, D, E и I, растворяют в 1,0 мл ПФА.

Примечание

Примесь B: S^3.1,S^3.6':S^3.6,S^3.1'-цикло[бис(L-цистеинил-L-тирозил-L-изолейцил-L-глутаминил-L-аспарагинил-L-цистеинил-L-пролил-L-лейцилглицинамид)] [20054-93-7].

Примесь D: [3-лейцин]окситоцин [4294-11-5].

Примесь E: N^2.1-ацетилокситоцин [10551-48-1].

Примесь F: [5-(3-цианоаланин)]окситоцин [87590-89-4].

Примесь I: [5-аспарагиновая кислота]окситоцин [65907-78-0].

Хроматографируют раствор для идентификации, раствор стандартного образца примеси F и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Окситоцин - 1 (около 10 мин); примесь I - около 0,9; примесь D - около 0,95; примеси E и F - около 1,4; примесь B - около 1,7.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B, D, E и I используют хроматограмму раствора для идентификации. Для идентификации пика примеси F используют хроматограмму раствора стандартного образца примеси F и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу примеси F.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для идентификации отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси D и окситоцина должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. Содержание любой примеси в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС "Хроматография"):

- примесь B - не более 1,0%;

- примесь I - не более 1,0%;

- сумма примесей E и F - не более 1,5%;

- любая другая примесь - не более 1,0%;

- сумма примесей - не более 5,0%.

Не учитывают пики менее 0,1%.

Вода. Не более 5,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 50 мг (точная навеска) субстанции.

Уксусная кислота. От 6,0% до 10,0% (ОФС "Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 15 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси ПФБ и ПФА в соотношении 5:95 по объему и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 300 ЕЭ на 1 мг окситоцина (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

--------------------------------

<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца окситоцина. Готовят раствор фармакопейного стандартного образца окситоцина в ПФА с концентрацией окситоцина в растворе около 0,25 мг/мл.

Хроматографируют раствор стандартного образца окситоцина и испытуемый раствор.

Содержание окситоцина C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂ в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество в процентах (X), вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика окситоцина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика окситоцина на хроматограмме раствора стандартного образца окситоцина;

C₁ - концентрация окситоцина в испытуемом растворе, мг/мл;

C₀ - концентрация окситоцина в растворе стандартного образца окситоцина, мг/мл;

P - содержание окситоцина в фармакопейном стандартном образце окситоцина, %;

A - содержание уксусной кислоты в субстанции, %;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищенном от света месте, при температуре от 2 до 8 °C.