"ФС.2.1.0337. Фармакопейная статья. Аргинин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

(2S)-2-Амино-5-(карбамимидоиламино)пентановая кислота.

L-Аргинин.

Содержит не менее 98,5% и не более 101,0% аргинина C₆H₁₄N₄O₂ в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.

<*> Гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1, по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца аргинина.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец высушивают при температуре 105 °C и записывают спектры сухих остатков.

2. ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография"). Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора Б по положению, величине и окраске должна соответствовать зоне адсорбции аргинина на хроматограмме раствора стандартного образца аргинина (раздел "Родственные примеси. 1. Аминосоединения").

3. Качественная реакция. Растворяют 25 мг субстанции в 2 мл воды, прибавляют 1 мл раствора 0,1% и 2 мл смеси, состоящей из натрия гипохлорита раствора концентрированного и воды (1:1); должно появиться красное окрашивание.

Удельное вращение. От +25,5 до +28,5 в пересчете на сухое вещество (8% раствор субстанции в хлористоводородной кислоте 25%, ОФС "Оптическое вращение").

Прозрачность раствора. Раствор 0,5 г субстанции в 10 мл воды дистиллированной должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен выдерживать сравнение с эталоном BY₆ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

pH раствора. От 10,5 до 12,0 (5% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

1. Аминосоединения. Определение проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Аммиака раствор концентрированный 25% - 2-пропанол 30:70.

Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоте разведенной 7,3% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца аргинина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца аргинина, растворяют в хлористоводородной кислоте растворе 0,1 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл раствора сравнения А и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10 мг стандартного образца аргинина и 10 мг стандартного образца лизина гидрохлорида, растворяют в хлористоводородной кислоте растворе 0,1 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора А (50 мкг), испытуемого раствора Б (1 мкг), раствора стандартного образца аргинина (1 мкг), раствора сравнения А (0,25 мкг), раствора сравнения Б (0,1 мкг), раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (по 2 мкг аргинина и лизина гидрохлорида) и хлористоводородной кислоты разведенной 7,3%. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, в течение 10 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом.

Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей при температуре 100 - 105 °C, опрыскивают нингидрина раствором 0,2%, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 - 105 °C в течение 15 мин и просматривают в видимом свете.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б должна обнаруживаться четкая зона адсорбции.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы должны обнаруживаться 2 разделенные зоны адсорбции.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции любой примеси по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции аргинина на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,5%).

Суммарное содержание примесей, оцененное по совокупности величины и интенсивности окраски их зон адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора в сравнении с зонами адсорбции на хроматограммах растворов сравнения не должно превышать 2,0%.

Зону адсорбции хлористоводородной кислоты разведенной 7,3% не учитывают.

2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Фосфорной кислоты раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1 мл фосфорной кислоты концентрированной и доводят объем раствора водой до метки.

Модифицирующий реактив. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл водорода пероксида и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). Растворяют 2,4 г натрия дигидрофосфата безводного и 1,9 г натрия гексансульфоната в 965 мл воды, доводят значение pH фосфорной кислотой концентрированной до 2,30 +/- 0,05, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора ацетонитрилом до метки.

Испытуемый раствор. Растворяют 20 мг субстанции в смеси 1 мл фосфорной кислоты раствора и 9 мл ПФ, при необходимости обрабатывают ультразвуком до растворения и охлаждают до комнатной температуры.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 20 мг субстанции, прибавляют 10 мл модифицирующего реактива, выдерживают в течение 2 ч при температуре 80 °C, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 6,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора ПФ до метки.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Время удерживания аргинина - около 7,5 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика аргинина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси с относительным временем удерживания 0,85 и аргинина должно быть не менее 3,0.

На хроматограмме раствора сравнения относительное стандартное отклонение площади пика аргинина должно быть не более 2,0% (6 введений).

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика любой примеси не должна превышать площадь пика аргинина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,05%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать трехкратную площадь пика аргинина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика аргинина на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,03%).

Аммоний. Не более 0,02%.

Стандартный раствор аммония. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 74,1 мг (точная навеска) аммония хлорида, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл полученного раствора. Раствор готовится непосредственно перед использованием.

Испытуемый раствор. В коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 25 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в 1 мл воды, прибавляют 0,3 г магния оксида и перемешивают.

Эталонный раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,1 мл стандартного раствора аммония, прибавляют 1 мл воды, 0,3 г магния оксида и перемешивают.

Над реакционными смесями испытуемого и эталонного растворов подвешивают по полоске полиэтилена шириной 1 см с прикрепленными несколькими каплями воды отрезками серебряно-марганцевой бумаги, и закрывают колбы пробками. Содержимое колб перемешивают, не допуская попадания брызг на бумагу, и выдерживают на водяной бане при температуре 40 °C в течение 30 мин. Окраска бумаги, используемой в испытуемом растворе, не должна быть интенсивнее окраски бумаги, используемой в эталонном растворе.

Железо. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Железо" (метод 1), в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции (ОФС "Сульфатная зола"), с использованием стандартного раствора железо(III)-иона 10 мкг/мл.

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфаты. Не более 0,03%. (ОФС "Сульфаты", метод 1). В 10 мл воды растворяют 0,33 г субстанции.

Хлориды. Не более 0,02% (ОФС "Хлориды"). В 10 мл воды растворяют 0,1 г субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) с использованием эталонного раствора 1.

<*> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 11 мг субстанции в 0,5 мл раствора натрия хлорида для инъекций 0,9% на мышь, внутривенно, со скоростью 0,1 мл/с. Срок наблюдения - 48 часов.

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 10,0 ЕЭ на 1 г аргинина (ОФС "Бактериальные эндотоксины"). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с концентрацией аргинина 45 мг/мл в хлористоводородной кислоты растворе 0,25 М, приготовленном на воде для определения бактериальных эндотоксинов. Коррекцию pH исходного раствора субстанции осуществляют с использованием буферных растворов.

--------------------------------

<*> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

Растворяют 0,15 г (точная навеска) субстанции в 50 мл воды и титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты до перехода окраски из зеленой в фиолетово-красную (индикатор - 0,2 мл метилового красного смешанного раствора).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 17,42 мг аргинина C₆H₁₄N₄O₂.

В герметично укупоренной упаковке, защищенном от света месте.