"ФС.2.1.0442. Фармакопейная статья. Левосимендан"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

N-{4-[(4R)-4-Метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}карбоногидразоноилдицианид.

Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% левосимендана C₁₄H₁₂N₆O в пересчете на сухое вещество.

Описание. От желтого или желтого с зеленоватым, или желтого с оранжевым оттенком цвета до темно-желтого с коричневатым оттенком цвета аморфный порошок.

Растворимость. Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в спирте 96%, практически нерастворим в воде.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца левосимендана.

2. Спектрофотометрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 12 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в этаноле и доводят объем раствора до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл и доводят объем раствора этанолом до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 450 нм должен иметь максимумы при 383 нм и 289 нм, и минимум при 318 нм.

Удельное вращение. От -596 до -632 в пересчете на сухое вещество (0,1% раствор субстанции в диметилформамиде, ОФС "Оптическое вращение").

Прозрачность раствора. Раствор 0,05 г субстанции в 20 мл этанола должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Оптическая плотность. Оптическая плотность раствора, полученного в испытании "Прозрачность раствора", измеренная при длине волны 600 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, не должна превышать 0,3 (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,0 г натрия дигидрофосфата дигидрата в 900 мл воды, доводят значение pH раствора фосфорной кислотой концентрированной до 2,10, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель. Метанол - ПФА 200:800.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20,0 мг субстанции, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида, прибавляют 10 мл этанола и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора растворителем до метки.

Примечание

Примесь 1: (2Z)-({4-[(4R)-4-метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}гидразинилиден)-2-цианоацетамид [274263-65-9].

Примесь 2: этил[(2Z)-({4-[(4R)-4-Метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}гидразинилиден)-2-цианоацетат] [58782509].

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Левосимендан - 1 (около 14 мин); примесь 1 - около 0,4; примесь 2 - около 1,1.

<*> Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика левосимендана должно быть не менее 10.

--------------------------------

<*> Перед проведением испытания должна быть проверена разделительная способность хроматографической системы.

На хроматограмме раствора сравнения:

- фактор асимметрии пика (A_S) левосимендана должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика левосимендана должно быть не более 5,0% (6 введений).

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей 1 и 2 не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать пятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).

Энантиомерная чистота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Буферный раствор. Растворяют 2,3 г аммония дигидрофосфата в 900 мл воды, доводят значение pH раствора фосфорной кислотой концентрированной до 3,50, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол - буферный раствор 75:925.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20,0 мг субстанции, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида и доводят объем раствора метанолом до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора метанолом до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг симендана, прибавляют 10 мл диметилсульфоксида и доводят объем раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и 20 мг фармакопейного стандартного образца левосимендана, прибавляют 10 мл диметилсульфоксида и доводят объем раствора метанолом до метки.

Примечание

Декстросимендан: N-{4-[(4S)-4-метил-6-оксо-1,4,5,6-тетрагидропиридазин-3-ил]фенил}карбоногидразоноилдицианид [144238-75-5].

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Левосимендан - 1 (около 10 мин); декстросимендан - около 1,2.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы отношение максимум/минимум (p/v) между пиками левосимендана и декстросимендана должно быть не менее 1,25.

На хроматограмме раствора сравнения:

- отношение сигнал/шум (S/N) для пика левосимендана должно быть не менее 20;

- фактор асимметрии пика (A_S) левосимендана должен быть не более 2,5;

- относительное стандартное отклонение площади пика левосимендана должно быть не более 5,0% (6 введений).

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика декстросимендана не должна превышать площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001% (ОФС "Тяжелые металлы", метод 3Б).

Бактериальные эндотоксины. Не более 16 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС "Бактериальные эндотоксины"). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции концентрацией 1 мг левосимендана в 1 мл этилового спирта 96%, нагревают не выше 70 °C и перемешивают до полного растворения субстанции.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза (ПФ). ПФБ - ПФА 400:600.

Растворитель. Диметилсульфоксид - этанол 10:10.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца левосимендана. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца левосимендана, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца левосимендана и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца левосимендана:

- фактор асимметрии пика (A_S) левосимендана должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика левосимендана должно быть не более 2,0% (6 введений).

Содержание левосимендана C₁₄H₁₂N₆O в субстанции в процентах в пересчете на сухое вещество (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика левосимендана на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика левосимендана на хроматограмме раствора стандартного образца левосимендана;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца левосимендана, мг;

W - потеря в массе при высушивании, %;

P - содержание левосимендана в фармакопейном стандартном образце левосимендана, %.

В плотно укупоренной упаковке.