"ФС.2.4.0019. Фармакопейная статья. Ланатозид Ц"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

,14-Дигидрокси--{[-D-глюкопиранозил-()-3-O-ацетил-2,6-дидезокси--D-рибо-гексопиранозил-()-2,6-дидезокси--D-рибо-гексопиранозил-()-2,6-дидезокси--D-рибо-гексопиранозил]окси}--кард-20(22)-енолид.

Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% ланатозида Ц C₄₉H₇₆O₂₀ в пересчете на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Бесцветные кристаллы или белый кристаллический порошок.

<*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Растворим в метаноле, мало и медленно растворим в спирте 96%, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в вазелиновом масле, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца ланатозида Ц.

2. ТСХ. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и окраске должна соответствовать зоне адсорбции ланатозида Ц на хроматограмме раствора стандартного образца ланатозида Ц (раздел "Родственные примеси").

3. Качественная реакция. Растворяют 1 мг субстанции в 1 мл спирта 96%, прибавляют 1 мл натрия нитропруссида раствора 1% и 0,1 мл натрия гидроксида раствора 10%; должно появиться красное окрашивание, которое постепенно исчезает.

Железа (III) хлорида раствор 0,05% в уксусной кислоте ледяной. Растворяют 5 мг железа (III) хлорида в 10 мл уксусной кислоты ледяной.

Растворяют 2 мг субстанции в 2 мл железа (III) хлорида растворе 0,05% в уксусной кислоте ледяной. Полученный раствор осторожно по стенке вливают в пробирку, содержащую 2 мл серной кислоты концентрированной; на границе двух слоев должно появиться серовато-коричневое или темно-коричневое окрашивание; верхний слой постепенно должен окраситься в сине-зеленый или синий цвет.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +32 до +35 в пересчете на сухое вещество (2% раствор субстанции в метаноле, ОФС "Оптическое вращение").

Прозрачность раствора. Раствор 0,2 г субстанции в 10 мл метанола должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен быть бесцветным (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

Родственные примеси. Определение проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Срок годности растворов, содержащих ланатозид Ц, не более 3 сут при хранении в плотно закрытой емкости в прохладном, защищенном от света месте.

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Раствор трихлоруксусной кислоты. Растворяют 25 г трихлоруксусной кислоты в 100 мл спирта 96%. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

Раствор хлорамина. Растворяют 0,3 г хлорамина в 10 мл воды. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

Подвижная фаза (ПФ). Вода - метанол - хлороформ 1:15:84.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 40 мг субстанции, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца ланатозида Ц (А). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 40 мг фармакопейного стандартного образца ланатозида Ц, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца ланатозида Ц (Б). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,5 мл раствора стандартного образца ланатозида Ц (А) и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Раствор стандартного образца ланатозида Ц (В). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца ланатозида Ц (А) и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Раствор стандартного образца ланатозида Ц (Г). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,5 мл раствора стандартного образца ланатозида Ц (А) и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Реактив для детектирования. Раствор хлорамина - раствор трихлоруксусной кислоты 1:20. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (4 мкг), раствора стандартного образца ланатозида Ц (Б) (0,06 мкг), раствора стандартного образца ланатозида Ц (В) (0,04 мкг) и раствора стандартного образца ланатозида Ц (Г) (0,02 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и дважды хроматографируют восходящим способом. После первого хроматографирования пластинку подсушивают в течение 5 мин на воздухе и вновь хроматографируют в тех же условиях. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 15 мин, опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают при температуре 115 °C в течение 15 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца ланатозида Ц (Г) должна обнаруживаться четкая зона адсорбции ланатозида Ц с R_f не менее 0,3 (R_st = 1).

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора допускается наличие только трех дополнительных зон адсорбции с R_st менее 1, каждая из которых по совокупности величины и интенсивности флуоресценции не должна превышать зону адсорбции ланатозида Ц на хроматограмме раствора стандартного образца ланатозида Ц (Б) (не более 1,5%).

Суммарное содержание примесей, оцененное по совокупности величины и интенсивности флуоресценции их зон адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора в сравнении с зонами адсорбции на хроматограммах раствора стандартного образца ланатозида Ц, содержащих 0,06 мкг, 0,04 мкг и 0,02 мкг ланатозида Ц, должно быть не более 3,5%.

Потеря в массе при высушивании. Не более 7,5% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 2). Высушивают 0,5 г (точная навеска) субстанции в вакууме до постоянной массы при температуре 100 °C и остаточном давлении не более 8 кПа.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Пикриновой кислоты щелочной раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мл пикриновой кислоты раствора 1%, прибавляют 10 мл натрия гидроксида раствора 5% и доводят объем раствора водой до метки. Раствор хранят в защищенном от света месте не более 2 сут.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки. К 10,0 мл полученного раствора прибавляют 15,0 мл пикриновой кислоты щелочного раствора, перемешивают и выдерживают в защищенном от света месте при комнатной температуре в течение 20 мин.

Раствор стандартного образца ланатозида Ц. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца ланатозида Ц, растворяют в спирте 96%, доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки. К 10,0 мл полученного раствора прибавляют 15,0 мл пикриновой кислоты щелочного раствора, перемешивают и выдерживают в защищенном от света месте при комнатной температуре в течение 20 мин.

Раствор сравнения. Спирт 96% - щелочной раствор пикриновой кислоты 10:15.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора стандартного образца ланатозида Ц на спектрофотометре при длине волны 484 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Содержание ланатозида Ц C₄₉H₇₆O₂₀ в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A₁ - оптическая плотность испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора стандартного образца ланатозида Ц;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца ланатозида Ц, мг;

P - содержание основного вещества в фармакопейном стандартном образце ланатозида Ц, %;

W - потеря в массе при высушивании, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищенном от света месте.