"ФС.2.1.0101. Фармакопейная статья. Изониазид"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Пиридин-4-карбогидразид.

Содержит не менее 99,0% и не более 101,0% изониазида C₆H₇N₃O в пересчете на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.

Растворимость. Легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96%, мало растворим в хлороформе.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрофотометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца изониазида.

2. Спектрофотометрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М и доводят объем раствора хлористоводородной кислотой раствором 0,1 М до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мл полученного раствора и доводят объем раствора хлористоводородной кислотой раствором 0,1 М до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 220 нм до 350 нм должен иметь максимум при 266 нм и минимум при 234 нм.

3. Качественная реакция. Растворяют 0,1 г субстанции в 2 мл воды, прибавляют 10 мл теплого ванилина раствора 10 г/л; дают постоять, затем протирают стенку пробирки стеклянной палочкой; должен выпасть осадок желтого цвета, который после перекристаллизации из 5 мл спирта 70%, высушивают при температуре 100 - 105 °C и определяют температуру плавления; температура плавления кристаллов должна быть от 226 до 231 °C.

ИСПЫТАНИЯ

Температура плавления. От 170 до 174 °C (ОФС "Температура плавления", метод 1).

Прозрачность раствора. Раствор 2,5 г субстанции в 50 мл воды должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен выдерживать сравнение с эталоном BY₇ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

pH раствора. От 6,0 до 8,0 (5% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля GF₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Вода - ацетон - метанол - этилацетат 10:20:20:50.

Растворитель. Ацетон - вода 1:1.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 г субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,08 г гидразина сульфата, растворяют в 50 мл воды и доводят объем раствора ацетоном до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мл полученного раствора, прибавляют 0,2 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Реактив для детектирования. Диметиламинобензальдегида раствор 1% в спирте 96%.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (1000 мкг) и раствора сравнения (2 мкг изониазида и эквивалент 0,2 мкг гидразина). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ свете при длине волны 254 нм.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции, находящаяся на уровне зоны адсорбции изониазида, по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции изониазида на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%).

Пластинку опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 - 105 °C в течение 5 мин и просматривают при видимом свете.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции, находящаяся на уровне зоны адсорбции гидразина, по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции гидразина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,02%).

Зона адсорбции на линии старта при оценке не учитывается.

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфаты. Не более 0,05% (ОФС "Сульфаты", метод 1). Для определения используют 10 мл раствора, полученного в испытании "Хлориды".

Хлориды. Не более 0,01% (ОФС "Хлориды"). Растворяют 0,5 г субстанции в 25 мл воды. Для определения используют 10 мл полученного раствора.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 3 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,3 ЕЭ на 1 мг изониазида (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

--------------------------------

<*> Испытания проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 100 мл воды. К 20 мл полученного раствора прибавляют 100 мл воды, 20 мл хлористоводородной кислоты 25%, 0,2 г калия бромида и титруют 0,0167 М раствором калия бромата до исчезновения красного окрашивания (индикатор - 1 капля 0,1% раствора метилового красного спиртового).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,0167 М раствора калия бромата соответствует 3,429 мг изониазида C₆H₇N₃O.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.