"ФС.2.1.0068. Фармакопейная статья. Бетаметазон"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

,21-Тригидрокси--метил--фторпрегна-1,4-диен-3,20-дион.

Содержит не менее 97,0% и не более 103,0% бетаметазона C₂₂H₂₉FO₅ в пересчете на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

<*> Проявляет полиморфизм.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Умеренно растворим в этаноле и метаноле, очень мало растворим в метиленхлориде, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца бетаметазона.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и фармакопейный стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объемах метиленхлорида, выпаривают досуха и записывают спектры сухих остатков.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол-метиленхлорид 10:90.

Испытуемый раствор. Растворяют 10 мг субстанции в 10,0 мл ПФ.

Раствор стандартного образца бетаметазона. Растворяют 10 мг фармакопейного стандартного образца бетаметазона в 10,0 мл ПФ.

Реактив для детектирования. В химическом стакане вместимостью 100 мл растворяют 0,25 г 2,4-дигидроксибензальдегида в уксусной кислоте ледяной, доводят объем раствора тем же растворителем до 50,0 мл и прибавляют смесь 12,5 мл серной кислоты концентрированной и 37,5 мл уксусной кислоты ледяной.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца бетаметазона (по 5 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают реактивом для детектирования и выдерживают при 90 °C в течение 35 мин или до тех пор, пока не проявятся пятна. Охлаждают пластинку до комнатной температуры и просматривают в видимом свете и в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и окраске должна соответствовать зоне адсорбции бетаметазона на хроматограмме раствора стандартного образца бетаметазона.

3. Качественная реакция. К 2 мг субстанции прибавляют 2 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают. В течение 5 мин должно появиться интенсивное красно-коричневое окрашивание. Раствор осторожно выливают при перемешивании в 10 мл воды. Окрашивание должно исчезнуть и должен остаться прозрачный раствор.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +118 до +126 в пересчете на сухое вещество (0,5% раствор субстанции в метаноле, ОФС "Оптическое вращение").

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Подвижная фаза А (ПФА). К 250 мл ацетонитрила прибавляют 700 мл воды, выдерживают до уравновешивания объема, переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель. Ацетонитрил-метанол 1:1.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца бетаметазона и 2 мг фармакопейного стандартного образца метилпреднизолона и доводят объем раствора ПФА до метки.

Уравновешивают колонку ПФБ в течение не менее 30 мин и затем ПФА в течение 5 мин.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Бетаметазон - 1,0 (около 12,5 мин); метилпреднизолон - около 0,92.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R) между пиками метилпреднизолона и бетаметазона должно быть не менее 1,5.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика любой примеси не должна превышать площадь пика бетаметазона на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%), и площадь только одного такого пика может превышать 0,5 площади пика бетаметазона на хроматограмме раствора сравнения (более 0,5%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать двукратную площадь пика бетаметазона на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,05 площади пика бетаметазона на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,2% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции и платиновый тигель.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Испытание проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора спиртом 96% до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 238,5 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения спирт 96%.

Содержание бетаметазона C₂₂H₂₉FO₅ в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A - оптическая плотность испытуемого раствора;

a - навеска субстанции, г;

395 - удельный показатель поглощения бетаметазона ;

W - потеря в массе при высушивании, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.