"ФС.2.1.0641. Фармакопейная статья. Бусерелина ацетат. Бусерелин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

5-Оксо-L-пролил-L-гистидил-L-триптофил-L-серил-L-тирозил-O-трет-бутил-D-серил-L-лейцил-L-аргинил-N-этил-L-пролинамида ацетат.

Содержит не менее 95,0% и не более 102,0% бусерелина C₆₀H₈₆N₁₆O₁₃ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество.

Описание. Белый или слегка желтоватый порошок.

<*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации

Растворимость. Умеренно растворим в воде и хлористоводородной кислоте растворе 0,01 М.

Проводят либо испытания 1 и 2, либо испытания 2 и 3.

1. ¹H-ЯМР-спектроскопия (ОФС "Спектроскопия ядерного магнитного резонанса")

Растворитель. Дейтерия оксид - дейтерированная уксусная кислота 20:80.

Раствор используют свежеприготовленным.

Испытуемый раствор. Раствор субстанции в растворителе с концентрацией 4 мг/мл.

Раствор используют свежеприготовленным.

Раствор стандартного образца бусерелина. Раствор стандартного образца бусерелина для ЯМР идентификации в растворителе с концентрацией бусерелина 4 мг/мл.

Раствор используют свежеприготовленным.

Оборудование. Импульсный ЯМР-спектрометр с рабочей частотой на протонах не менее 300 МГц.

Параметры регистрации ¹H ЯМР спектров

Анализ ¹H ЯМР спектров:

- спектр испытуемого раствора должен качественно соответствовать спектру раствора стандартного образца бусерелина после нормализации обоих спектров с целью уравнивания их по интенсивности.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика бусерелина на хроматограмме раствора стандартного образца бусерелина (раздел "Количественное определение").

3. Аминокислотный состав. Содержание аминокислот должно быть в следующих пределах (моль/моль): глутаминовая кислота от 0,9 до 1,1; пролин от 0,8 до 1,2; лейцин от 0,9 до 1,1; гистидин от 0,9 до 1,1; аргинин от 0,9 до 1,1; серин от 1,4 до 2,0; тирозин от 0,9 до 1,1. Остальные аминокислоты могут присутствовать не более чем в следовых количествах. Определение проводят в соответствии с ОФС "Аминокислотный анализ" (гидролиз по методу 1 в жидкой фазе, анализ по методу 1 или 7).

Прозрачность раствора. Раствор 0,1 г субстанции в 10 мл воды должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора" должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном Y₇ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

Удельное вращение. От -49 до -58 в пересчете на безводное, свободное от уксусной кислоты и остаточных органических растворителей вещество (1,0% раствор субстанции в воде, ОФС "Оптическое вращение").

pH. От 3,5 до 6,2 (0,2% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Буферный раствор. В химический стакан помещают 11,2 г фосфорной кислоты концентрированной растворяют в 800 мл воды, доводят значение pH триэтиламином до 2,5, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ): Ацетонитрил - буферный раствор 200:700.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца примеси A растворяют в соответствующем объеме ПФ до получения концентрации 1 мг/мл. К 1,0 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл испытуемого раствора.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора ПФ до метки (концентрация бусерелина 0,001 мг/мл).

Раствор для идентификации примесей. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца бусерелина для идентификации примесей (содержит примеси F и G), растворяют в соответствующем объеме ПФ до получения концентрации 1 мг/мл.

Примечание

Примесь A: [2-D-гистидин]бусерелин [1872434-99-5].

Примесь F: эндо-3a-серин-бусерелин.

Примесь G: эндо-8a-пролин-бусерелин.

Хроматографируют раствор для идентификации примесей, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Бусерелин - 1,0 (около 23 мин); примесь F - около 0,83; примесь A - около 0,91; примесь G - около 1,26.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси A используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы, для идентификации пиков примесей F и G используют хроматограмму раствора для идентификации примесей.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками бусерелина и примеси A должно быть не менее 1,5.

Содержание любой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S_i - площадь пика любой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика бусерелина на хроматограмме раствора сравнения.

- примесь A - не более 2,5%;

- примеси F и G - не более 1% каждая;

- любая другая примесь - не более 0,5%;

- сумма примесей - не более 4,0%.

Не учитывают примеси, содержание каждой из которых менее 0,1%.

Вода. Не более 4% (ОФС "Определение воды", метод 2). Для определения используют 20 мг (точная навеска) субстанции и в качестве растворителя 3 мл метанола.

Уксусная кислота. От 3 до 7% (ОФС "Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в растворителе состава ПФБ - ПФА 5:95 и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 55,5 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС "Бактериальные эндотоксины"). Для испытаний готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 1 мг субстанции в 1 мл воды для БЭТ.

--------------------------------

<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца бусерелина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца бусерелина, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца бусерелина и испытуемый раствор.

Содержание бусерелина C₆₀H₈₆N₁₆O₁₃ в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика бусерелина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика бусерелина на хроматограмме раствора стандартного образца бусерелина;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца бусерелина, мг;

W - содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

A - содержание уксусной кислоты в субстанции, %;

P - содержание бусерелина в фармакопейном стандартном образце бусерелина, %.

В герметично укупоренной упаковке, защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C.