"ФС.2.1.0058. Фармакопейная статья. Аскорбиновая кислота"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

(5R)-5-[(1S)-1,2-Дигидроксиэтил]-3,4-дигидроксифуран-2(5H)-он.

Содержит не менее 99,0% и не более 100,5% аскорбиновой кислоты C₆H₈O₆ в пересчете на свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы, обесцвечивающиеся при воздействии воздуха и влаги.

Растворимость. Легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.

1. ИК-спектрометрия. (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос по поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца аскорбиновой кислоты.

2. Спектрофотометрия. (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 мг субстанции и растворяют в хлористоводородной кислоте растворе 0,1 М и доводят объем раствора до метки.

Ультрафиолетовый спектр испытуемого раствора в области длин волн от 230 до 300 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 243 нм с удельным показателем поглощения от 545 до 585.

3. Качественная реакция. Растворяют 50 мг субстанции в 2 мл воды и прибавляют 0,2 мл азотной кислоты разведенной 12,5% и 0,5 мл серебра нитрата раствора 1,7%; должен появиться темный осадок.

Прозрачность раствора. Раствор 1 г субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Окраска раствора, полученного в испытании "Прозрачность раствора", должна выдерживать сравнение с эталоном BY₇ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

Удельное вращение. От +20,5 до +21,5 (1 г субстанции в 10 мл воды; определение проводят сразу после приготовления испытуемого раствора, ОФС "Оптическое вращение).

pH. От 2,1 до 2,6 (Испытание проводят в растворе, полученном в испытании "Прозрачность раствора", ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Буферный раствор. В химический стакан помещают 6,8 г калия дигидрофосфата, растворяют в 175 мл воды, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора до метки.

Подвижная фаза. Буферный раствор - ацетонитрил 25:75.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,50 г (точная навеска) субстанции, растворяют в подвижной фазе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси C. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца аскорбиновой кислоты примеси C, растворяют в подвижной фазе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца аскорбиновой кислоты примеси D, 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца аскорбиновой кислоты, растворяют в подвижной фазе, прибавляют 2,5 мл раствора стандартного образца примеси C и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 1 мл испытуемого раствора, доводят объем раствора подвижной фазой до метки и перемешивают. К 1 мл полученного раствора прибавляют 1 мл раствора стандартного образца примеси C и перемешивают.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Аскорбиновая кислота - 1 (около 11 мин); примесь D - около 0,4; примесь C - около 1,7.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси C и пика примеси D используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму стандартного раствора.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (Rs) между пиками аскорбиновой кислоты и примеси C должно быть не менее 3.

На хроматограмме стандартного раствора отношение сигнал/шум (S/N) для пика аскорбиновой кислоты должно быть не менее 20 (6 введений).

На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей C и D не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь пика соответствующей примеси на хроматограмме стандартного раствора (не более 0,15% каждая);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площади пика аскорбиновой кислоты на хроматограмме стандартного раствора (не более 0,10%);

- сумма площадей пиков всех примесей (кроме C и D) не должна превышать двукратную площадь пика аскорбиновой кислоты на хроматограмме стандартного раствора (не более 0,2%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади пика аскорбиновой кислоты на хроматограмме стандартного раствора (менее 0,05%).

Щавелевая кислота. Не более 0,2%.

Испытуемый раствор. Растворяют 0,25 г субстанции в 5 мл воды, нейтрализуют натрия гидроксида раствором 10%, прибавляют 1 мл уксусной кислоты раствора 12%, 0,5 мл кальция хлорида раствора 7,35% и перемешивают.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 500 мл помещают 70 мг щавелевой кислоты, растворяют в воде, доводят объем раствора тем же растворителем до метки. К 5 мл полученного раствора прибавляют 1 мл раствора уксусной кислоты разведенной 12%, 0,5 мл кальция хлорида раствора 7,35% и перемешивают. Раствор готовят одновременно с испытуемым раствором.

Испытуемый раствор и раствор сравнения выдерживают в течение 1 ч.

Опалесценция испытуемого раствора не должна превышать опалесценцию раствора сравнения.

Медь. Не более 0,0005%. Определение проводят методом ААС (ОФС "Атомно-абсорбционная спектрометрия").

Используют свежеприготовленные растворы.

Растворитель. Азотной кислоты раствор 0,1 М с минимальным содержанием элементных примесей.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2,0 г (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе, доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор меди. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,393 г меди сульфат пентагидрат, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Калибровочные растворы. В три мерные колбы вместимостью 100 мл помещают стандартный раствор меди в количестве: 2,0; 4,0; 6,0 мл, доводят объем каждого раствора растворителем до метки и перемешивают (содержание меди соответственно: 0,2; 0,4; 0,6 мкг/мл).

Устанавливают нулевую точку на приборе, используя азотной кислоты раствор 0,1 М. Измеряют поглощение калибровочных растворов меди и испытуемого раствора. Для каждого раствора проводят не менее 3 измерений. Строят калибровочный график зависимости средних результатов величины поглощения от концентрации меди (мкг/мл). Определяют параметры линейной регрессии.

С помощью уравнения линейной регрессии находят концентрацию меди в испытуемом растворе.

Содержание меди в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где C - концентрация меди в испытуемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

a - навеска субстанции, г.

Железо. Не более 0,0002%. Определение проводят методом ААС (ОФС "Атомно-абсорбционная спектрометрия").

Используют свежеприготовленные растворы.

Растворитель. Азотной кислоты раствор 0,1 М с минимальным содержанием элементных примесей.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 г (точная навеска) субстанции, растворяют в азотной кислоты растворе 0,1 М, доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор железа. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,863 г квасцов железоаммониевых, растворяют в 25 мл серной кислоты разведенной 9,8% и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Калибровочные растворы. В три мерные колбы вместимостью 100 мл помещают стандартный раствор железа в количестве: 1,0; 2,0; 3,0 мл, доводят объем каждого раствора растворителем до метки и перемешивают (содержание железа соответственно 0,2; 0,4; 0,6 мкг/мл).

Устанавливают нулевую точку на приборе, используя азотной кислоты раствор 0,1 М. Измеряют поглощение калибровочных растворов железа и испытуемого раствора при длине волны 248,3 нм. Для каждого раствора проводят не менее 3 измерений. Строят калибровочный график зависимости средних результатов величины поглощения от концентрации железа (мкг/мл). Определяют параметры линейной регрессии.

С помощью уравнения линейной регрессии находят концентрацию железа в испытуемом растворе.

Содержание железа в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где C - концентрация железа в испытуемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

a - навеска субстанции, г.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 1,2 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС "Бактериальные эндотоксины"). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 50 мг/мл, а затем разводят его не менее чем в 100 раз.

--------------------------------

<*> Испытания проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

Растворяют 0,15 г (точная навеска) субстанции в смеси 10 мл серной кислоты раствора 1 М и 80 мл воды и титруют 0,05 М раствором йода до появления устойчивого фиолетово-синего окрашивания (индикатор - 1 мл крахмала раствора 1%, содержащего 0,01% ртути(II) йодида).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,05 М раствора йода соответствует 8,806 мг аскорбиновой кислоты C₆H₈O₆.

В герметично укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.