"МУК 4.1.3989-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств индоксакарба в ботве и клубнях картофеля методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)

1. Разработаны ФБУН "ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Т.А. Синицкая, Н.Е. Федорова, О.Е. Егорченкова, А.В. Гордиюк).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 19 февраля 2024 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) описывают порядок применения метода газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее - ГХ-МС) для определения в ботве и клубнях картофеля массовых концентраций индоксакарба в диапазоне: 0,01 - 0,10 мг/кг - без учета разбавления и 0,01 - 5,00 мг/кг - с учетом разбавления.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Индоксакарб - метил(R,S)-7-хлор-2,3,4a,5-тетрагидро-2-[метоксикарбонил(4-трифторметоксифенил)карбамоил]индено[1,2e][1,3,4]оксадиазин-4a(3H)-карбоксилат <1>. Класс - оксадиазины. Брутто-формула C₂₂H₁₇ClF₃N₃O₇. Молекулярная масса 527,8.

--------------------------------

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства.

Порошок белого цвета. Смесь (активного)S:(неактивного)R-изомеров в соотношении 1:1. Температура плавления: плюс 88,1 °C. Давление паров при плюс 25 °C: 2,5 x 10^-5 МПа. Плотность при плюс 20 °C: 1,44 г/см³. Растворимость в органических растворителях при плюс 25 °C: ацетон - 250 кг/дм³; этилацетат - 160 кг/дм³; ксилол - 11,7 кг/дм³; гептан - 1,72 кг/дм³. Растворимость в воде при плюс 25 °C: 0,2 мг/дм³. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow logP = 4,65 (pH 7, температура плюс 20 °C).

2.3. Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - 268 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс > 5,5 мг/дм³.

2.4. Область применения препарата. Индоксакарб - инсектицид контактного и кишечного действия, применяется для борьбы с широким спектром чешуекрылых на хлопчатнике, овощных культурах и во фруктовых садах.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа <2> и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

4.1. Методика основана на определении индоксакарба с использованием ГХ-МС.

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых образцов выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, буферных солей лимонной кислоты), очистку экстракта проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,02 нг. Средняя полнота извлечения - 90% (ботва картофеля), 99% (клубни картофеля).

4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на ГХ-МС, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов для градуировки и внесения, смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, установление градуировочной характеристики.

8.2. Очистка органических растворителей.

8.2.1. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ растворителя около 10 г перманганата калия и 30 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

8.2.2. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют; непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.3.1. Исходный раствор индоксакарба для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г индоксакарба растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 6 месяцев.

8.3.2. Раствор N 1 индоксакарба для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного раствора с концентрацией индоксакарба 100 мкг/см³ (п. 8.3.1), разбавляют ацетоном до метки.

Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при подготовке градуировочных растворов, согласованных с матрицей, оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.3.3. Приготовление рабочих градуировочных растворов, согласованных с матрицей (матричная калибровка). Матричная калибровка рекомендуется при выявлении существенного усиления хроматографического сигнала индоксакарба в экстракте образцов (более 20% от величины сигнала индоксакарба в растворителе).

8.3.3.1. Рабочий раствор N 2 индоксакарба для градуировки (концентрация 0,1 мкг/см³). В центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³ помещают (10 +/- 0,01) г картофеля, вносят 0,1 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией индоксакарба 10 мкг/см³ (п. 8.3.2), оставляют на 30 - 60 минут, не закрывая крышкой. Проводят полную процедуру пробоподготовки (п. 10.1, п. 10.2). Получают рабочий градуировочный раствор на матрице N 2 с концентрацией индоксакарба 0,1 мкг/см³ объемом около 5 см³.

Рабочий раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 14 дней.

8.3.3.2. Рабочие растворы N 3 - 6 индоксакарба для градуировки (концентрации 0,01; 0,02; 0,05 и 0,08 мкг/см³). В 5 виал вместимостью 2,0 см³ помещают 0,1; 0,2; 0,5; 0,8 см³ градуировочного рабочего раствора N 2 с концентрацией 0,1 мкг/см³ (п. 8.3.3.1) и 0,9; 0,8; 0,5; 0,2 см³ экстракта контрольного образца картофеля соответственно, тщательно перемешивают на вихревом шейкере. Получают рабочие градуировочные растворы на матрице N 3 - 6 с концентрациями индоксакарба 0,01; 0,02; 0,05 и 0,08 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 14 дней.

8.4. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации индоксакарба в растворе (мкг/см³), устанавливают методом матричной калибровки по 5 растворам для градуировки (п. 8.3.3.1, п. 8.3.3.2).

В испаритель хроматографа вводят по 2 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков индоксакарба, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание индоксакарба в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,01 до 0,1 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение (1), (2):

где: A - величина расхождения, %;

X - концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.6. Приготовление смеси солей для экстракции <4>.

--------------------------------

<4> Примечание: возможно использование коммерческих наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г, содержащих 4 г MgSO₄, 1 г NaCl, 1 г цитрата натрия, 0,5 г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного.

Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

8.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов <5>.

--------------------------------

<5> Примечание: возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для фруктов и овощей (содержащих и не содержащих пигмент), помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см³.

8.7.1. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов ботвы картофеля. Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ помещают (400 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (1200 +/- 4) мг магния сернокислого, (45 +/- 4) мг графитовой сажи и (400 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

8.7.2. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов клубней картофеля. Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ помещают (150 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (900 +/- 4) мг магния сернокислого и (150 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <6>.

--------------------------------

<6> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79; ГОСТ 7176 "Картофель продовольственный. Технические условия", введенный приказом Госстандарта от 28.11.2017 N 1843.

9.2. Отобранные образцы клубней ботвы и клубней картофеля хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 5 дней, для длительного хранения образцы замораживают и помещают в морозильную камеру (температура не выше минус 18 °C). Перед анализом образцы измельчают.

10.1. Экстракция. Гомогенизированный образец ботвы, клубней картофеля, массой (10 +/- 0,1) г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³, вносят 10 см³ ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 сек. Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин.

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 5000 об/мин и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта.

10.2.1. Ботва картофеля. Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 см³ с помощью механического дозатора переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.7.2. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 5000 об/мин. Отбирают с помощью медицинского шприца раствор, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,45 мм) в виалу вместимостью 2 см³ с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой. Помещают в автосамплер хроматографа и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

10.2.2. Клубни картофеля. Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 см³ с помощью механического дозатора переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.7.1. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 5000 об/мин. Отбирают с помощью медицинского шприца раствор, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,45 мм) в виалу вместимостью 2 см³ с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой. Помещают в автосамплер хроматографа и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика индоксакарба, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

10.3. Условия хроматографирования.

Измерения выполняют на ГХ-МС, предназначенном для работы с капиллярной колонкой.

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: источник - плюс 200 °C, переходной камеры - плюс 250 °C.

Температура испарителя: плюс 250 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - плюс 200 °C, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 20 °C в минуту до температуры плюс 280 °C, выдержка 10 мин.

Газ-носитель (гелий):

- поток в колонке 1,0 см³/мин;

- давление 114,233 кПа;

- средняя линейная скорость 38,341 см/сек;

- деление потока - без деления.

Хроматографируемый объем: 2 мм³.

Режим сканирования - мониторинг выбранных ионов (SIM).

Характеристические ионы с m/z (отношение: масса/заряд): 527 (количественный), 150, 218.

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,2 нг.

Время удерживания индоксакарба: 10,992 мин.

11.1. Содержание индоксакарба в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с усредненной величиной площади хроматографического пика индоксакарба, мкг/см³;

V - объем растворителя, вносимый в пробу для экстракции, (10 см³);

K_р - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

m - масса анализируемого образца, г.

Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11.2. Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (4):

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом .

При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат анализа представляют в виде формулы (5):

где: X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание индоксакарба в пробе картофеля (ботва, клубни) - менее 0,01 мг/кг <7>".

--------------------------------

<7> Примечание: 0,01 мг/кг - пределы обнаружения индоксакарба в ботве, клубнях картофеля.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <8>. Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

--------------------------------

<8> ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

3. ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

4. ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

8. ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

9. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

10. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

11. ГОСТ OIML R 111-1 "Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

12. ГОСТ 2603 "Ацетон. Технические условия".

13. ГОСТ 20490 "Калий марганцовокислый. Технические условия".

14. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия".

15. ГОСТ 4233 "Натрий хлористый. Технические условия".

16. ГОСТ 22280 "Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия".

17. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

18. ГОСТ 26678 "Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия".

19. ГОСТ ISO 7886-1 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

20. ГОСТ 12.1.007 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

21. ГОСТ 12.1.019 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

22. ГОСТ 12.1.004 "Пожарная безопасность. Общие требования".

23. ГОСТ 12.4.009 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

24. ГОСТ 7176 "Картофель продовольственный. Технические условия".

25. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.