"МУК 4.1.3986-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флудиоксонила в перце и тыквенных культурах методом капиллярной газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)

1. Разработаны "ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Т.А. Синицкая, Н.Е. Федорова, О.Е. Егорченкова, Л.А. Ремез).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 19 февраля 2024 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) описывают порядок применения метода капиллярной газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее - ГХ-МС) для определения в перце и тыквенных культурах массовой концентрации флудиоксонила в диапазоне: 0,01 - 0,10 мг/кг - без учета разбавления и 0,01 - 5,00 мг/кг - с учетом разбавления в 50 раз.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Флудиоксонил - 4-(2,2-дифтор-1,3-бензодиоксол-4-ил) пиррол-3-карбонитрил <1>. Класс фенилпирролы. Брутто-формула C₁₂H₆F₂N₂O₂. Молекулярная масса 248,2.

--------------------------------

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства.

Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления: плюс 199,8 °C. Давление паров при плюс 25 °C: 3,9·10^-4 мПа. Растворимость в органических растворителях (в г/дм³ при плюс 25 °C): ацетон - 190; этанол - 44; толуол - 2,7; н-октанол - 20; гексан - 0,0078. Растворимость в воде при температуре плюс 25 °C: 1,8 мг/дм³. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow logP = 4,12 (плюс 25 °C). Гидролитически стабилен до температуры плюс 70 °C в диапазоне pH 5 - 9.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс > 2600 мг/м³ воздуха.

2.4. Область применения препарата. Флудиоксонил - фунгицид широкого спектра действия, используется для обработки сельскохозяйственных культур (зерновых, фруктов и овощей, и декоративных растений), часто в сочетании с другими фунгицидами.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа <2> и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст, ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст, ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст, ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст, ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст, ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)).

4.1. Методика основана на определении флудиоксонила с использованием ГХ-МС.

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых образцов выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, цитрата натрия и натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного), вымораживают экстракт и проводят очистку методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе аминов, октадецилсилана, графитизированной сажи.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,07 нг. Средняя полнота извлечения - 97% (перец), 93% (тыквенные культуры).

4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы но экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов для градуировки и внесения, смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, установление градуировочной характеристики.

8.2. Очистка органических растворителей.

8.2.1. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ растворителя около 10 г перманганата калия и 30 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

8.2.2. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.3.1. Исходный раствор флудиоксонила для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г флудиоксонила, растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 6 месяцев.

8.3.2. Раствор N 1 флудиоксонила для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,0 см³ исходного раствора с концентрацией флудиоксонила 100 мкг/см³ (п. 8.3.1), разбавляют ацетоном до метки.

Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

Растворы N 2 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.3.3. Рабочие растворы N 2 - 6 флудиоксонила для градуировки (концентрации 0,007 - 0,125 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0,7; 2,0; 5,0; 10,0 и 12,5 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.3.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией флудиоксонила 0,007; 0,02; 0,05; 0,1 и 0,125 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 14 дней.

8.4. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную зависимость площади пика от концентрации флудиоксонила в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пика флудиоксонила, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов градуировочных растворов, содержание флудиоксонила в которых входит в диапазон линейности градуировочной характеристики (от 0,007 до 0,125 мкг/см³).

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):

где: A - величина расхождения, %;

X - концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.6. Приготовление смеси солей для экстракции <4>. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

--------------------------------

<4> Примечание: возможно использование коммерческих наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г, содержащих 4 г MgSO₄, 1 г NaCl, 1 г нитрата натрия, 0,5 г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного.

8.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов <5>.

--------------------------------

<5> Примечание: возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для фруктов и овощей (содержащих и не содержащих пигмент), помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см³.

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ помещают (400 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (1200 +/- 4) мг магния сернокислого, (45 +/- 4) мг графитизированной сажи и (400 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <6>.

--------------------------------

<6> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79, ГОСТ 34325 "Перец сладкий свежий. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 14.12.2017 N 1978-ст, ГОСТ 34269 "Перец стручковый острый свежий. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 23.11.2017 N 1817-ст, ГОСТ 7177 "Арбузы продовольственные свежие. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 30.05.2022 N 425-ст, ГОСТ 31822 "Кабачки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1845-ст, ГОСТ 33932 "Огурцы свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 29.11.2016 N 1849-ст.

9.2. Отобранные образцы перца, тыквенных культур (арбуз, кабачки, огурцы) хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 5 дней, для длительного хранения образцы замораживают и помещают в морозильную камеру (температура не выше минус 18 °C). Перед анализом образцы измельчают.

10.1. Экстракция. Гомогенизированный образец перца, тыквенных культур (арбуз, кабачки, огурцы) массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³, вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C, вносят 10 см³ ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 сек. Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин.

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин, вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта. Аликвоту охлажденного экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 - 8 см³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.7. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин. Полученный после очистки экстракт вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C. Аликвоту охлажденного экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 3 см³ с помощью пипетки переносят в колбу для упаривания на 50 см³ и концентрируют методом отдувания в токе чистого газа при температуре не выше плюс 35 °C, сухой остаток растворяют в 3,0 см³ ацетона и анализируют на содержание флудиоксонила по п. 10.3.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика флудиоксонила, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

10.3. Условия хроматографирования.

Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором, автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой.

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: квадруполя - плюс 150 °C, источника - плюс 230 °C, переходной камеры - плюс 280 °C.

Температура испарителя: плюс 270 °C.

Температура термостата колонки в режиме программирования. Начальная температура - плюс 130 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 °C в минуту до температуры плюс 240 °C, выдержка 3 мин, нагрев колонки со скоростью 20 °C в минуту до температуры плюс 260 °C, выдержка 8 мин.

Газ 1 (гелий):

- поток в колонке: 1,1 см³/мин;

- давление - 93,3 кПа;

- средняя линейная скорость - 39,529 см/сек.

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Режим сканирования - мониторинг выбранных ионов (SIM).

Характеристические ионы с m/z (отношение: масса/заряд): 248 (количественный), 127, 154, 182.

Линейный диапазон детектирования: 0,007 - 0,125 нг.

11.1. Содержание флудиоксонила в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):

где: C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с усредненной величиной площади хроматографического пика флудиоксонила, мкг/см³;

V - объем растворителя, вносимый в пробу для экстракции (10 см³);

K_р - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

m - масса анализируемого образца, г.

Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11.2. Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (4):

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом .

При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде формулы (5):

где: X - результат определения, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание флудиоксонила в пробе перца, тыквенных культур - менее 0,01 мг/кг <7>".

--------------------------------

<7> Примечание: 0,01 мг/кг - предел обнаружения флудиоксонила в пробе перца, тыквенных культур (арбуз, кабачки, огурцы).

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <8>. Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.

--------------------------------

<8> ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

3. ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

4. ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

8. ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

9. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

10. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

11. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

12. ГОСТ OIML R 111-1 "Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

13. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

14. ГОСТ 2603 "Ацетон. Технические условия".

15. ГОСТ 20490 "Калий марганцовокислый. Технические условия".

16. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия".

17. ГОСТ 4166 "Натрий сернокислый. Технические условия".

18. ГОСТ 4233 "Натрий хлористый. Технические условия".

19. ГОСТ 22280 "Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия".

20. ГОСТ Р 56357 "Уголь активированный АГ-3. Технические условия".

21. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

22. ГОСТ 26678 "Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия".

23. ГОСТ ISO 7886-1 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

24. ГОСТ 12.1.007 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

25. ГОСТ 12.1.019 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

26. ГОСТ 12.1.004 "Пожарная безопасность. Общие требования".

27. ГОСТ 12.4.009 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

28. ГОСТ 34325 "Перец сладкий свежий. Технические условия".

29. ГОСТ 34269 "Перец стручковый острый свежий. Технические условия".

30. ГОСТ 7177 "Арбузы продовольственные свежие. Технические условия".

31. ГОСТ 31822 "Кабачки свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия".

32. ГОСТ 33932 "Огурцы свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия".

33. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.