"МУК 4.1.3929-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств зоксамида в бананах методом капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 03.07.2023)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Ракитский В.Н., Федорова Н.Е., Егорченкова О.Е.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "03" июля 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для определения в бананах массовой концентрации зоксамида в диапазоне: (0,01 - 0,10) мг/кг - без учета разбавления и (0,01 - 5,00) мг/кг - при разбавлении в 50 раз.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Зоксамид-[(RS)-3,5-дихлоро-N-(3-хлоро-1-этил-1-метил-2-оксопропил)-p-толуамид] <1>. Класс - бензамиды. Брутто-формула C₁₄H₁₆Cl₃NO₂. Молекулярная масса 336,6.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства:

Порошок белого цвета без запаха. Плотность 1,38 г/см³ при плюс 20 °C. Температура плавления: плюс 159,5 - 160,5 °C. Температура кипения: термическое разложение начинается при температуре более плюс 160 °C. Давление паров при плюс 25 °C - 0,013 мПа. Растворимость в органических растворителях (в г/дм³): ацетон - 55,7; ксилол - 1,56; гептан - 0,038. Растворимость в воде (в мг/дм³ при плюс 25 °C): 0,981. Гидролитически стабилен при температуре плюс 20 °C и pH 3, 5, 7 и 10 (менее 1 мг/дм³).

2.3. Краткая токсикологическая характеристика.

Острая оральная токсичность (LD₅₀) для крыс > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LK₅₀) для крыс > 5,3 мг/м³.

2.4. Область применения препарата. Зоксамид - защитный фунгицид, оказывает специфическое действие на фитопатогенные грибы, вызывая нарушение в структуре микротрубочек, предотвращая тем самым нормальное деление клеток. Предназначен для защиты винограда от мучнистой росы (оидиум) и черной гнили.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. Методика основана на определении зоксамида с использованием капиллярной ГЖХ с масс-селективным детектором (далее - МСД).

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых образцов выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, цитрата натрия и натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного), вымораживают экстракт и проводят очистку методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе аминов и октадецилсилана.

4.3. Нижний предел измерения зоксамида в анализируемом объеме пробы 0,01 нг. Средняя полнота извлечения 92%.

4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать правила <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<2> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Очистка органических растворителей.

8.2.1. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ растворителя около 10 г перманганата калия и 30 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

8.2.2. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед использованием ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.3.1. Исходный раствор зоксамида для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г зоксамида растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 6-ти месяцев.

8.3.2. Раствор N 1 зоксамида для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,0 см³ исходного раствора с концентрацией зоксамида 100 мкг/см³ (п. 8.3.1), разбавляют ацетоном до метки.

Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

Растворы NN 2 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.3.3. Рабочие растворы NN 2 - 6 зоксамида для градуировки (концентрации 0,007 - 0,125 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0,7; 2,0; 5,0; 10,0 и 12,5 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.3.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2 - 6 с концентрацией зоксамида 0,007; 0,02; 0,05; 0,1 и 0,125 мкг/см³, соответственно.

Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 14 дней.

8.4. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную зависимость площади пика от концентрации зоксамида в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пика зоксамида, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов градуировочных растворов, содержание зоксамида в которых входит в диапазон линейности градуировочной характеристики (от 0,007 до 0,125 мкг/см³).

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где A - величина расхождения, %;

X - концентрация зоксамида в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора зоксамида, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 15% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 15%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.6. Приготовление смеси солей для экстракции. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6-ти месяцев).

8.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов.

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ помещают (150 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (900 +/- 4) мг магния сернокислого и (150 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6-ти месяцев.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами. <3>

--------------------------------

<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79, ГОСТ 51603 "Государственный стандарт Российской Федерации. Бананы свежие. Технические условия".

9.2. Отобранные образцы бананов хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6 °C) не более 5-ти дней, для длительного хранения образцы замораживают и помещают в морозильную камеру (температура не выше минус 18 °C). Перед анализом образцы измельчают.

10.1. Экстракция. Очищенный от кожуры гомогенизированный образец бананов массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³, вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C, вносят 10 см³ ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 сек. Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.6.), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин.

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин, вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта. Аликвоту охлажденного экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 - 8 см³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.7. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 об/мин. Полученный после очистки экстракт вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C. Аликвоту охлажденного экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 3 см³ с помощью пипетки переносят в колбу для упаривания на 50 см³ и концентрируют методом отдувания в токе чистого газа при температуре не выше 35 °C, сухой остаток растворяют в 3,0 см³ ацетона и анализируют на содержание зоксамида по п 10.3.

Устанавливают площадь пика зоксамида, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

10.3. Условия хроматографирования.

Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором, автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой.

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил - и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: квадруполя - плюс 150 °C, источника - плюс 230 °C, переходной камеры - плюс 280 °C.

Температура испарителя: плюс 275 °C.

Температура термостата колонки в режиме программирования. Начальная температура - плюс 170 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры плюс 260 °C, выдержка 12 мин.

Газ 1 (гелий):

- поток в колонке: 1,1 см³/мин;

- давление: 109,37 кПа;

- средняя линейная скорость: 40,204 см/сек;

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Режим сканирования: мониторинг выбранных ионов (SIM).

отношение масса-заряд: 187 (количественный), 159, 258;

- линейный диапазон детектирования: 0,007 - 0,125 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор зоксамида с концентрацией 0,125 мкг/см³, разбавляют ацетоном, не более чем в 50 раз.

11.1. Содержание зоксамида в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика зоксамида, мкг/см³;

V - объем растворителя, вносимый в пробу для экстракции, (10 см³);

К_р - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

m - масса анализируемого образца, г;

11.2. Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом .

При невыполнении условия (3) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

--------------------------------

<4> 0,01 мг/кг - предел обнаружения зоксамида в пробе бананов.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6). Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.

1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Государственный стандарт Российской Федерации. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

4. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

5. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

6. ГОСТ 28498 "Межгосударственный стандарт. Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний".

7. ГОСТ 1770 "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

8. ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

9. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

10. ГОСТ 2603 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Ацетон. Технические условия".

11. ГОСТ 20490 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

12. ГОСТ 4221 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

13. ГОСТ 4166 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

14. ГОСТ 4233 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

15. ГОСТ 22280 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий лимоннокислый 1,5-водный. Технические условия".

16. ГОСТ 25336 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

17. ГОСТ 26678 "Государственный стандарт союза ССР. Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия".

18. ГОСТ ISO 7886-1 "Межгосударственный стандарт. Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

19. ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

20. ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

21. ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

22. ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

23. ГОСТ 12.0.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

24 Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

25. ГОСТ 51603 "Государственный стандарт Российской Федерации. Бананы свежие. Технические условия".