"МУК 4.1.3796-22. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций иплуфенноквина в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе городских и сельских поселений и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором РФ 02.11.2022)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, Н.А. Степанова).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 2 ноября 2022 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе городских и сельских поселений и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации иплуфенноквина в диапазонах (0,05 - 1,0) мг/м³ в воздухе рабочей зоны, (0,01 - 0,1) мг/м³ в атмосферном воздухе и (0,1 - 2,0) мкг/смыв в смывах с кожных покровов.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области качества и безопасности атмосферного воздуха городских и сельских поселений и воздуха рабочей зоны.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Иплуфенноквин - 2-[2(7,8-дифтор-2-метилхинолин-3-илокси)-6-фторфенил]пропан-2-ол <1>. Брутто-формула C₁₉H₁₆F₃NO₂. Молекулярная масса 347,3 г/моль.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства. Порошок светло-желтого цвета без выраженного запаха. Давление паров 1,33·10^-3 Па при плюс 20 °C. Растворимость в воде 10,8 мг/дм³ при плюс 20 °C, при pH = 4,0 мг/дм³, при pH = 7,0 - 10,6 мг/дм³, при pH = 9,2 - 9,55 мг/дм³. Растворимость в органических растворителях (в г/дм³ при плюс 25 °C): толуол 182, дихлорметан > 250, этилацетат > 250, метанол > 250, ацетон > 250, гексан > 2,83, октанол > 65,5. Коэффициент распределения н-октанол/вода при плюс 25 °C - 3,89. Температура плавления плюс 114,4 - 115,5 °C. Плотность 1,3904 г/см³.

2.3. Острая пероральная токсичность для крыс (ЛД₅₀) > 2000 мг/кг, острая дермальная токсичность (ЛД₅₀) > 2000 мг/кг. Острая ингаляционная токсичность (ЛК₅₀) для крыс более 5060 мг/м³.

2.4. Системный фунгицид, обеспечивающий защиту плодовых культур и винограда от широкого спектра болезней.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Примечание. Диапазон определяемых концентраций, указанный в табл. 3.1, приведен с учетом разбавления образца в 50 раз.

4.1. Измерения концентраций иплуфенноквина выполняют методом ВЭЖХ на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

4.2. Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на сорбционные трубки, экстракцию проводят ацетоном.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1,0 нг.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать технику безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на прибор.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на приборы.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетона и ацетонитрила (при необходимости), подготовка подвижной фазы, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют; непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Очистка ацетона. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ растворителя около 10 г перманганата калия и 30 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят при комнатной температуре в таре из темного стекла в темноте не более 1 месяца.

8.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 450 см³ воды, добавляют 550 см³ ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.5. Кондиционирование хроматографической колонки. Промывают колонку подвижной фазой (п. 8.4) при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.7. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.7.1. Исходный раствор иплуфенноквина для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г иплуфенноквина, растворяют в 50 - 60 см³ ацетонитрила, при необходимости выдерживают в ультразвуковой бане до полного растворения вещества, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более месяца.

Растворы N 1 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.7.2. Раствор N 1 иплуфенноквина для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора иплуфенноквина с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.7.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более месяца.

8.7.3. Рабочие растворы N 2 - 6 иплуфенноквина для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см³ раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.7.2), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п. 8.4), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией иплуфенноквина 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более двух недель.

8.8. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ·сек) от концентрации иплуфенноквина в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки N 2 - 6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика иплуфенноквина.

8.9. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание иплуфенноквина в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где A - величина расхождения;

X - концентрация вещества в растворе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов иплуфенноквина, предусмотренных методикой измерения. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 8.8.

8.10. Подготовка салфеток для проведения смыва.

8.10.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%.

Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизованной воде, доводят водой до метки. Перемешивают.

8.10.2. Подготовка салфеток для проведения смыва. Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 x 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-м раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9.1. Воздух рабочей зоны. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <2>.

--------------------------------

<2> Глава 2 приложения 9 Р 2.2.2006-05 "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", утвержденного Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005; ГОСТ 12.1.005 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 N 3388.

Воздух с объемным расходом 2,0 дм³/мин аспирируют через сорбционные трубки. Для измерения концентрации иплуфенноквина на уровне предела обнаружения (0,05 мг/м³) для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 2 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C - 7 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

9.2. Атмосферный воздух. Отбор проб осуществляется в соответствии с ГОСТ 17.2.3.01.

Воздух с объемным расходом 2,0 дм³/мин аспирируют через сорбционные трубки. Для измерения концентрации иплуфенноквина на уровне предела обнаружения (0,01 мг/м³) для атмосферного воздуха необходимо отобрать 10 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C - 7 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

9.3. Смывы с кожных покровов. Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими средствами индивидуальной защиты участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи раствором этилового спирта, помещая 20 см³ в стеклянную емкость. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C - 5 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре не выше минус 18 °C.

10.1. Воздух рабочей зоны и атмосферный воздух. Вещество с сорбционных трубок экстрагируют следующим образом: содержимое сорбционной трубки (сорбент и стекловату) переносят в мерную пробирку вместимостью 10 см³, заливают 5 см³ ацетона, помещают на ультразвуковую ванну на 5 мин. Растворитель декантируют в круглодонную колбу вместимостью 50 см³, экстракцию повторяют еще дважды.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 30 °C досуха.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 8.4), тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

10.2. Смывы с кожных покровов. Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше плюс 40 °C досуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 8.4, и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию иплуфенноквина в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10.3. Условия хроматографирования.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

- жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором;

- колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая сорбент C18, зернением 5 мкм;

- температура колонки плюс 25 °C;

- подвижная фаза: ацетонитрил - вода (55:45, по объему);

- скорость потока элюента 1,0 см³/мин;

- рабочая длина волны 235 нм;

- объем вводимой пробы 20 мм³;

- ориентировочное время выхода иплуфенноквина 7,4 - 7,6 мин;

- линейный диапазон детектирования 1,0 - 20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор иплуфенноквина с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (подготовленной по п. 8.4).

11.1. Воздушная среда. Концентрацию иплуфенноквина в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация иплуфенноквина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

W - объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см³;

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °C), дм³.

где T - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 для атмосферного воздуха.

11.2. Смывы с кожных покровов. Концентрацию иплуфенноквина в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация иплуфенноквина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³.

Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, мкг/м³, мкг/смыв;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³.

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание иплуфенноквина в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,05 мг/м³; в пробе атмосферного воздуха - менее 0,01 мг/м³; в пробе смыва - менее 0,1 мкг/смыв" <3>.

--------------------------------

<3> 0,05 мг/м³; 0,01 мг/м³; 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения иплуфенноквина при отборе 2,0 дм³ воздуха рабочей зоны; 10 дм³ атмосферного воздуха; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва 200 см²) с кожных покровов соответственно.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

13.2. Показатели повторяемости и воспроизводимости, пределы повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95 приведены в табл. 13.1.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда".

3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

4. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

5. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

6. ГОСТ "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

7. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

8. ГОСТ Р 51945 "Аспираторы. Общие технические условия".

9. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

10. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

11. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия".

12. ГОСТ 4221 "Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

13. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

14. ГОСТ 83 "Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия".

15. ГОСТ Р 51652 "Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия".

16. ГОСТ 61-75 "Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия".

17. ГОСТ 12026 "Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия (с Изменениями N 1, 2, 3, 4)".

18. ГОСТ 26678 "Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия (с Изменением N 1)".

19. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

20. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

21. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

22. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

23. ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".

24. ГОСТ 12.1.005 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".