"МУК 4.1.3932-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фостиазата в плодоовощной продукции методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 03.07.2023)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Ракитский В.Н., Федорова Н.Е., Егорченкова О.Е.).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "03" июля 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для определения в клубнях картофеля, корнеплодах моркови и луке-репке массовой концентрации фостиазата в диапазоне: (0,01 - 0,10) мг/кг - без учета разбавления и (0,01 - 5,00) мг/кг - с учетом разбавления.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Фостиазат - (RS)-S-втор-Бутил-O-этил-2-оксо-1,3-тиазолидин-3-илтиофосфат <1>. Класс - фосфорорганические соединения. Брутто-формула C₉H₁₈NO₃PS₂. Молекулярная масса 283,3.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства:

Жидкость бледно-желтого цвета. Температура кипения плюс 198 °C. Давление паров при плюс 25 °C: 0,56 мПа. Смешивается с органическими растворителями в любых пропорциях: с толуолом, дихлорметаном, метанолом, ацетоном, этилацетатом, октанолом и ацетонитрилом; растворимость в гексане - 13,5 г/дм³ при плюс 25 °C. Растворимость в воде при плюс 20 °C: 9,85 г/дм³. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow logP = 1,68.

Устойчив к гидролизу при pH 5 и 7, при pH 9 распадается за 2 - 3 дня.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) крысы: 73 мг/кг (самцы), 57 мг/кг (самки); острая дермальная токсичность (LD₅₀) крысы: 2372 мг/кг (самцы), 853 мг/кг (самки); острая ингаляционная токсичность (LC₅₀, 4 ч) для самцов крыс - 0,832 мг/дм³, для самок крыс - 0,558 мг/дм³.

2.4. Область применения препарата. Фостиазат - контактный нематоцид нового поколения, играет роль ингибитора ацетилхолинэстеразы, используется в качестве активного ингредиента в средствах защиты растений против тлей, трипсов и клещей на картофеле, табаке, овощных и некоторых других культурах.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. Методика основана на определении фостиазата с использованием капиллярной ГЖХ с масс-селективным детектором (далее - МСД).

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых образцов выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, цитрата натрия и натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного), вымораживают экстракт и проводят очистку методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе аминов, октадецилсилана, графитизированной сажи.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,07 нг. Средняя полнота извлечения - 94% (клубни картофеля), 89% (корнеплоды моркови), 93% (лук-репка).

4.4. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать правила <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<2> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов для градуировки и внесения, смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, установление градуировочной характеристики.

8.2. Очистка органических растворителей.

8.2.1. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ растворителя около 10 г перманганата калия и 30 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

8.2.2. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. н-Гексан. н-Гексан последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

8.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.4.1. Исходный раствор фостиазата для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г фостиазата растворяют в 50 - 60 см³ гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 6-ти месяцев.

8.4.2. Раствор N 1 фостиазата для градуировки (концентрация 1,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,0 см³ исходного раствора с концентрацией фостиазата 100 мкг/см³ (п. 8.4.1), разбавляют гексаном до метки.

Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более месяца.

Растворы NN 2 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.4.3. Рабочие растворы NN 2 - 6 фостиазата для градуировки (концентрации 0,007 - 0,125 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0,7; 1,0; 2,0; 10,0 и 12,5 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.4.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2 - 7 с концентрацией фостиазата 0,007; 0,010; 0,020; 0,100 и 0,125 мкг/см³, соответственно.

Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 7 дней.

8.4.4. Раствор N 7 фостиазата для внесения (концентрация 1,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,0 см³ исходного раствора с концентрацией фостиазата 100 мкг/см³ (п. 8.4.1), разбавляют ацетоном до метки.

Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 7 дней.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.5. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную зависимость суммы площадей пиков энантиомеров фостиазата от концентрации фостиазата в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают сумму площадей пиков энантиомеров фостиазата, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание фостиазата в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,007 до 0,125 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где A - величина расхождения, %;

X - концентрация фостиазата в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора фостиазата, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.7. Приготовление смеси солей для экстракции. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6-ти месяцев).

8.8. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов.

8.8.1. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов клубней картофеля, лука-репки. Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ помещают (150 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (900 +/- 4) мг магния сернокислого и (150 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6-ти месяцев.

8.8.2. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов корнеплодов моркови. Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ помещают (400 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (1200 +/- 4) мг магния сернокислого, (45 +/- 4) мг графитовой сажи и (400 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6-ти месяцев.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <3>.

--------------------------------

<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79, ГОСТ 7176 "Межгосударственный стандарт. Картофель продовольственный. Технические условия", ГОСТ 32284 "Межгосударственный стандарт. Морковь столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия", ГОСТ 34306 "Межгосударственный стандарт. Лук репчатый свежий. Технические условия", ГОСТ Р 51783 "Государственный стандарт Российской Федерации. Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. Технические условия".

9.2. Отобранные образцы клубней картофеля, корнеплодов моркови и лука-репки хранят в холодильнике при температуре не более плюс (2 - 6 °C) не более 5-ти дней, для длительного хранения образцы замораживают и помещают в морозильную камеру (температура не выше минус 18 °C). Перед анализом образцы измельчают.

10.1. Экстракция. Гомогенизированный образец клубней картофеля, корнеплодов моркови, лука-репки массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³, вносят 10 см³ ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку, интенсивно встряхивают вручную 30 сек и вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C, Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.7.), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин.

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 7500 оборотов/мин, вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта.

10.2.1. Клубни картофеля, лук-репка. Аликвоту охлажденного экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 см³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.8.1. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 7500 оборотов/мин. Полученный после очистки экстракт вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C. С помощью пипетки отбирают охлажденный раствор экстракта клубней картофеля, лука-репки, помещают в автосамплер хроматографа и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

10.2.2. Корнеплоды моркови. Аликвоту охлажденного экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 см³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.8.2. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 7500 оборотов/мин. Полученный после очистки экстракт вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше минус 18 °C. Аликвоту охлажденного экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 3 см³ с помощью пипетки переносят в колбу для упаривания на 50 см³ и концентрируют отдуванием в токе чистого газа при температуре не выше плюс 35 °C, сухой остаток растворяют в 3,0 см³ гексана и анализируют на содержание фостиазата по п 10.3.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика фостиазата, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

10.3. Условия хроматографирования.

Хромато-масс-спектрометр с газовым хроматографом, автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой.

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: квадруполя плюс 150 °C, источника плюс 230 °C, переходной камеры плюс 280 °C.

Температура испарителя: плюс 270 °C.

Температура термостата колонки в режиме программирования. Начальная температура - плюс 140 °C, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 30 градусов в минуту до температуры плюс 280 °C, выдержка 4 мин.

Газ-носитель (гелий):

- поток в колонке: 1,0 см³/мин;

- давление 88,08 кПа;

- средняя линейная скорость 37,906 см/сек;

- хроматографируемый объем 1 мм³;

- режим сканирования - мониторинг выбранных ионов (SIM);

- характеристические ионы с m/z (отношение: масса/заряд): 195 (количественный), 283, 166.

- линейный диапазон детектирования: 0,007 - 0,125 нг.

Образцы клубней картофеля, корнеплодов моркови и лука-репки, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор фостиазата с концентрацией 0,125 мкг/см³, разбавляют гексаном, не более чем в 50 раз.

11.1. Содержание фостиазата в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с усредненной величиной площади хроматографического пика фостиазата, мкг/см³;

V - объем растворителя, вносимый в пробу для экстракции, (10 см³);

К_р - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

m - масса анализируемого образца, г;

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

где X - результат определения, мг/кг.

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

--------------------------------

<4> 0,01 мг/кг - предел обнаружения фостиазата в клубнях картофеля, корнеплодах моркови и луке-репке

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6). Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Межгосударственный стандарт. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

4. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

5. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

6. ГОСТ 1770 "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

7. ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

8. ГОСТ Р 52501 (ИСО 3696) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

9. ГОСТ 2603 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Ацетон. Технические условия".

10. ГОСТ 20490 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

11. ГОСТ 4221 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

12. ГОСТ 4166 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

13. ГОСТ 4233 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

14. ГОСТ 22280 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий лимоннокислый 1,5-водный. Технические условия".

15. ГОСТ 4204 "Государственный стандарт союза ССР. Реактивы. Кислота серная. Технические условия".

16. ГОСТ 25336 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

17. ГОСТ 26678 "Государственный стандарт союза ССР. Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия (с Изменением N 1)".

18. ГОСТ ISO 7886-1 "Межгосударственный стандарт. Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

19. ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

20. ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

21. ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

22. ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

23. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79

24. ГОСТ 32284 "Межгосударственный стандарт. Морковь столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия".

25. ГОСТ 7176 "Межгосударственный стандарт. Картофель продовольственный. Технические условия".

26. ГОСТ 34306 "Межгосударственный стандарт. Лук репчатый свежий. Технические условия".

27. ГОСТ Р 51783 "Государственный стандарт Российской Федерации. Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. Технические условия".

28. Постановление Правительства Российской Федерации от 16.11.2020 г. N 1847 "Об утверждении перечня измерений, относящихся к сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений".