"МУК 4.1.3634-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ипроваликарба в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 17.08.2020)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, О.Е. Егорченкова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 17 августа 2020 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для измерения концентраций ипроваликарба в ягодах и соке винограда в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Ипроваликарб - класс карбаматы, смесь S,S- и S,R- диастереомеров. 1-метилэтил [(1S)-2-метил-1-[[[1-(4-метилфенил)этил]амино]карбонил]пропил]карбамат <1>.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

Брутто-формула C₁₈H₂₈N₂O₃.

Молекулярная масса 320,5.

2.2. Порошок белого - желтого цвета. Плотность 1,38 г/см³ при 20 °C. Температура плавления 164 °C. Температура кипения: термическое разложение начинается при температуре более 160 °C. Давление паров при 25 °C 7,7 x 10^-5 мПа. Растворимость в органических растворителях (в г/дм³): ацетон - 41; этилацетат - 20; толуол - 5,3. Растворимость в воде (в мг/дм³ при 20 °C): 17,8.

3.1. Погрешность измерений. При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.

4.1. Метод основан на определении ипроваликарба с использованием капиллярной ГЖХ с масс-селективным детектором после извлечения вещества из анализируемых образцов ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и далее на концентрирующих патронах для твердофазной экстракции.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителями.

Примечание: допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см³), необходимо соблюдать нормы и правила <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<2> Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116. - Примеч. ред. Документ утратил силу с 01.01.2021. Приказом Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 утверждены новые федеральные нормы и правила.

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Очистка органических растворителей.

8.1.1. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

8.1.2. Н-Гексан последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод; перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

8.1.3. Очистка этилацетата.

8.1.3.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

8.1.3.2. Очистка растворителя. Растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят в темноте (в емкости из темного стекла) не более месяца.

8.2. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.2.1. Исходный раствор ипроваликарба для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0001) г ипроваликарба, растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре +(4 - 6) °C в течение 6 месяцев.

8.2.2 Рабочий раствор N 1 ипроваликарба для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного градуировочного раствора с концентрацией 100,0 мкг/см³ (п. 8.2.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 1 с концентрацией ипроваликарба 10,0 мкг/см³.

Раствор хранят в холодильнике при температуре +(4 - 6) °C в течение 10 дней.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено - найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.2.3. Рабочие растворы N 2 - 6 ипроваликарба для градуировки (концентрация 0,05 - 0,5 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают 0,5; 0,8; 1,0; 2,0; и 5,0 см³ рабочего раствора N 1 с концентрацией 10,0 мкг/см³ (п. 8.2.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрациями ипроваликарба 0,05; 0,08, 0,1, 0,2; и 0,5 мкг/см³.

Растворы хранят в холодильнике при температуре +(4 - 6) °C в течение 10 дней.

8.3. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации ипроваликарба в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков ипроваликарба, на основании которых строят градуировочную зависимость.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание ипроваликарба в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,50 мкг/см³. Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:

X - концентрация ипроваликарба в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора ипроваликарба, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 20% при P = 0,95).

8.4. Приготовление смеси этилацетат-циклогексан, объемное соотношение 1 : 1. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 500 см³ этилацетата и 500 см³ циклогексана, перемешивают. Смесь хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более месяца.

8.5. Приготовление смеси гексан-этилацетат для очистки экстрактов на концентрирующих патронах.

8.5.1. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 90 : 10). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 90 см³ гексана и 10 см³ этилацетата, перемешивают.

8.5.2. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 80 : 20). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 80 см³ гексана и 20 см³ этилацетата, перемешивают.

8.5.3. Смесь гексан-этилацетат (объемное соотношение 1 : 1). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 50 см³ гексана и 50 см³ этилацетата, перемешивают.

8.6. Подготовка концентрирующих патронов. Патрон устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума <3>. Сверху в патрон устанавливают стеклянную пипетку вместимостью 5 см³, используемую в качестве емкости для элюента.

--------------------------------

<3> В отсутствие специального аллонжа жидкость продавливают через патрон с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 2 - 3 капли в секунду.

Концентрирующий патрон промывают 5 см³ этилацетата и 5 см³ гексана. Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителя через патрон не должна превышать 2 см³/мин, при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона. Патрон готовят непосредственно перед использованием.

8.7. Проверка поведения ипроваликарба на концентрирующем патроне. В круглодонную колбу вместимостью 150 см³ помещают 0,1 см³ рабочего раствора N 1 ипроваликарба для внесения с концентрацией 10,0 мкг/см³ (п. 8.2.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Сухой остаток растворяют в 0,5 см³ этилацетата и 4,5 см³ гексана, помещая на ультразвуковую баню на 30 сек, перемешивают и наносят на подготовленный концентрирующий патрон (п. 8.6). Патрон промывают 5 см³ смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 90 : 10), 5 см³ смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 80 : 20), элюаты отбрасывают.

Ипроваликарб элюируют с патрона 5 см³ смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 1 : 1), упаривают, остатки растворяют в 2 см³ ацетона, анализируют содержание ипроваликарба по п. 10.4.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: проверку хроматографического поведения ипроваликарба следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с ГОСТ 32786 и ГОСТ 26313. Отобранные пробы винограда хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике в темноте не более 7 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C.

9.2. Сок анализируют в день приготовления. Перед анализом образцы ягод винограда измельчают с помощью гомогенизатора.

10.1. Экстракция.

10.1.1. Виноград. Образец измельченных проб ягод винограда массой 10 г, помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют ацетон в количестве 70 см³ и помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут. Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Экстракцию повторяют, используя 30 см³ ацетона, выдерживая 1 мин на ультразвуковой бане и 30 мин на аппарате для встряхивания. Осадок на фильтре промывают 20 см³ ацетона.

Объединенный отфильтрованный экстракт перемешивают, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до водного остатка (объем 5 - 10 см³) и подвергают очистке перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 10.2, затем на патроне по п. 10.3.

10.1.2. Сок винограда. Пробу сока винограда массой 10 г вносят в коническую колбу на 250 см³, добавляют 70 см³ ацетона, интенсивно встряхивают в течение 5 минут, помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин и выдерживают 1 час в холодильнике при +(4 - 6) °C.

Полученный экстракт отфильтровывают на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Осадок на фильтре повторно дважды промывают 20 см³ ацетона.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в колбу для упаривания на 250 см³, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до водного остатка (объем 5 - 10 см³) и подвергают очистке по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Водную фазу, полученную по п.п. 10.1.1 или 10.1.2, переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³. Колбу дополнительно обмывают 200 см³ деионизированной воды, которую также переносят в делительную воронку, вносят 20 см³ насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем в воронку добавляют 40 см³ смеси этилацетат-циклогексан (соотношение 1 : 1 по объему) и интенсивно встряхивают в течение 2 мин.

После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (толщиной около 1 см), помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 250 см³. Процедуру экстракции водной фазы повторяют дважды, новыми порциями смеси этилацетат-циклогексан (соотношение 1 : 1 по объему) объемом 20 см³, встряхивая в течение 5 мин.

После завершения экстракции сульфат натрия промывают 10 см³ смеси этилацетат-циклогексан (соотношение 1 : 1 по объему).

Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 - 15 мин. Следы органической фазы в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.

Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха и подвергают дополнительной очистке на патроне по п. 10.3.

10.3. Очистка экстракта зерна на концентрирующем патроне. Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 10.2, растворяют с помощью ультразвуковой бани в 0,5 см³ этилацетата и 4,5 см³ гексана, помещая на ультразвуковую баню на 30 с, перемешивают и наносят на подготовленный концентрирующий патрон (п. 8.6).

Патрон промывают последовательно 5 см³ смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 90 : 10), 5 см³ смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 80 : 20), элюаты отбрасывают.

Ипроваликарб элюируют с 5 см³ смеси гексан-этилацетат (объемное соотношение 1 : 1), упаривают, остаток растворяют в 2 см³ ацетона и анализируют содержание ипроваликарба по п. 10.4.

10.4. Условия хроматографирования:

- газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором, автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой;

- хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% - фенил 95% - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм);

- температура детектора: квадруполя - 150 °C, источника - 230 °C;

- температура переходной камеры - 280 °C;

- температура испарителя 240 °C;

- температура термостата колонки программированная. Начальная температура 150 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 215 °C, выдержка 7 мин, нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 5 мин;

- газ 1 (гелий): поток в колонке 1,8 см³/мин;

- давление 157,9 кПа;

- средняя линейная скорость 51,051 см/с;

- хроматографируемый объем 1 мм³;

- режим регистрации индивидуальных ионов;

- отношение масса-заряд: 119 (количественный), 72,134;

- линейный диапазон детектирования 0,05 - 0,50 нг.

Образцы, дающие пики, большие чем градуировочный раствор ипроваликарба с концентрацией 0,5 мкг/см³, разбавляют ацетоном не более чем в 50 раз.

11.1. Содержание ипроваликарба в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

X - содержание ипроваликарба в пробе, мг/кг;

A - концентрация вещества, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной суммы площадей хроматографических пиков, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г.

f - полнота извлечения вещества, выраженная в относительных единицах (величину полноты извлечения, приведенную в табл. 3.2, разделить на 100).

12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

13.1. Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание ипроваликарба в пробе ягод и сока винограда менее 0,01 мг/кг" <4>.

--------------------------------

<4> 0,01 мг/кг предел обнаружения в пробе ягод и сока винограда.

14.1. Организация контроля качества результатов измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6).

14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

1. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

2. ГОСТ 6359 "Барографы метеорологические анероидные. Технические условия".

3. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

4. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

5. ГОСТ 9293 (ИСО 2435) "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

7. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

8. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

9. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

10. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

11. ГОСТ 32786 "Виноград столовый свежий. Технические условия".

12. ГОСТ 26313 "Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора проб".

13. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

14. ГОСТ 28498 "Термометры жидкостные стеклянные общие технические требования. Методы испытаний".

15. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия".

16. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый".

17. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия".

18. ГОСТ 4523 "Магний сернокислый 7-водный. Технические условия".

19. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

20. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов N 2051-79 от 21.08.79.