"МУК 4.1.3855-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций изоциклосерама в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе городских и сельских поселений и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором РФ 22.06.2023)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Ракитский В.Н., Федорова Н.Е., Мухина Л.П.).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 22 июня 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе городских и сельских поселений и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации изоциклосерама в диапазонах: воздух рабочей зоны (0,1 - 1,2) мг/м³ - без учета разбавления, при разбавлении в 50 раз (0,1 - 60) мг/м³; атмосферный воздух (0,008 - 0,096) мг/м³ - без учета разбавления, при разбавлении (0,008 - 4,800) мг/м³; смывы с кожных покровов (0,2 - 2,4) мкг/смыв без учета разбавления, при разбавлении в 50 раз (0,2 - 120) мкг/смыв.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Изоциклосерам - 4-[5-(3,5-дихлор-4-фторфенил)-4,5-дигидро-5-(трифторметил)изоксазол-3-ил]-N-[2-этил-3-оксоизоксазолидин-4-ил]-о-толуамид <1>. Брутто-формула C₂₃H₁₉Cl₂F₄N₃O₄. Молекулярная масса 548,3 г/моль.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства. Бесцветное кристаллическое вещество. Давление паров менее 6,2·10^-3 мПа (при плюс 20 °C). Растворимость в органических растворителях (при плюс 25 °C, г/дм³): 1,2-гексан - 39, ацетон - 270, метанол - 75, октанол - 17, дихлорметан - 400, этилацетат - 190. Растворимость в воде при плюс 20 °C (г/дм³) - 1,2. Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода при плюс 20 °C, K_ow logP = 5,0.

2.3. Острая пероральная токсичность для крыс и мышей (ЛД₅₀) 5000 мг/кг, острая дермальная токсичность (ЛД₅₀) 5000 мг/кг. Острая ингаляционная токсичность (ЛК₅₀) для крыс 4,62 мг/л воздуха.

2.4. Инсектицид, применяется против широкого спектра действия насекомых-вредителей.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. Измерения концентраций изоциклосерама выполняют методом ВЭЖХ на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

4.2. Концентрирование вещества из воздуха рабочей зоны и атмосферного воздуха осуществляют на сорбционные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом, экстракцию проводят ацетонитрилом, смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1,0 нг.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на приборы.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), подготовка подвижной фазы, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед использованием ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 700 см³ ацетонитрила, добавляют 300 см³ воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

8.4. Кондиционирование хроматографической колонки. Промывают колонку подвижной фазой (п. 8.3) не менее 30 минут при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.5. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.5.1. Исходный раствор изоциклосерама для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г изоциклосерама, растворяют в 50 - 60 см³ ацетонитрила, доводят до метки, перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 3-х месяцев.

Растворы N 1 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.5.2. Раствор N 1 изоциклосерама для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора изоциклосерама с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.5.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более месяца.

8.5.3. Рабочие растворы N 2 - 6 изоциклосерама для градуировки (концентрация 0,1 - 1,2 мкг/см³). В 4 мерных колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1; 2; 5 и 10 см³ раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.5.2) и 1 мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,2 см³ исходного раствора с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.5.1), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п. 8.3), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией изоциклосерама 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 1,2 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более двух недель.

8.6. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации изоциклосерама в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-и растворам для градуировки N 2 - 6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика изоциклосерама.

8.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание изоциклосерама в которых должно входить в диапазон концентраций от 0,1 до 1,2 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где A - величина расхождения, %;

X - концентрация вещества в растворе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов изоциклосерама, предусмотренных методикой измерения. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 8.6.

8.8. Подготовка салфеток для проведения смыва.

8.8.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%.

Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизованной воде, доводят водой до метки. Перемешивают.

8.8.2. Подготовка салфеток для проведения смыва. Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 x 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-ным раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9.1. Воздух рабочей зоны. Отбор проб осуществляется в соответствии с документами <2>.

--------------------------------

<2> Глава 2 приложения 9 руководства Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда", утвержденного Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005; ГОСТ 12.1.005 "Межгосударственный стандарт. ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 29.09.1988 N 3388.

Воздух с объемным расходом 2,0 дм³/мин аспирируют через сорбционные трубки. Для измерения концентрации изоциклосерама на уровне предела обнаружения (0,1 мг/м³) для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 2 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 10 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

9.2. Атмосферный воздух. Отбор проб осуществляют в соответствии с документом <3>.

--------------------------------

<3> ГОСТ 17.2.3.01 "Межгосударственный стандарт. Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 10.11.1986 N 3395.

Воздух с объемным расходом 2,0 дм³/мин аспирируют через сорбционные трубки. Для измерения концентрации изоциклосерама на уровне предела обнаружения (0,008 мг/м³) для атмосферного воздуха необходимо отобрать 25 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 10 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

9.3. Смывы с кожных покровов <4>. Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

--------------------------------

<4> МУК 4.1.3220-14 "Гигиенический и аналитический контроль за загрязнениями кожных покровов лиц, работающих с пестицидами", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 02.09.2014.

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см³ в стеклянную емкость. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более 10 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре не выше минус 18 °C.

10.1. Воздух рабочей зоны и атмосферный воздух. Вещество с сорбционных трубок экстрагируют следующим образом: содержимое сорбционной трубки (сорбент и стекловату) переносят в лабораторную пробирку вместимостью 10 см³, заливают 5 см³ ацетонитрила, помещают на ультразвуковую ванну на 5 мин. Растворитель декантируют в круглодонную колбу вместимостью 50 см³, экстракцию повторяют еще дважды.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную (грушевидную) колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 30 °C досуха.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 8.3), тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

10.2. Смывы с кожных покровов. Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают в круглодонной (грушевидной) колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C досуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 8.3, и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию изоциклосерама в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,2 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10.3. Условия хроматографирования.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором;

Колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая сорбент C18, зернением 5 мкм;

Температура колонки: плюс 25 °C;

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (70:30, по объему);

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин;

Рабочая длина волны: 265 нм;

Объем вводимой пробы: 20 мм³;

Ориентировочное время выхода изоциклосерама: (8,9 - 9,0) мин;

Линейный диапазон детектирования: (2,0 - 24) нг.

11.1. Воздушная среда. Концентрацию изоциклосерама в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация изоциклосерама в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура плюс 20 °C) или нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °C), дм³;

где T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,359 для атмосферного воздуха.

11.2. Смывы с кожных покровов. Концентрацию изоциклосерама в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация изоциклосерама в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, мг/м³, мкг/смыв;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³, мкг/смыв:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: содержание изоциклосерама в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,1 мг/м³; в пробе атмосферного воздуха - менее 0,008 мг/м³; в пробе смыва - менее 0,2 мкг/смыв <5>.

--------------------------------

<5> 0,1 мг/м³; 0,008 мг/м³; 0,2 мкг/смыв - пределы обнаружения изоциклосерама при отборе 2 дм³ воздуха рабочей зоны; 25 дм³ атмосферного воздуха; в пробе смыва (фиксированная площадь 200 см²) с кожных покровов соответственно.

13.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6). Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

13.2. Показатели повторяемости и воспроизводимости, пределы повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95 приведены в таблице 13.1.

1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Государственный стандарт Российской Федерации. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

3. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

4. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

5. ГОСТ 1770 "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

6. ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

7. ГОСТ Р 51945 "Государственный стандарт Российской Федерации. Аспираторы. Общие технические условия".

8. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

9. ГОСТ 4221 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

10. ГОСТ 83 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия".

11. ГОСТ Р 51652 "Государственный стандарт Российской Федерации. Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия".

12. ГОСТ 25336 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

13. ГОСТ 9147 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия".

14. ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

15. ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

16. ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

17. ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

18. ГОСТ 17.2.3.01 "Межгосударственный стандарт. Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".

19. ГОСТ 12.1.005 "Межгосударственный стандарт. ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

20. Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда".

21. МУК 4.1.3220-14. Методические указания. Гигиенический и аналитический контроль за загрязнениями кожных покровов лиц, работающих с пестицидами.