"МУК 4.1.3562-19. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств оксатиапипролина в воде, почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 11.10.2019)

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовых концентраций оксатиапипролина в воде в диапазоне 0,005 - 0,050 мг/дм³ и в почве в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг.

1.2. Физико-химические свойства оксатиапипролина.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 1-(4-{4-[(5RS)-5-(2,6-дифторфенил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил]-1,3-тиазол-2-ил}-1-пиперидил)-2-[5-метил-3-(трифторметил)-1H-пиразол-1-ил]этанон.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₂₄H₂₂F₅N₅O₂S.

Молекулярная масса: 539,5.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белого цвета, без запаха.

Давление паров: 1,41 x 10^-3 мПа.

Коэффициент распределения октанол/вода (при pH 7, 20 °C): K_owlogP = 3,66.

Температура плавления: 146,4 °C.

Растворимость в воде (мг/дм³, 20 °C): 0,1749.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 20 °C): хлористый метилен - 352; ацетон - 147; ацетонитрил - 111; этилацетат - 31,7; метанол - 13; толуол - 5,7; н-октанол - 0,04; гексан - 0,01.

Гидролитически стабилен при pH 7 и температуре 20 °C.

Устойчив в почве ДТ₅₀ 121 день.

1.3. Краткая токсикологическая характеристика: оксатиапипролин относится к веществам мало опасным по острой оральной (ЛД₅₀ для крыс более 5 000 мг/кг), дермальной токсичности (ЛД₅₀ для крыс более 5 000 мг/кг) и ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 ч) более 5 000 мг/м³ воздуха). Не раздражает слизистую глаз и кожу.

Область применения: оксатиапипролин - фунгицид системного действия. Ингибирует оксистеролсвязывающий белок, который предотвращает прорастание споры и ингибирует образование зародышевой трубки и рост мицелия.

1.4. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы организациями, аккредитованными в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья, пищевых продуктов.

1.5. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

3.1. Метод основан на определении оксатиапипролина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенной фазе с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора (ВЭЖХ-МС-МС).

Определение оксатиапипролина в воде проводится после его экстракции хлористым метиленом из подкисленного образца воды.

Определение оксатиапипролина в почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата, томатном соке, ягодах винограда и в виноградном соке проводится после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами.

Идентификация оксатиапипролина проводится по времени удерживания, наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов. Количественное определение оксатиапипролина проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометрического детектора.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс жидкостного хроматографа с масс-спектрометрическим детектором.

5.2. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <1>.

--------------------------------

<1> ГН 2.2.5.3532-18 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны"; ГН 2.2.5.2308-07 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

6.1. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

Подготовка органических растворителей.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

Хлористый метилен промывают равным объемом 5% раствора гидрокарбоната натрия, осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °C, отбрасывают.

8.2.1.1. Приготовление 5% раствора гидрокарбоната натрия.

В мерную колбу объемом 1 000 см³ переносят 50 г гидрокарбоната натрия, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Раствор используют для очистки хлористого метилена.

8.2.1.2. Приготовление 1,0% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле.

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ ацетонитрила, прибавляют 10,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.

8.2.1.3. Приготовление 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле.

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ ацетонитрила, прибавляют 1,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.

8.2.1.4. Приготовление 0,05% водного раствора муравьиной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ бидистиллированной воды, прибавляют 0,5 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

8.2.1.5. Приготовление 0,01% раствора муравьиной кислоты в метаноле.

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ метанола, прибавляют 0,1 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки метанолом. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

8.2.1.2. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.

В стеклянную емкость объемом 1 000 см³ переносят 400 г хлорида натрия, доливают 800 см³ дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли.

Стандартный раствор с концентрацией оксатиапипролина 100,0 мкг/см³ в ацетонитриле стабилен при хранении при температуре не выше -18 °C в течение 6 месяцев.

Все стандартные растворы, приготовленные в ацетонитриле или в растворе 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле, остаются стабильными в течение 3 месяцев при хранении при температуре не выше -18 °C.

Стандартные растворы следует помещать в морозильную камеру непосредственно после каждого использования.

8.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией оксатиапипролина 100,0 мкг/см³.

Взвешивают 10 мг оксатиапипролина в мерной колбе объемом 100 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Полученный стандартный раствор N 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики.

8.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией оксатиапипролина 10,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор N 2 используют для приготовления градуировочных растворов и стандартных растворов для внесения в контрольные образцы.

8.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией оксатиапипролина 1,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 3 используют для приготовления градуировочных растворов.

8.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией оксатиапипролина 0,1 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 4 используют для приготовления градуировочных растворов.

8.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией оксатиапипролина 0,025 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 2,5 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 5 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией оксатиапипролина 0,02 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 2,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 5 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией оксатиапипролина 0,01 мкг/см³.

Из стандартного раствора N отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 7 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.8. Стандартный раствор N 8 с концентрацией оксатиапипролина 0,005 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 5,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 8 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.9. Стандартный раствор N 9 с концентрацией оксатиапипролина 0,002 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 6 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 9 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.1.10. Стандартный раствор N 10 с концентрацией оксатиапипролина 0,0014 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 9 отбирают пипеткой 7,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор N 10 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.11. Стандартные растворы оксатиапипролина с концентрацией 5,0; 2,5; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора N 2 готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,5; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ оксатиапипролина и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость отклика фрагментарного иона, используемого для количественного определения, от концентрации оксатиапипролина в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6-ти растворам для градуировки с концентрацией 0,0014; 0,002; 0,005; 0,01; 0,02 и 0,025 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.8. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Производят расчет параметров градуировочной характеристики (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации оксатиапипролина в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0,995, и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20% для каждого уровня градуировочной характеристики.

Если линейность градуировочной характеристики была продемонстрирована, то при анализе серий образцов допускается устанавливать градуировочную характеристику методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5-ти и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений. Данные для построения градуировочной зависимости набираются перед началом серии анализов и после ее окончания. По полученным данным производят расчет параметров градуировочной характеристики. Рекомендуется в серию анализов включать не более 12 инъекций.

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 40 °C в течение 3 - 4 часов.

9.1. Отбор проб производится в соответствии с утвержденными документами <2>.

--------------------------------

<2> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, ГОСТ 31861; ГОСТ 17.4.3.01; ГОСТ 28168; ГОСТ 26832; ГОСТ 34306; ГОСТ 1723; ГОСТ 34298; ГОСТ Р 32876; ГОСТ 32786; ГОСТ 32101.

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы клубней картофеля, лука, плодов томата и ягод винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре (4 +/- 2) °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °C.

Пробы томатного и виноградного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C не более 5 суток.

10.1.1. Экстракция.

К пробе воды объемом 100 см³ прибавляют 1,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают и помещают в делительную воронку объемом 250 см³. Оксатиапипролин экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 20 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия, обмывают осушитель 5 см³ хлористого метилена, элюаты объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

Остатки кислоты отдувают током холодного воздуха.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разведения в 250 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 0,1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 4,9 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.2.1. Экстракция.

При экстракции в каждую банку с пробой и растворителем помещается по 3 стальных шарика для экстракции, которые перед центрифугированием удаляют.

Образец почвы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, прибавляют 5 см³ дистиллированной воды, 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости 4 000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще раз, используя 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и помещая пробы на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 5 минут при скорости 4 000 оборотов в минуту. Экстракты фильтруют, объединяют в концентраторе объемом 250 см³. К экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4 - 5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

10.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К водному остатку в концентраторе, полученному по п. 10.1.1, прибавляют 100 см³ дистиллированной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Концентратор обмывают 30 см³ хлористого метилена, переносят смыв в ту же делительную воронку и встряхивают ее в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще двумя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. Нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия, обмывают осушитель 10 см³ хлористого метилена, элюаты объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.3.1. Экстракция.

Образец измельченных клубней картофеля массой 10 г помещают в прочный фарфоровый стакан объемом 600 см³, прибавляют 50 см³ раствора 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают 1 минуту с помощью погружного миксера. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще одной порцией объемом 50 см³ раствора 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле в тех же условиях. Экстракты фильтруют и объединяют в концентраторе объемом 250 см³. К экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4 - 5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.2.2.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.4.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец измельченных плодов томата или ягод винограда массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ раствора 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще одной порцией объемом 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле в тех же условиях. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в химический стакан объемом 250 см³, верхний слой (гексановый) отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 30 см³ в тех же условиях. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4 - 5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.2.2.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.5.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец томатного сока массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 100 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в химический стакан объемом 250 см³, верхний слой (гексановый) отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 30 см³ в тех же условиях. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4 - 5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.2.2.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.6.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец виноградного сока массой 10 г помещают в делительную воронку объемом 250 см³, прибавляют 20 см³ насыщенного раствора хлорида натрия и перемешивают. Оксатиапипролин экстрагируют тремя порциями 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле объемом по 50 см³, 30 см³ и 30 см³, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 минуты. Каждый раз после разделения фаз в делительной воронке верхний ацетонитрильный слой с небольшим количеством эмульсии объединяют в плоскодонной колбе объемом 250 см³. Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 см³, после разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой отбрасывают.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке отбрасывают выделившуюся воду (нижний слой), средний ацетонитрильный слой сливают в химический стакан объемом 250 см³, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 30 см³ в тех же условиях. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4 - 5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.2.2.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.7.1. Экстракция.

Образец измельченного лука-репки массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ 1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще двумя порциями по 30 см³ каждая 1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, каждая в тех же условиях. Экстракты фильтруют и объединяют в концентраторе объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4 - 5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

10.7.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К водному остатку в концентраторе прибавляют 100 см³ дистиллированной воды, 10 см³ насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Концентратор обмывают 30 см³ хлористого метилена, переносят смыв в ту же делительную воронку и встряхивают ее в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще двумя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. Нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия, обмывают осушитель 10 см³ хлористого метилена, элюаты объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.8. Хроматографические и масс-спектрометрические условия

Система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором, включающая:

- модульный жидкостной хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элюента от 0,001 до 5,0 см³/мин и создавать давление от 0 до 600 бар; вакуумного дегазатора; термостата колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температур от 10 до 80 °C; с возможностью использования автоматического дозатора проб с использованием виал объемом 2 см³. ВЭЖХ система соединена с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройная квадруполь с двумя высокопроизводительными турбомолекулярными насосами, позволяющим регистрировать отдельные ионы с заданными массами от 5 до 3000 а.е.м.;

- компьютерную систему обработки данных, контролирующую работу всего прибора, обеспечивающую сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спектрометрического анализа, обеспечивающую обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ.

10.8.1. Условия хроматографирования.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Температура колонки: 40 °C.

Подвижная фаза: A - 0,05% водный раствор муравьиной кислоты, B - 0,01% раствор муравьиной кислоты в метаноле (% по объему) в градиентном режиме со скоростью потока 0,6 см³/мин.

Для направления потока в слив до и после десорбции оксатиапипролина используется шестипортовый переключающий кран с электроприводом, входящий в состав системы. Режим переключения шестипортового крана: с 0 до 8 минуты - в слив; с 8 до 13 минуты - в источник масс-детектора; с 13 до 18 минуты - в слив.

Объем вводимой пробы: 10 мм³.

10.8.2. Условия масс-спектрометрирования.

Время подачи элюента во время анализа: 8 - 13 минут.

Газ-осушитель - азот с температурой 320 °C, расход 10 м³/мин.

Расход газа периферийного слоя: 11 м³/мин с температурой 400 °C.

Давление в распылителе: 30 psi.

Напряжение ионизации: 3500 В.

Источник ионов - электроспрей.

Режим ионизации - положительный.

Режим сканирования - мониторинг множественных реакций (MRM).

Детектируемые переходы:

Оксатиапипролин: - количественный переход, энергия соударения - 35 В; - качественный переход, энергия соударения - 38 В. Энергия фрагментации 130 В, время сканирования 50 мс, напряжение на ускорителе ячейки 5 В.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартные растворы оксатиапипролина с концентрацией 0,025 мкг/см³, соответственно разбавляют.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание оксатиапипролина в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

X - содержание оксатиапипролина в пробе, мг/дм³ или мг/кг;

S_ст - высота (площадь) пика стандарта, мм;

S_пр - высота (площадь) пика образца, мм;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³);

P - содержание оксатиапипролина в аналитическом стандарте, %.

12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм³;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

13.1. Результат анализа представляют в виде:

при вероятности P = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

- при определении остаточного количества оксатиапипролина в почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг;

Примечание: 0,01 мг/кг - предел обнаружения определяемой концентрации оксатиапипролина в почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке;

- при определении остаточного количества оксатиапипролина в воде содержание вещества в пробе менее 0,005 мг/дм³;

Примечание: 0,005 мг/дм³ - предел обнаружения определяемой концентрации оксатиапипролина в воде.

14.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.

Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание оксатиапипролина в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,0014 до 0,025 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:

X - концентрация оксатиапипролина контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора оксатиапипролина в 0,1% растворе муравьиной кислоты в ацетонитриле, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

20 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов оксатиапипролина, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново, согласно п. 8.3.

14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 12) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

1. ГН 1.2.3539-18 "Гигиенические нормативы содержания пестицидов в объектах окружающей среды (перечень)".

2. ГН 2.2.5.3532-18 "Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

3. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.

4. ГОСТ Р 8.563 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений".

5. ГОСТ ISO/IEC 17025 "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-1-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Части 1 - 6".

7. РМГ 76 "Государственная система обеспечения единства измерений. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

8. РМГ 61 "Государственная система обеспечения единства измерений. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки".

9. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

10. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

11. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

12. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

13. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

14. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

15. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

16. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

17. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры.

18 ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия".

19. ГОСТ 6709 "Вода дистиллированная. Технические условия".

20. ГОСТ 5556 "Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия".

21. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

22. ГОСТ 6995 "Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".

23. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

24. ГОСТ 5848 "Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия".

25. ГОСТ 4166 "Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

26. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

27. ГОСТ 4201 "Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия".

28. ГОСТ 31861 "Вода. Общие требования к отбору проб".

29. ГОСТ 17.4.3.01 "Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб".

30. ГОСТ 28168 "Почвы. Отбор проб".

31. ГОСТ 7176 "Картофель продовольственный. Технические условия".

32. ГОСТ 26832 "Картофель свежий для переработки на продукты питания. Технические условия".

33. ГОСТ 34306 "Лук репчатый свежий. Технические условия".

34. ГОСТ 1723 "Лук репчатый свежий заготовляемый и поставляемый. Технические условия".

35. ГОСТ 34298 "Томаты свежие. Технические условия".

36. ГОСТ Р 32876 "Продукция соковая. Сок томатный. Технические условия".

37. ГОСТ 32786 "Виноград свежий столовый. Технические условия".

38. ГОСТ 32101 "Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия".