"МУК 4.1.3858-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций диафентиурона в атмосферном воздухе городских и сельских поселений и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 22.06.2023)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Кузьмин С.В., Ракитский В.Н., Федорова Н.Е., Бондарева Л.Г.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 22 июня 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения массовых концентраций диафентиурона в атмосферном воздухе городских и сельских поселений в диапазонах (0,0002 - 0,0040) мг/м³ - без учета разбавления и при разбавлении (0,0002 - 0,2000) мг/м³ и в смывах с кожных покровов операторов в диапазонах (0,1 - 2,0) мкг/смыв - без разбавления и при разбавлении (0,1 - 100,0) мкг/смыв.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Диафентиурон. CAS: 80060-09-9. 1-трет-бутил-3-(2,6-диизопропил-4-феноксифенил)тиомочевина <1>. Молекулярная формула: C₂₃H₃₂N₂OS. Молекулярный вес: 384,58. Внешний вид: белый порошок. Температура плавления - плюс 146 °C. Плотность - 1,09 г/см³ при плюс 20 °C. Давление паров 0,002 мПа (при плюс 20 °C). Коэффициент распределение н-октанол - вода KowlogP = 5,76 (плюс 20 °C). Растворимость в воде 0,06 мг/дм³ (плюс 20 °C). Растворим в органических растворителях (мг/дм³): этанол - 43000, ацетон - 320000, толуол - 33000, н-гексан - 9600.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Агрегатное состояние в атмосферном воздухе - пары и аэрозоль.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика. Острая оральная токсичность (LD50) для крыс - 2068 мг/кг.

2.4. Диафентиурон - инсектицид и акарицид, эффективный против клещей, белокрылки и тлей.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. Измерения концентраций диафентиурона выполняют методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором на диодной матрице.

4.2. Концентрирование вещества из атмосферного воздуха осуществляют на сорбционные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом, экстракцию с трубок проводят ацетоном. Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,1 нг. Средняя полнота извлечения - 83,6% (атмосферный воздух), 84,6% (смывы с кожных покровов).

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Очистка органических растворителей.

Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия). Хранят в емкости из темного стекла.

8.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ.

В мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 850 см³ ацетонитрила и доводят объем до метки деионизированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют. Подвижную фазу хранят не более месяца.

8.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.4.1. Исходный раствор диафентиурона для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г диафентиурона, растворяют в 50 - 60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 1 месяца.

8.4.2. Раствор N 1 диафентиурона для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного раствора с концентрацией диафентиурона 100 мкг/см³ (п. 8.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более недели.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 для градуировки (концентрации 0,05 - 1,0 мкг/см³) готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки. В 5 мерных градуированных пробирок вместимостью 10 см³ помещают по 0,05; 0,1; 0,25; 0,5 и 1,0 см³ градуировочного раствора N 2 с концентрацией 10,0 мкг/см³ (п. 8.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной в соответствии с п. 8.3, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 6 с концентрацией диафентиурона 0,05, 0,1, 0,25, 0,5, 1,0 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы для градуировки не хранятся и готовятся по мере необходимости свежие.

8.5. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную зависимость площади пика от концентрации диафентиурона в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пика диафентиурона, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух растворов для градуировки, содержание диафентиурона в которых входит в диапазон измерения 0,05 - 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:

где A - величина расхождения, %;

X - концентрация диафентиурона в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора диафентиурона, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 15% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 15%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

8.7. Подготовка салфеток для проведения смыва.

8.7.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5% (5%-ный раствор). Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C не более месяца.

8.7.2. Подготовка салфеток для проведения смыва. Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 x 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-ным раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическим документом <2>.

--------------------------------

<2> ГОСТ 17.2.3.01 "Межгосударственный стандарт. Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".

9.2. Воздушная среда.

Атмосферный воздух с объемным расходом 2,0 дм³/мин аспирируют через 2 параллельно установленные пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом. Для определения вещества на уровне нижнего предела количественного определения (0,0002 мг/м³) необходимо отобрать 128 дм³ воздуха через каждую трубку.

Срок хранения отобранных проб (пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом), раздельно помещенных в полиэтиленовые пакеты, при комнатной температуре или в холодильнике плюс (2 - 6) °C не более 5 дней.

Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

9.3. Условия проведения смыва <3>. Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими средствами индивидуальной защиты участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

--------------------------------

<3> МУК 4.1.3220-14 "Гигиенический и аналитический контроль за загрязнениями кожных покровов лиц, работающих с пестицидами", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственный санитарным врачом Российской Федерации 02.09.2014.

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи смесью этилового спирта с водой (8:2, по объему), помещая 20 см³ в стеклянную емкостью с герметичной крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике при температуре плюс (2 - 6) °C - 5 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

10.1. Атмосферный воздух. Содержимое 2-х экспонированных сорбционных трубок, установленных параллельно (сорбент и стекловату), переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 15 см³ ацетона, помещают на ультразвуковую баню на 15 минут. Растворитель сливают, сорбент и стекловату еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 см³, выдерживая на ультразвуковой бане по 10 минут.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе с мембранным насосом при температуре бани не выше плюс 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы (п. 8.3), тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию диафентиурона в хроматографируемом растворе.

10.2. Смывы с кожных покровов. Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную лабораторную воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этанолом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Сухой остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (п. 8.3) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию диафентиурона в хроматографируемом растворе.

10.3. Условия хроматографирования.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

- жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором и термостатом колонки;

- хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращено-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами (C-18 или C-8) для удерживания гидрофильных соединений, зернением 5 мкм;

- рабочая длина волны: 254 нм;

- температура колонки: плюс 30 °C;

- подвижная фаза: ацетонитрил - вода (85:15, по объему);

- скорость потока элюента: 1,0 см³/мин;

- объем вводимой пробы: 20 мм³;

- линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более, чем в 50 раз).

11.1. Концентрацию вещества в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °C) для атмосферного воздуха, дм³.

где T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), град. C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,359 для атмосферного воздуха.

11.2. Смывы с кожных покровов. Концентрацию вещества в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, мг/м³, мкг/смыв;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³, мкг/смыв:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "в пробе атмосферного воздуха - менее 0,0002 мг/м³; в пробе смыва - менее 0,1 мкг/смыв" <4>.

--------------------------------

<4> 0,0002 мг/м³; 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 256 дм³ атмосферного воздуха, в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см²) соответственно.

13.1 Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6). Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

13.2. Показатели повторяемости и воспроизводимости, пределы повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95 приведены в таблице 13.1.

1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Межгосударственный стандарт. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

3. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

4. ГОСТ 28498 "Межгосударственный стандарт. Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний".

5. ГОСТ 1770 "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

6. ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

7. ГОСТ 4221 "Государственный стандарт Союза ССР. Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

8. ГОСТ 83 "Межгосударственный стандарт. Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия".

9. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

10. ГОСТ 5962 "Межгосударственный стандарт. Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия".

11. ГОСТ 9147 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия".

12. ГОСТ 25336 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

13. ГОСТ 21241 "Государственный стандарт Союза ССР. Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний".

14. ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

15. ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

16. ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

17. ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

18. ГОСТ 12.0.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

19. ГОСТ 17.2.3.01 "Межгосударственный стандарт. Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".