"МУК 4.1.3411-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств боскалида в зеленой массе, корнеплодах сахарной свеклы, зерне гороха, кукурузы, бобах сои и растительном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.12.2016)

1. Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийский НИИ защиты растений" (В.И. Долженко, О.К. Остроухова) и ООО "Инновационный центр защиты растений" (И.А. Цибульская).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2016 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 01.5.04.231/01.00043/2016.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации боскалида в зеленой массе, корнеплодах сахарной свеклы, зерне гороха и кукурузы, бобах сои и растительном масле в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Боскалид (ISO)

2-хлор-N-(4-хлорбифенил-2-ил) никотинамид (IUPAC).

Структурная формула:

Брутто формула: C₁₈H₁₂Cl₂N₂O.

Молекулярная масса: 343,2.

Химически чистый препарат - белое кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 142,8 - 143,8 °C.

Давление паров: 7,2 x 10^-4 МПа (25 °C). Плотность 1,38 (20 °C).

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log P = 2,96 (pH 7,0 - 7,2).

Растворимость в воде 4,64 г/дм³ (pH 6, 20 °C); в органических растворителях (г/дм³, 25 °C): в ацетоне 160 - 200, ацетонитриле 40 - 50, метаноле 40 - 50, дихлорметане 200 - 250.

Устойчив в водном растворе при отсутствии света при 50 °C (pH 4,7 и 9) в течение 5 дней, при 25 °C (pH 5,7 и 9) - в течение 30 дней.

В почве период полураспада DT₅₀ - от 108 дней до 1 года.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая оральная токсичность для крыс LD₅₀ > 5 000 мг/кг, острая дермальная токсичность для крыс LD₅₀ > 2 000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность для крыс LC₅₀ (4 ч) > 6,7 мг/дм³. Не мутаген, не онкоген для крыс и мышей, не тератоген для крыс.

Область применения. Высокоэффективный контактный фунгицид длительного действия, применяется для борьбы с комплексом болезней овощных, масличных и зернобобовых культур.

Гигиенические нормативы. ВМДУ боскалида для импортируемой продукции в овощах со съедобными корнями - 2,0 мг/кг, в горохе - 3,0 мг/кг, в семенах масличных культур - 1,0 мг/кг.

МДУ для зерна кукурузы, бобов сои и масла не установлены.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Методика основана на определении боскалида методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием электронно-захватного детектора после экстракции из образцов водно-органическим растворителем, очистки экстракта на патронах для твердофазной экстракции (ТФЭ).

Идентификация боскалида проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005-88, ГОСТ 12.1.007-76). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004-90.

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением" (утв. Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы в области газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 13634-90 "Кукуруза. Требования при заготовках и поставках" и с ГОСТ 8808-2000 "Масло кукурузное. ТУ". Отбор проб бобов сои для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

Зерно кукурузы и бобы сои хранят в полотняных мешочках при комнатной температуре. Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб измельченного зерна методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше 40 °C или холодным отжимом бобов сои с помощью лабораторного пресса. Пробы масла хранят при 4 - 6 °C в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре не более 30 суток.

Отбор проб свеклы проводится в соответствии с ГОСТ 1722-85 "Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая". Для длительного хранения аналитические пробы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C и хранят в герметично закрытой полиэтиленовой таре.

Отбор проб зерна гороха проводят в соответствии с ГОСТ 28674-90 "Горох. Требования по заготовке и поставке". Для длительного хранения зерно гороха подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы гороха доводят до стандартной влажности и измельчают.

Капиллярную и/или насадочную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C до установления стабильной нулевой линии.

Для экстракции боскалида из матрицы используется раствор ацетон:вода = 8:2.

В плоскодонную колбу на 250 см³ вносят 80 см³ ацетона и 20 см² дистиллированной воды, раствор перемешивают.

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см³ растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 см³ и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей проводят в соответствии с типовыми методиками.

8.4.1. Основной раствор с концентрацией 100 мкг/см³: точную навеску боскалида (10 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки тем же растворителем.

8.4.2. Раствор с концентрацией боскалида 10 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ вносят 1 см³ основного раствора и доводят объем до метки ацетоном.

Этот раствор используют для проверки хроматографического поведения боскалида на патроне.

Градуировочные растворы боскалида с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления основного раствора по объему, используя гексан.

8.4.3. Раствор N 1 с концентрацией боскалида 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 1 см³ основного раствора и доводят объем до метки гексаном.

8.4.4. Раствор N 2 с концентрацией боскалида 0,5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5 см³ раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.5. Раствор N 3 с концентрацией боскалида 0,2 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.6. Раствор N 4 с концентрацией боскалида 0,1 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение 14 дней.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют основной раствор боскалида, разбавленный гексаном до соответствующей концентрации.

Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации боскалида в градуировочном растворе (мкг/см³).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

C - аттестованное значение массовой концентрации боскалида в градуировочном растворе;

C_к - результат контрольного измерения массовой концентрации боскалида в градуировочном растворе;

- норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( при P = 0,95).

Патроны для ТФЭ непосредственно перед употреблением промывают последовательно 5 см³ ацетона и 10 см³ дистиллированной воды, после чего они готовы к работе.

В круглодонную колбу емкостью 10 см³ отбирают 1 см³ раствора боскалида с концентрацией 10 мкг/см³. Отдувают растворитель током азота. Остаток растворяют в 5 см³ воды и переносят на подготовленный патрон. Колбу обмывают 2 см³ воды и смыв тоже переносят на патрон. Боскалид элюируют 10 см³ хлористого метилена. Элюаты от нанесения и промывки собирают фракциями по 2 см³. Из полученного раствора удаляют хлористый метилен током азота до сухого остатка, который растворяют в 0,1 см³ ацетона, затем в 0,9 см³ гексана и 1 мм³ полученного раствора вводят в хроматограф. Фракции, содержащие боскалид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.

Примечание. Проверку хроматографического поведения боскалида следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

Анализируемый объект измельчают, берут навеску (10,0 +/- 0,1) г, помещают в коническую колбу на 250 см³, заливают 50 см³ водного ацетона (8:2 по объему) и экстрагируют боскалид в ультразвуковой бане в течение 10 мин; экстракцию повторяют еще раз 30 см³ экстрагента. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр средней плотности, фильтр обмывают 10 см³ водного ацетона. Объединенный фильтрат упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до водного остатка.

Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.

Навеску масла (10,0 +/- 0,1) г растворяют в 40 см³ ацетона в плоскодонной колбе объемом 100 см³, добавляют 10 см³ воды и помещают в ультразвуковую ванну на 5 мин. Затем экстракт фильтруют через двойной бумажный фильтр средней плотности, смоченный водой, в круглодонную колбу на 100 см³. Водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до полного удаления ацетона.

Полученный водный раствор помещают на 30 мин в холодильник (4 - 6 °C), после чего фильтруют через предварительно смоченный водой бумажный фильтр в колбу на 50 см³.

Фильтр промывают 10 см³ воды. Полученные растворы объединяют и далее очистку проводят на патроне для ТФЭ по п. 9.3.

Водные растворы, полученные по п. 9.1 и 9.2, пропускают через кондиционированные (по п. 8.5) патроны со скоростью не более 1 - 2 см³/мин. Патрон подсушивают током азота и элюируют боскалид 5 см³ хлористого метилена. Из полученного раствора удаляют хлористый метилен током азота до сухого остатка, который растворяют в 0,1 см³ ацетона, затем в 0,9 см³ гексана и 1 мм³ полученного раствора вводят в хроматограф.

Газовый хроматограф с электронно-захватным детектором и кварцевой капиллярной колонкой длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с толщиной слоя неподвижной фазы (35% дифенилсилоксана + 65% диметилсилоксана) - 0,25 мкм.

Температура колонки программируется от 190 °C (1 мин) до 300 °C (4 мин) со скоростью 25 °C/мин, температура испарителя 300 °C, детектора 350 °C.

Расход газа-носителя (азот) через колонку 1,067 см³/мин (в режиме постоянного потока), поддув в детектор 20 см³/мин. Деление потока 1:20. Объем вводимой пробы 1 мм³.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание боскалида в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

H₁ - площадь пика боскалида в стандартном растворе, мв·с;

H₂ - площадь пика боскалида в анализируемой пробе, мв·с;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

P - навеска анализируемого образца, г;

C - концентрация боскалида в стандартном растворе, мкг/см³.

Содержание остаточных количеств боскалида в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор боскалида 1 мкг/см³, разбавляют гексаном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее нижней границы определения" (например: менее 0,01, где 0,01 мг/кг - предел определения боскалида в зерне гороха).

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

, - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры K_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁ и X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.