"МУК 4.1.3205-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глюфосината аммония и его метаболита в клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 30.07.2014)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России (В.А. Калинин, Т.С. Калинина).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 26 июня 2014 г. N 1).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 июля 2014 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 01.00282-2008/0167.27.05.13 от 27.05.2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств глюфосината аммония и его метаболита, 3-метилфосфино-пропионовой кислоты, в клубнях картофеля в диапазоне 0,25 - 2,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: глюфосинат аммония (I).

Название действующего вещества по ИЮПАК: Аммония DL-гомоаланин-4-ил(метил)фосфинат (I).

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₅H₁₅N₂O₄P.

Молекулярная масса: 198,2.

Агрегатное состояние: бесцветный кристаллический порошок со слабым специфическим запахом.

Температура плавления: 215 °C.

Давление паров (при 20 °C): более 0,1 мПа.

Коэффициент распределения октанол/вода: K_ow log P < 0,1.

Растворимость в воде (г/дм³, при 22 °C): 1 370.

Растворимость (г/дм³, при 20 °C): ацетон - 0,16, этанол - 0,65, этилацетат, толуол - 0,14, н-гексан - 0,2.

Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в умеренно кислых и щелочных средах.

Достаточно быстро разрушается в воде и почве: DT₅₀ в воде и почве - 3 - 20 дней.

Краткая токсикологическая характеристика. Глюфосинат аммония относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД₅₀ для крыс - от 1 620 до 2 000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД₅₀ для крыс более 4 000 мг/кг), но к опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 ч) от 1 260 до 2 600 мг/м³).

Глюфосинат аммония не обладает тератогенным, канцерогенным и мутагенным действием. Малотоксичен для рыб, водорослей, дафний, дождевых червей, пчел, птиц и диких животных.

Область применения. Глюфосинат аммония (I) - десикант и неселективный контактный гербицид с ограниченной системностью, передвигающийся только внутри обработанных листьев. В процессе поступления в растение вещество диссоциирует и в клетках присутствует только глюфосинат свободная кислота (II). Гербицид используется для уничтожения однолетних и многолетних широколистных и злаковых сорняков в парах, посадках плодовых и цитрусовых культур, ягодных кустарниках и виноградниках путем направленного опрыскивания в период активного роста сорных растений, а также на овощных культурах при довсходовом применении препарата.

Глюфосинат аммония применяется для десикации ботвы картофеля, подсолнечника, клещевины, люцерны и сеникации яровой пшеницы. Используется в России в качестве десиканта на посевах подсолнечника, рапса, клещевины, льна-долгунца, люцерны и клевера лугового (семенные посевы) при норме расхода от 0,225 до 0,45 кг/га (по д.в).

Глюфосинат аммония в воде и растениях превращается в глюфосинат свободную кислоту (II), которая подвергается разрушению, результатом чего является образование токсикологически значимого метаболита - 3-метилфосфино-пропионовой кислоты (III).

DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфиновая кислота.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₅H₁₅NO₄P.

Молекулярная масса: 181,1.

3-метилфосфино-пропионовая кислота.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₄H₉O₄P.

Молекулярная масса: 152,1.

В России установлены следующие гигиенические нормативы для глюфосината аммония: ДСД - 0,02 мг/кг массы человека; МДУ в продукции (мг/кг): плодовые семечковые и косточковые, ягоды и другие мелкие фрукты (кроме смородины), цитрусовые, виноград, морковь - 0,2; картофель - 0,5; подсолнечник (семена), рапс (зерно) - 5,0; гречиха, просо, зерно хлебных злаков - 0,4; растительные масла (кроме нерафинированных рапсового и подсолнечного масла) - 0,4; горох - 3,0; соя (бобы), фасоль - 2,0.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении глюфосината аммония и его метаболита 3-метилфосфино-пропионовой кислоты по их дериватам (IV и V соответственно) методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ из образцов водой, очистки экстрактов на концентрирующих патронах N 2, дериватизации веществ с помощью триметилортоацетата в кислой среде и последующей очистки полученных дериватов на концентрирующих патронах N 1.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора условий дериватизации анализируемых веществ, подбора капиллярной колонки и условий программирования ее температуры.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-91.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов N 1 и 2 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения веществ на концентрирующих патронах N 1 и 2, установление градуировочной характеристики.

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцово-кислый калий из расчета 100 мг/дм³. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Метанол, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный углекислый калий из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем метанол фильтруют через фильтр "красная лента" в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Метанол перегоняют при температуре 64,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 64,7 °C, отбрасывают.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ добавляют 500 см³ деионизированной воды и 10 см³ водного аммиака (содержит 28 - 30% NH₃), перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

В мерную колбу на 500 см³ переносят 0,2 г гидроксида натрия, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

В мерную колбу объемом 1 000 см³ помещают 500 см³ очищенной воды, прибавляют 400 см³ муравьиной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией деривата глюфосината аммония (IV) 100 мкг/см³ (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 13,9 мг метил-4-(метоксиметил)-фосфинил-2-ацетамидобутирата (IV, дериват глюфосината аммония), растворяют в 40 - 50 см³ метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор N 1 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией деривата метаболита глюфосината аммония (V) 100 мкг/см³ (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 мг метил-3-(метоксиметил)-фосфинил-пропионата (V, дериват метаболита), растворяют в 40 - 50 см³ метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор N 2 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см³ (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 10 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 10 см³ и помещают в ту же колбу объемом 100 см³, доводят объем до метки метилацетатом. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 3 хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 2,0 мкг/см³ (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 1,0 мкг/см³ (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,4 мкг/см³ (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,2 мкг/см³ (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.1. Стандартный раствор A с концентрацией глюфосината аммония 1 мг/см³.

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают 50,45 мг глюфосината аммония, добавляют 30 - 35 см³ 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор A хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.2.3.2. Стандартный раствор B с концентрацией 3-метилфосфино-пропионовой кислоты 1 мг/см³.

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают 42 мг 3-метилфосфино-пропионовой кислоты, добавляют 30 - 35 см³ 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор B хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.2.3.3. Стандартный раствор C с концентрацией глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора A отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Из стандартного раствора B отбирают пипеткой 1 см³ и помещают в ту же колбу объемом 100 см³, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор C используется для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы и хранится в холодильнике не более одного месяца.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации дериватов глюфосината аммония и его метаболита в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2; 0,4; 1,0; 2,0 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Из стандартного раствора C (п. 7.2.3.3), содержащего по 10 мкг/см³ глюфосината аммония и его метаболита, отбирают 0,5 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

К сухому остатку в концентраторе приливают 3 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают содержимое и помещают, концентратор на 1 мин в ультразвуковую ванну. Затем в колбу добавляют 12 см³ триметилортоацетата и снова помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч. К охлажденной реакционной смеси добавляют три порции по 15 см³ каждая толуола и каждый раз выпаривают содержимое на ротационном вакуумном испарителе (для полного удаления реакционной смеси) при температуре не выше 40 °C до объема 1 - 2 см³. Содержимое концентратора переносят в мерную пробирку и доводят объем до 4 см³ толуолом. Пробу возвращают в концентратор объемом 100 см³, добавляют 4 см³ метилацетата, перемешивают содержимое и помещают концентратор в ультразвуковую ванну на 1 мин. Затем 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Примечание: При проведении дериватизации посуда и реактивы должны быть сухими.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон N 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см³ 0,01 М раствора гидроокиси натрия, 10 см³ воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

Из стандартного раствора C (п. 7.2.3.3), содержащего 10 мкг/см³, отбирают 0,5 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 20 см³ воды, тщательно обмывая стенки концентратора, выдерживают 1 - 2 мин в ультразвуковой ванне и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C. Патрон промывают четырьмя-пятью порциями по 10 см³ каждая 40%-го водного раствора муравьиной кислоты. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C.

Патрон промывают 20 см³ воды, элюат отбрасывают. Затем патрон промывают четырьмя-пятью порциями по 10 см³ каждая 0,015 М раствора водного аммиака. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C.

Пробы подвергают дериватизации (п. 7.4) и анализируют на содержание дериватов глюфосината аммония и метаболита по п. 9.2.

Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах N 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон N 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см³ смеси метилацетата с толуолом в соотношении 1:1, элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

Из стандартного раствора N 3 (п. 7.2.2.3), содержащего 10 мкг/см³, отбирают 0,5 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 4 см³ толуола, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 см³ метилацетата, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³. Промывают патрон последовательно 5 см³ метилацетата, затем четырьмя-пятью порциями по 5 см³ каждая смеси метилацетата с метанолом в соотношении 1:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см³, упаривают до объема 0,5 - 1 см³ на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.

Содержимое концентраторов переносят в мерную пробирку. Концентратор обмывают двумя порциями по 1,5 см³ метилацетата, смывы объединяют в пробирке. Доводят объем в пробирке до 5 см³ и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах N 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 27853-88 "Овощи соленые и квашеные, плоды и ягоды моченые. Приемка, отбор проб", ГОСТ 13341-77 "Свежие и свежемороженые овощи, картофель, бахчевые, фрукты, ягоды, грибы. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 7176-85 "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. Технические условия".

Пробы клубней картофеля хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

Образец измельченных клубней картофеля массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, приливают 50 см³ дистиллированной воды и помещают на 15 мин на аппарат для встряхивания проб. По окончании экстракции пробу центрифугируют в течение 10 мин на скорости 3 000 оборотов в минуту. Экстракт фильтруют через фильтр низкой плотности в коническую колбу объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще один раз, используя 50 см³ дистиллированной воды и помещая на 15 мин на аппарат для встряхивания проб, центрифугируют и фильтруют в ту же коническую колбу.

Из экстракта, полученного по п. 9.1.1, отбирают аликвоту объемом 20 см³, наносят на подготовленный концентрирующий патрон N 2.

Метаболит глюфосината аммония элюируют с патрона 40 см³ 40%-го водного раствора муравьиной кислоты. Элюат собирают в концентратор объемом 250 см³.

Патрон промывают 20 см³ воды, элюат отбрасывают. Элюируют глюфосинат аммония 40 см³ 0,015 М раствора водного аммиака, элюат объединяют с предыдущим в тот же концентратор объемом 100 см³. Объединенные элюаты выпаривают досуха при температуре 55 - 60 °C. Для удаления остатков воды в концентратор добавляют 5 - 10 мл этилацетата.

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.2, приливают 3 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают содержимое и проводят дериватизацию как указано в п. 7.4.

Раствор, полученный в п. 9.1.3, наносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон N 1, элюат отбрасывают. Патрон промывают 5 см³ метилацетата, элюат отбрасывают.

Дериваты глюфосината аммония и его метаболита элюируют с патрона 15 см³ смеси метилацетата с метанолом в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают до объема 0,5 - 1,0 см³ на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.

Содержимое концентратора переносят в мерную пробирку. Концентратор обмывают двумя порциями по 1,5 см³ метилацетата, смывы объединяют в пробирке. Доводят объем в пробирке до 5 см³ и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф газовый с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору в Паратион-метиле 3 x 10^-14 г/см³ и снабженный приспособлениями для капиллярной колонки;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 15 м, с неподвижной фазой, содержащей 50% фенила и 50% метилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 130 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки по 25 °C в минуту до 270 °C, выдержка 5 мин. Температура испарителя - 230 °C, детектора - 300 °C.

Газ 1 - гелий (газ-носитель), регулятор расхода гелия - РРГ-10; давление на входе - 80 кПа, линейная скорость - 34,352 см/с, давление на выходе - 101,3 кПа; поток через колонку - 1,756 см³/мин; мертвое время - 1,46 мин.

Газ 2 - гелий (сброс пробы), регулятор расхода гелия - РРГ-11, режим - сплитлесс, расход во время анализа - 10 см³/мин, деление потока - 1:30, начало сброса 1 мин, длительность сброса - 2 мин.

Газ 4 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 25 см³/мин.

Газ 5 - водород, расход во время анализа - 11,5 см³/мин.

Газ 6 - воздух, расход - 200 см³/мин.

Продувка детектора и испарителя азотом после анализа - по 35 см³/мин в течение 3 мин при температуре колонки 270 °C.

Время удерживания: первым с колонки выходит дериват метаболита (V), а затем дериват глюфосината аммония (IV).

Объем вводимой пробы: 1 мм³.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,2 - 2,0 нг.

Содержание глюфосината аммония или его метаболита в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота в пробах клубней картофеля по пикам дериватов рассчитывают отдельно по формуле:

X - содержание глюфосината аммония или его метаболита в пробе, мг/кг;

S_ст - высота (площадь) пика стандартов дериватов глюфосината аммония или его метаболита, мВ;

S_пр - высота (площадь) пика образца, мВ;

A - концентрация стандартных растворов дериватов глюфосината аммония или его метаболита, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³);

P - содержание дериватов глюфосината аммония или его метаболита в аналитическом стандарте, %.

Общее содержание глюфосината аммония определяют путем простого суммирования полученных результатов.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм³;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,25 мг/кг". <*>

--------------------------------

<*> - 0,25 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для дериватов глюфосината аммония и его метаболита проводят при смене основных градуировочных растворов N 1 и 2 каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов N 3 - каждые 3 месяца, при смене основных градуировочных растворов N 4, 5, 6 и 7 - каждый месяц, а также в начале и окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание дериватов глюфосината аммония и его метаболита в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,2 до 2,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

для глюфосината аммония и 2,90 - для его метаболита;

X - концентрация глюфосината аммония и его метаболита (по дериватам) контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочных растворов дериватов глюфосината аммония и его метаболита в метилацетате, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

10,38 или 2,90 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 10,38% (или 2,90%), делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов дериватов глюфосината аммония и его метаболита, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

, где

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.