"МУК 4.1.2686-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Бета-цифлутрина в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Разработаны Всероссийским НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Название вещества по ИСО: Бета-цифлутрин.

Название вещества по ИЮПАК: (RS)-альфа-циано-4-фтор-3-феноксибензил(1RS, 3RS; 1RS, 3SR)-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилцикло-пропанкарбоксилат.

Структурная формула (не приводится).

В биологически активных почвах в аэробных условиях Бета-цифлутрин быстро разрушается, при этом само вещество и его метаболиты относительно слабо передвигаются по почвенному профилю.

Краткая гигиеническая характеристика

Область применения

Бета-цифлутрин - инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отряда жесткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых и овощных культур, кукурузы, хлопчатника, сахарной свеклы, технических и плодовых культур.

Применяется в России в качестве инсектицида на посевах зерновых колосовых культур, гороха, рапса, пастбищных трав, в посадках капусты и картофеля, в яблоневых садах при норме расхода 10 - 15 г д.в./га, а также используется в качестве составного компонента комбинированных протравителей.

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов.

Метод основан на экстракции Бета-цифлутрина из растительного материала водным раствором ацетона, очистке экстрактов, содержащих Бета-цифлутрин, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с флоризилом, с последующим измерением содержания Бета-цифлутрина в очищенных экстрактах методом капиллярной газожидкостной хроматографии с электронозахватным детектором и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

Примечание: Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 4.

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К подготовке проб допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия

Процессы приготовления растворов и подготовку проб к анализу проводят в следующих условиях:

- температура воздуха (20 +/- 5) °C,

- атмосферное давление (84 - 106) кПа,

- относительная влажность воздуха не более 80%.

7.2. Условия хроматографического анализа

Температура термостата колонки программированная: от 150 °C (2 мин.) со скоростью 25°/мин. до 260 °C (0 мин.); со скоростью 5°/мин. до 275 °C (15 мин.).

Температура испарителя - 270 °C, детектора - 320 °C.

Расход газов: газа-носителя (азот) - 2,1 куб. см/мин.; поддувочного газа через детектор - 25 куб. см/мин.

Деление потока: 1:1,8.

Время удерживания Бета-цифлутрина: 13 мин. 30 с (+/- 2)%.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Минимально детектируемое количество Бета-цифлутрина: 0,01 нг.

Линейный диапазон детектирования: (0,01 - 0,25) нг.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа, подготовка колонки с флоризилом.

8.1.1. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

8.1.2. Очистка ацетона

8.1.3. Очистка этилацетата

Приготовление водного раствора карбоната натрия с массовой долей 5%.

Для этого навеску (2,5 +/- 0,1) г карбоната натрия в конической колбе растворяют в (200 - 250) куб. см дистиллированной воды, раствор переносят в мерную колбу вместимостью 500 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора - 1 неделя.

Этилацетат промывают последовательно водным раствором карбоната натрия с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

8.1.4. Очистка флоризила

Флоризил встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Сорбент на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °C в течение 3 часов.

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм помещают тампон из стекловаты и затем в нее выливают суспензию 5 г флоризила в 10 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего слоя сорбента и помещают на него слой безводного сернокислого натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 куб. см гексана, после чего она готова к работе.

При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания Бета-цифлутрина из колонки с флоризилом.

В стакан вместимостью 50 куб. см помещают 1 куб. см градуировочного раствора Бета-цифлутрина в гексане с массовой концентрацией 1 мкг/куб. см, добавляют 3 куб. см гексана, перемешивают содержимое и наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по 8.2. Промывают колонку 30 куб. см гексана и 10 куб. см смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C досуха, остатки растворяют в 1 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., а затем хроматографируют. Условия хромтографирования - в соответствии с 7.2.

По результатам обнаружения Бета-цифлутрина в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), необходимый для полного вымывания инсектицида с колонки.

Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °C и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов.

8.5.1. Приготовление исходного раствора Бета-цифлутрина для градуировки с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0002) г Бета-цифлутрина, растворяют в (40 - 50) куб. см гексана, доводят объем раствора этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °C. Срок хранения не более 3-х месяцев.

8.5.2. Приготовление градуировочного раствора Бета-цифлутрина с массовой концентрацией 1 мкг/куб. см (раствор N 1)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного градуировочного раствора Бета-цифлутрина с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см, разбавляют гексаном до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2 - 5.

Для приготовления проб ботвы и корнеплодов с внесением при оценке полноты извлечения Бета-цифлутрина из исследуемых образцов используют ацетоновый раствор инсектицида с концентрацией 1 мкг/куб. см.

Градуировочный раствор N 1 и ацетоновый раствор Бета-цифлутрина хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °C. Срок хранения не более 1 месяца.

8.5.3. Приготовление градуировочных растворов Бета-цифлутрина с массовой концентрацией (0,01 - 0,1) мкг/куб. см (растворы N 2 - 5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 Бета-цифлутрина с массовой концентрацией 1 мкг/куб. см, доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают растворы N 2 - 5 с массовой концентрацией инсектицида 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ x с) от массовой концентрации Бета-цифлутрина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4-м градуировочным растворам (8.5.3).

В испаритель (инжектор) хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют при условиях 7.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ 17421-82 "Свекла сахарная для промышленной переработки. Требования при заготовках".

Пробы ботвы и корнеплодов сахарной свеклы хранят в холодильнике при температуре (0 - 4) °C не более суток; для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре (-18) °C до анализа. Перед проведением анализа ботву и корнеплоды измельчают ножницами, ножом или с помощью терки.

Приготовление водного раствора ацетона с объемной долей 70%

350 куб. см ацетона, измеренного мерным цилиндром вместимостью 500 куб. см, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора - 1 неделя.

Навеску измельченного растительного материала (ботва - 20 г, корнеплоды - 25 г) помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, приливают 100 куб. см водного раствора ацетона с объемной долей 70% и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см раствором водного ацетона с объемной долей 70%. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/5 часть экстракта корнеплодов (эквивалентна 5 г образца) и 1/10 часть экстракта ботвы (эквивалентна 2 г образца) переносят в делительные воронки вместимостью 100 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия

В коническую колбу вместимостью 200 куб. см вносят навеску хлорида натрия (50 +/- 2) г хлорида натрия, приливают (100 +/- 2) куб. см дистиллированной воды, перемешивают в течение 5 мин., полученный раствор фильтруют. Фильтрат является насыщенным раствором хлорида натрия. Срок годности раствора - 1 неделя.

К экстракту, полученному по 9.1 и помещенному в делительную воронку, прибавляют 15 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия и перемешивают. В воронку вносят 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз верхний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Экстракцию водной фазы повторяют еще два раза, используя 30 и 20 куб. см гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой безводного сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C и подвергают дополнительной очистке на колонке с флоризилом по 9.3.

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по 9.2, растворяют в 3 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и раствор наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по 8.2. Колбу обмывают 5 куб. см гексана, который также наносят на колонку. Промывают колонку 25 куб. см гексана и 10 куб. см смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Бета-цифлутрин элюируют с колонки 20 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Сухой остаток экстракта растворяют в 10 куб. см гексана и анализируют на содержание Бета-цифлутрина по 10.

Полнота извлечения Бета-цифлутрина при проведении всех операций подготовки пробы не менее 85%.

10.1. В инжектор хроматографа вводят 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (9.1 - 9.3), анализируют при условиях (7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждого образца ботвы и корнеплодов повторяют операции по (9.1 - 9.3), 10.1.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программу сбора и обработки хроматографической информации "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации Бета-цифлутрина в экстрактах, C, мкг/куб. см.

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (3):

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

11.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал Бета-цифлутрина, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,1 мкг/куб. см, разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания Бета-цифлутрина учитывают разбавление.

12.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 ("Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений"), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

ГНУ ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы.