"МУК 4.1.2984-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств римсульфурона в томатах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.03.2012)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 N 2).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации от 25.07.2011 N 01.5.04.015/01.00043/2011.

Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств римсульфурона в томатах в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: римсульфурон.

Структурная формула:

Название действующего вещества по ИЮПАК: 1-(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)-3-(этилсульфонил-2-пиридинсульфонил) мочевина.

Молекулярная масса: 431,4.

Эмпирическая формула: .

Химически чистое вещество представляет собой бесцветные кристаллы с температурой плавления 172 - 173 °C, давлением паров (25 °C).

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода (pH 5), - 1,47 (pH 7).

Растворимость в воде: при 25 °C < 10 мг/л; 7,3 г/л (буферный раствор, pH 7). Хорошо растворим в ацетонитриле, дихлорметане и хлороформе.

Гидролиз (25 °C), : 4,6 дня (pH 5), 7,2 дня (pH 7), 0,3 дня (pH 9).

Группа токсичности по ВОЗ - U; для крыс > 5000 мг/кг.

Область применения

Послевсходовый системный гербицид, эффективный в борьбе со злаковыми однолетними и многолетними сорняками. Используется для защиты кукурузы, картофеля и томатов.

Гигиенические нормативы для римсульфурона в России: МДУ для римсульфурона в томатах 0,05 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Методика основана на определении римсульфурона методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его экстракции из томатов с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и на патронах Диапак С16.

Идентификация римсульфурона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными характеристиками, но не ниже указанных.

3.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичной квалификацией, но не ниже указанной.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Примечание. Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже указанных.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку (SunFire C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 см3/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1. Приготовление 50%-го раствора ацетона: в мерную колбу емкостью 1 дм3 помещают 500 мл ацетона и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2.2. Приготовление 2М раствора ортофосфорной кислоты: 200 г 98%-й (или 225 г 87%-й) кристаллической помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в 600 см3 дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2.3. Приготовление 0,005М раствора ортофосфорной кислоты: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 2,5 см3 2М раствора и доводят объем до метки водой для ВЭЖХ.

7.2.4. Приготовление подвижной фазы: в мерную колбу вместимостью 1 дм3 помещают 400 см3 ацетонитрила и доводят объем до метки 0,005М раствором ортофосфорной кислоты.

7.2.5. Приготовление элюента: в колбе на 100 см3 смешивают 50 см3 ацетонитрила и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску римсульфурона (50 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят до метки тем же растворителем.

Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 недели, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения для внесения в матрицу используют ацетонитрильные растворы римсульфурона, которые готовят из основного стандартного раствора с концентрацией 0,5 мг/см3 методом последовательного разбавления ацетонитрилом.

7.4. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация римсульфурона в растворе) в хроматограф вводят по 20 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации римсульфурона в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

C - аттестованное значение массовой концентрации римсульфурона в градуировочном растворе;

- результат контрольного измерения массовой концентрации римсульфурона в градуировочном растворе;

- норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( при P = 0,95).

7.5. Подготовка патронов Диапак С16

Непосредственно перед употреблением через патрон последовательно пропускают по 2 см3 ацетонитрила и воды. Скорость потока не более 2 см3/мин.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", от 21.08.1979 N 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ 1725-85 "Томаты свежие. Требования при заготовках и поставках".

Пробы плодов томатов помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C и хранят в закрытой полиэтиленовой таре.

9.1. Определение римсульфурона в плодах томатов

В коническую колбу емкостью 250 см3 помещают (20 +/- 0,1) г измельченного образца и экстрагируют римсульфурон 50 см3 смеси ацетон-вода (50:50, по объему) на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют. Объединенный экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Объем водного остатка доводят до 100 см3 дистиллированной водой, помещают в делительную воронку объемом 250 см3 и промывают дважды гексаном порциями по 25 см3, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 - 3 мин и отбрасывая после расслоения верхний органический слой.

Водную фазу подкисляют 2М ортофосфорной кислотой до pH 3 и римсульфурон экстрагируют хлористым метиленом дважды по 50 см3, встряхивая воронку каждый раз по 2 - 3 мин. Верхний водный слой отбрасывают. Объединенную органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 см3 хлористого метилена. Полученный раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 см3 дистиллированной воды и количественно переносят в откондиционированный патрон (п. 7.5). Фильтрат отбрасывают. Римсульфурон элюируют 3 см3 смеси ацетонитрил-вода в соотношении 50:50, приготовленной по п. 7.2.5. Элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы и 20 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.

9.2. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы Waters с УФ-детектором (Waters 2487) или другой с аналогичными характеристиками. Рабочая длина волны 230 нм.

Предколонка Waters SunFire C18 (20 x 4,6) мм, 5 мкм (Waters, USA) для защиты аналитической колонки. Колонка SunFire C18 (250 x 4,6) мм, 5 мкм (Waters, USA). Температура колонки 30 °C. Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,005М раствор ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60. Скорость потока 1 см3/мин. Дозируемый объем 20 мм3. Линейный диапазон детектирования 0,05 - 1,0 мкг/см3.

Время удерживания римсульфурона (11,5 +/- 0,2) мин.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание римсульфурона X (мг/кг) вычисляют по формуле:

- площадь пика римсульфурона на хроматограмме испытуемого образца, (AU·c);

K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;

P - навеска анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения римсульфурона, приведенная в табл. 2, (%).

Содержание остаточных количеств римсульфурона в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор римсульфурона с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

, - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

при вероятности P = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,01 мг/кг <*>).

--------------------------------

<*> - 0,01 мг/кг - предел обнаружения римсульфурона в плод томатов.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры рассчитывают по формуле:

, , - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

, - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Долженко В.И., Цибульская И.А., Черменская Т.Д., Ковров Н.Г. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Россельхозакадемии, Санкт-Петербург).