"МУК 4.1.2922-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тефлутрина в луке репке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Тефлутрин - инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов. Он эффективно подавляет развитие комплекса почвенных вредителей (особенно из отрядов жесткокрылых, двукрылых и чешуекрылых) таких культур, как кукуруза, сахарная свекла, яровая пшеница, подсолнечник при норме расхода при почвенном внесении 12 - 150 г/га, при протравливании семян 20 - 40 г/100 кг семян.

Проходит регистрационные испытания в Российской Федерации в качестве инсектицида в посадках лука с нормой расхода до 225 г д.в./га и внесением препарата в борозду при посадке лука-севка.

Свидетельство об аттестации методики от 14.04.2011 N 0081.12.04-11.

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой концентрации тефлутрина в луке репке в диапазоне (0,02 - 0,20) мг/кг методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

Название вещества по ИСО: Тефлутрин.

Название вещества по ИЮПАК: 2,3,5,6-тетрафтор-4-метилбензил(Z)-(1RS,3RS)-3-(2-хлор-3,3,3-трифторпроп-1-енил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.

Структурная формула не приводится.

Растворимость (г/куб. дм) при 20 °C: ацетон, гексан, толуол, дихлорметан, этилацетат - более 500, метанол - 263, вода - 0,00002.

Вещество стабильно при хранении на воздухе и не гидролизуется при pH 5 - 7 и слабо гидролизуется при pH 9 (9,7% при 30-дневной экспозиции).

MRL тефлутрина в луке репке, установленный в странах ЕС, составляет 0,05 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий и проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Методика основана на экстракции тефлутрина из луковиц водным ацетоном, очистке экстракта, содержащего тефлутрин, от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак-диол, с последующим измерением содержания инсектицида в очищенном экстракте методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с электронозахватным детектором (ЭЗД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной калибровки. Идентификация вещества проводится по времени удерживания.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов материалов с техническими и метрологическими характеристиками, аналогичными приведенным в разделе 4.

5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, 12.1.005-88.

5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91, и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха (20 +/- 5) °C;

- атмосферное давление 84 - 106 кПа;

- относительная влажность воздуха не более 80%.

7.2. Условия хроматографического анализа

Температура термостата испарителя 200 °C.

Температура термостата детектора 300 °C.

Режим программирования температуры колонки:

- начальная температура 120 °C;

- изотермический режим при 120 °C - 2 мин.;

- скорость подъема температуры:

в диапазоне от 120 до 190 °C - 10 °C/мин.;

- изотермический режим при 190 °C - 8 мин.;

- скорость подъема температуры:

в диапазоне от 190 до 270 °C - 20 °C/мин.;

- изотермический режим при 270 °C - 5 мин.

Расход газов:

- газа-носителя (азот) 2,4 куб. см/мин.;

- поддувочного газа через детектор 25 куб. см/мин.

Деление потока: 1:4.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Время удерживания тефлутрина: (12,6 +/- 0,2) мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,005 - 0,10 нг.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующих патронов Диапак-диол.

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом. Срок хранения - 1 неделя.

В коническую колбу вместимостью 250 куб. см вносят навеску (50 +/- 2) г хлорида натрия, приливают 100 куб. см дистиллированной воды, перемешивают в течение 5 мин., полученный раствор фильтруют. Фильтрат является насыщенным раствором хлорида натрия. Срок годности раствора - 1 неделя.

Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 270 °C и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля в 15 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (85:15, по объему) и 10 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 куб. см смеси гексан-ацетон (1:1, по объему) и 6 куб. см гексана со скоростью 5 куб. см/мин. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания тефлутрина из колонки с силикагелем.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см градуировочного раствора N 1 тефлутрина с концентрацией 1 мкг/куб. см в гексане (п. 8.5.2), отдувают растворитель током азота, остаток растворяют в 3 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 8.2. Колонку промывают 30 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 25 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (85:15, по объему), отбирая последовательно по 5 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 °C. Сухие остатки растворяют в 1 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 минуту, и растворы хроматографируют в соответствии с п. 7.2.

По результатам обнаружения тефлутрина в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-диэтиловый эфир (85:15, по объему), необходимый для полного вымывания тефлутрина из колонки.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г тефлутрина, растворяют в 40 - 50 куб. см гексана, доводят объем раствора гексаном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят при температуре не выше минус 18 °C в течение 3 месяцев.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного градуировочного раствора тефлутрина с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 8.5.1), разбавляют гексаном до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.

При оценке полноты извлечения тефлутрина для внесения в образцы используют ацетоновые растворы с концентрацией 1 мкг/куб. см.

Градуировочный раствор N 1 и ацетоновый раствор тефлутрина хранят при температуре не выше минус 18 °C в течение месяца.

В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,5; 1,0; 2,5 и 5,0 куб. см градуировочного раствора N 1 тефлутрина с концентрацией 1 мкг/куб. см (п. 8.5.2), доводят объем раствора до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы N 2 - 5 с массовой концентрацией тефлутрина 0,005; 0,01; 0,025 и 0,05 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ x с) от концентрации тефлутрина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 градуировочным растворам (п. 8.5.3).

В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 8.5.3) и анализируют при условиях хроматографирования по п. 7.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости r. По полученным данным строят градуировочную характеристику.

Градуировочный график проверяют перед проведением измерения по анализу одного из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.1979 N 2051-79) и правилами, определенными ГОСТ 1723-86 "Лук репчатый свежий, заготовляемый и поставляемый. ТУ" и ГОСТ Р 51783-2001 "Лук репчатый свежий, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ".

Образцы луковиц хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более суток; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед проведением анализа луковицы измельчают.

Навеску измельченного растительного материала массой 20 г помешают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (80:20, по объему) и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода (80:20, по объему). Экстракт и промывную жидкость, объединенные в мерном цилиндре, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/10 его часть (эквивалентную 1 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку приливают 10 куб. см дистиллированной воды и 10 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия и раствор перемешивают. К водному раствору приливают 10 куб. см гексана и содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний гексановый слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 10 куб. см гексана. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.1, растворяют в 2 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 8.3. Колбу ополаскивают 3 куб. см гексана, которые также наносят на колонку. Колонку промывают 25 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Тефлутрин элюируют с колонки 15 куб. см смеси гексан-диэтиловый эфир (85:15, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 °C. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.3.

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 2 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на концентрирующий патрон Диапак-диол, подготовленный по п. 8.3. Колбу обмывают 3 куб. см гексана, которые также наносят на патрон, и собирают элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 °C. Сухой остаток экстракта лука растворяют в 4 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание тефлутрина по п. 10.

10.1. В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (пп. 9.1 - 9.3), анализируют при условиях п. 7.2 и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2. Для каждого образца лука повторяют операции по пп. 9.1 - 9.3, 10.1.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации "Хроматэк Аналитик" версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание тефлутрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если полученный результат измерений ниже нижней границы диапазона измерений, то результат анализа представляют в виде:

содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения"

"массовая доля тефлутрина в луке менее 0,02 мг/кг".

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал тефлутрина, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,05 мкг/куб. см, разбавляют и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания тефлутрина учитывают разбавление.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии Россельхозакадемии.