"МУК 4.1.2672-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств боскалида в яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках, луке-репке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены имени Ф.Ф. Эрисмана.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 02.08.2010.

4. Вводятся в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств боскалида в яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках, луке-репке в диапазоне 0,5 - 5,0 мг/кг.

2-хлор-N-(4-хлорбифенил-2-ил)никотинамид (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Область применения:

Боскалид - высокоэффективный контактный фунгицид длительного действия, применяемый для борьбы против различных возбудителей болезней.

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в таблице 2.

Методика основана на определении боскалида с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД) после экстракции из анализируемых проб смесью ацетон - вода, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Возможно использование реактивов более высокой квалификации, которые не требуют выполнения п. 7.1 (очистка растворителей).

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-88, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем, проверка хроматографического поведения боскалида на колонке.

7.1.1. Очистка гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над безводным карбонатом калия.

7.1.2. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.3. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.4. Очистка ацетона

7.2.1. Исходный раствор боскалида для градуировки (концентрация 250 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,025 г боскалида, растворяют в 50 - 60 куб. см этилацетата, доводят этилацетатом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

7.2.2. Раствор N 1 боскалида для градуировки (концентрация 25 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора боскалида с концентрацией 250 мкг/куб. см (п. 7.2.1), разбавляют этилацетатом до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

7.2.3. Рабочие растворы N 2 - 5 боскалида для градуировки (концентрация 0,25 - 2,5 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 1,0; 2,0; 4,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 25 мкг/куб. см (пп. 7.2.2), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрациями боскалида 0,25; 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/куб. см.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 14-ти дней.

7.2.4. Рабочий раствор N 6 боскалида для внесения (концентрация 2,5 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора боскалида с концентрацией 250 мкг/куб. см (пп. 7.2.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 6 с концентрацией боскалида 2,5 мкг/куб. см.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 14-ти дней.

Раствор N 6 используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества из проб методом "внесено-найдено".

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика (мВ х сек.) от концентрации боскалида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков (мВ х с) боскалида.

Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более чем на 10% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию: 4 г силикагеля в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия массой 1 г. Колонка готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см раствора N 1 для градуировки с концентрацией боскалида 25 мкг/куб. см (пп. 7.2.2), добавляют 0,4 куб. см этилацетата, затем 5 куб. см гексана, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают дважды гексаном по 2,5 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 20 куб. см гексана, 20 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему), элюаты отбрасывают.

Затем колонку промывают 30 куб. см смеси гексан - этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см этилацетата, анализируют по п. 9.5.

Фракции, содержащие боскалид, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание: Проверку хроматографического поведения боскалида следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями: лук - ГОСТ 1723-86 "Лук репчатый. Технические условия", ГОСТ 27166-86 "Лук репчатый свежий реализуемый. Технические условия", виноград - ГОСТ 25896-83 "Виноград свежий столовый. Технические условия", ГОСТ 28472-90 "Виноград свежий ручной уборки для консервирования. Требования при заготовках и поставках", соки - ГОСТ 26313-84 "Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб", яблоки - ГОСТ 16270-70 "Яблоки свежие ранних сроков созревания. Технические условия", ГОСТ 21122-75 "Яблоки свежие поздних сроков созревания. Технические условия", ГОСТ "Яблоки свежие для промышленной переработки. Технические условия" и Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы яблок, ягод винограда и лука-репки хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Пробы яблочного и виноградного сока анализируют в день изготовления.

Перед анализом образцы измельчают на гомогенизаторе.

9.1.1. Яблоки, ягоды винограда, лук-репка

Образец массой 20 г помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, вносят 100 куб. см смеси ацетон - вода (8:2, по объему), гомогенизируют в течение 3 минут, затем помещают на встряхиватель на 30 минут. Полученный экстракт (надосадочная жидкость) осторожно декантируют, фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом. Осадок на фильтре возвращают в колбу и повторяют экстракцию дополнительной порцией смеси ацетон - вода (8:2, по объему) объемом 60 куб. см, выдерживая на встряхивателе 5 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр "красная лента", осадок на фильтре промывают 20 куб. см этой же смеси, объединенный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 куб. см.

Доводят общий объем раствора в цилиндре до 200 куб. см смесью ацетон - вода (8:2, по объему), перемешивают. Аликвоту раствора объемом 20 куб. см (соответствующую 2 г анализируемого образца) переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см, добавляют 20 куб. см дистиллированной воды, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до водного остатка (около 20 куб. см) и подвергают очистке по п. 9.2.

9.1.2. Яблочный, виноградный соки

К образцу сока массой 20 г в конической колбе (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 куб. см добавляют 100 куб. см смеси ацетон - вода (8:2, по объему), интенсивно встряхивают в течение 5 мин., помещают в холодильник (4 °С) на 1 час. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом, дважды промывая остаток на фильтре 20 куб. см смеси ацетон - вода (8:2, по объему). Полученный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 куб. см.

Доводят общий объем раствора в цилиндре до 200 куб. см смесью ацетон - вода (8:2, по объему), перемешивают. Аликвоту раствора объемом 20 куб. см (соответствующую 2 г анализируемого образца) переносят в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 куб. см, добавляют 20 куб. см дистиллированной воды, концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С до водного остатка (около 20 куб. см) и подвергают очистке по п. 9.2.

Водный остаток, полученный по пп. 9.1.1 или 9.1.2, переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см. Колбу ополаскивают 30 куб. см ацетонитрила, который также переносят в делительную воронку. Вносят в воронку 30 куб. см гексана, 10 куб. см 5%-ного водного раствора хлористого натрия, интенсивно встряхивают в течение 5-ти мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют и отбрасывают. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и операцию промывки встряхиванием ее в течение 5-ти мин. с гексаном порциями по 30 куб. см повторяют еще дважды. Верхние гексановые слои отбрасывают. Нижнюю водную фазу вновь возвращают в делительную воронку, вносят 30 куб. см дихлорметана, интенсивно встряхивают 5 мин. После разделения фаз нижний органический слой отделяют, фильтруя через безводный сульфат натрия (5 г), помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см. Операцию экстракции повторяют новой порцией дихлорметана объемом 30 куб. см, встряхивая в течение 5 мин. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

Остаток, полученный по п. 9.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 0,5 куб. см этилацетата, помещая на ультразвуковую баню на 1 мин., добавляют 5 куб. см гексана, перемешивают. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают дважды гексаном порциями по 2,5 куб. см, которые также наносят на колонку, скорость прохождения растворителей через колонку 1 - 2 капли в сек. Промывают колонку последовательно 20 куб. см гексана, 20 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему), элюаты отбрасывают.

Боскалид элюируют с колонки 30 куб. см смеси гексан - этилацетат (1:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 4 куб. см этилацетата и анализируют на содержание боскалида в условиях хроматографирования по п. 9.4.

Газовый хроматограф "Кристалл-2000М", снабженный электронозахватным детектором.

Колонка капиллярная HP-5ms длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 200 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 260 °С, выдержка 4 мин., затем нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 280 °С, выдержка 8 мин.

Скорость газа 1 (азот): 41,5 см/сек., давление 167 кПа, поток 1,5 куб. см/мин.

Газ 2: деление потока 1:5; сброс 7,5 куб. см/мин.

Ориентировочное время выхода боскалида ~ 12,8 мин.

Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования: 0,25 - 2,5 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор боскалида с концентрацией 2,5 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом (не более чем в 50 раз).

Содержание боскалида в пробе яблок, ягод винограда, лука-репки, яблочного и виноградного сока (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где:

Х - содержание боскалида в пробе яблок, ягодах винограда, лука-репки, яблочного и виноградного сока, мг/кг;

А - концентрация боскалида, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г;

К - коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятый для анализа (равен 10).

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание боскалида в пробе яблок, ягод винограда, яблочном соке, виноградном соке, луке-репке менее 0,5 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,5 мг/кг - предел обнаружения боскалида в яблоках, ягодах винограда, яблочном и виноградном соках, луке-репке.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.