"МУК 4.1.2994-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств МЦПА в семенах и масле льна масличного методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.03.2012)

Свидетельство об аттестации МВИ от 25.11.2011 N 0106.25.11.11.

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств МЦПА в семенах и масле льна масличного в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

МЦПА

4-хлор-2-метилфеноксиуксусная кислота

Область применения препарата

МЦПА - гербицид, применяемый для борьбы с сорными растениями в посевах пшеницы, ржи, ячменя, овса, проса, сорго, риса, гороха, картофеля, клевера, луговых травах, сенокосных угодьях и пастбищах.

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

Методика основана на определении МЦПА с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронно-захватным детектором (ЭЗД) после экстракции из анализируемых проб семян и масла льна смесью ацетонитрил - вода - соляная кислота, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Газохроматографическому измерению предшествует стадия дериватизации вещества в бутиловый эфир.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Возможно использование реактивов более высокой квалификации, которые не требуют выполнения п. 7.1 (очистка).

Примечание. Допускается использование других вспомогательных средств измерений и устройств аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным, а также материалов, обеспечивающих нормативы точности при проведении измерений.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/кв. см), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов и раствора внесения, установление градуировочной характеристики.

7.1.1. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и безводным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.2. Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 куб. дм ацетонитрила - 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 куб. дм ацетонитрила - 10 г карбоната калия).

7.1.3. Гексан и дихлорметан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над карбонатом калия.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 50 г бикарбоната натрия и растворяют в 500 - 600 куб. см дистиллированной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 50 - 60 куб. см н-бутанола, осторожно вносят 2 куб. см концентрированной серной кислоты, доводят н-бутанолом до метки, перемешивают. Бутилирующую смесь хранят под тягой в течение месяца.

7.4.1. Смесь ацетонитрил - вода - соляная кислота (объемное соотношение 160:30:10). В мерную колбу вместимостью 200 куб. см помещают 30 куб. см дистиллированной воды и 10 куб. см концентрированной соляной кислоты, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

7.4.2. Смесь ацетонитрил - вода - соляная кислота (объемное соотношение 189:10:1). В мерную колбу вместимостью 200 куб. см помещают 10 куб. см дистиллированной воды и 1 куб. см концентрированной соляной кислоты, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

7.5.1. Исходный раствор МЦПА (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,0100 г МЦПА, доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике при 4 - 6 °C в течение 3 месяцев.

7.5.2. Раствор N 1 МЦПА для внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора МЦПА с концентрацией 100 мг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют ацетоном до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение месяца. Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроля качества результатов измерений методом добавок.

7.5.3. Исходный раствор бутилового эфира МЦПА для градуировки (концентрация МЦПА 10,0 мкг/куб. см). В круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 5 куб. см исходного раствора МЦПА с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), отдувают растворитель потоком теплого воздуха (помещая колбу на слабо подогретую водяную баню). В колбу с сухим остатком вносят 2 куб. см 2%-го раствора серной кислоты в н-бутаноле, плотно закрывают пробкой, укрепляемой фиксатором. Помещают в термостат, нагретый до 100 °C, выдерживают 1 ч. Далее колбу охлаждают до комнатной температуры, вносят 10 куб. см гексана и 20 - 25 куб. см дистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают. После полного разделения фаз верхнюю гексановую фракцию отделяют, отбирая с помощью пипетки 2,5 куб. см и перенося в мерную колбу вместимостью 25 куб. см, доводят гексаном до метки, перемешивают. Исходный раствор бутилового эфира МЦПА с концентрацией МЦПА 10,0 мкг/куб. см хранится в холодильнике не более 10 дней.

Растворы N 2 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора бутилового эфира МЦПА.

7.5.4. Рабочие растворы N 2 - 5 бутилового эфира МЦПА для градуировки (концентрация МЦПА 0,1 - 1,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1; 2; 5 и 10 куб. см исходного раствора бутилового эфира МЦПА с концентрацией МЦПА 10 мкг/куб. см (п. 7.5.3), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией МЦПА 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 10 дней.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика (мВ x с) от концентрации МЦПА в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 2 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков (мВ x с) бутилового эфира МЦПА.

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями: лен - ГОСТ 10582-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 10582-76 "Семена льна масличного. Промышленное сырье. Технические условия", ГОСТ 29142-91 "Семена масличных культур. Отбор проб"; масло - ГОСТ Р 52062-2003 "Масло растительное. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 5791-81 "Масло льняное техническое. Технические условия" и Унифицированных правил отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (от 21.08.1979 N 2051-79).

Семена подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в тканевых мешочках в сухом, защищенном от света месте при комнатной температуре не более 6 месяцев. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C. Перед анализом образцы семян измельчают.

Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в темноте.

9.1.1. Экстракция

Пробу семян льна массой 25 г помещают в коническую колбу на 250 - 300 куб. см, добавляют 60 куб. см смеси ацетонитрил - вода - соляная кислота (160:30:10, по объему) и помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.

Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента". В коническую колбу с пробой вносят новую порцию смеси ацетонитрил - вода - соляная кислота (160:30:10, по объему) объемом 30 куб. см и повторно экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 15 мин., затем раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтр дважды промывают смесью ацетонитрил - вода - соляная кислота (160:30:10, по объему) порциями по 10 куб. см.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в круглодонную колбу на 250 куб. см, упаривают до водного остатка (~ 15 - 20 куб. см) на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Водный экстракт переносят в делительную воронку на 250 куб. см, добавляют 90 - 100 куб. см воды, предварительно ополоснув ею колбу, в которой находится остаток, и подвергают очистке по п. 9.1.2.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по пп. 9.1.1 и 9.2.1, добавляют 40 куб. см дихлорметана, встряхивают воронку в течение 2 мин. и после полного разделения слоев нижний органический слой собирают в химический стакан на 200 - 250 куб. см. Процедуру переэкстракции повторяют дважды дихлорметаном порциями по 30 куб. см, после водный слой отбрасывают.

Объединенный дихлорметановый экстракт переносят в делительную воронку на 250 куб. см, добавляют 40 куб. см 5%-го водного раствора бикарбоната натрия, встряхивают воронку в течение 2 мин. и после полного разделения слоев верхний водный слой отделяют, собирая в химический стакан на 400 куб. см. Нижний дихлорметановый слой возвращают в делительную воронку, процедуру переэкстракции повторяют дважды 5%-м водным раствором бикарбоната натрия порциями по 40 куб. см, после дихлорметан отбрасывают.

Объединенный водный экстракт переносят в делительную воронку на 250 куб. см, добавляют 30 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Водный слой возвращают в воронку и повторяют процедуру очистки, используя новую порцию гексана (30 куб. см).

Водную фазу подкисляют концентрированной соляной кислотой до pH = 2, контролируя его значения по индикаторной бумаге (Осторожно, вспенивание!), и возвращают в делительную воронку на 250 куб. см, добавляют 40 куб. см дихлорметана, встряхивают в течение 2 мин. (Осторожно, необходимо дегазировать смесь, периодически открывая кран воронки в процессе встряхивания!). После полного разделения слоев нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу на 250 куб. см. Повторяют экстракцию дважды, используя по 40 куб. см дихлорметана.

Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C. Сухой остаток подвергают дериватизации по п. 9.3.

9.2.1. Экстракция

Образец масла массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 - 300 куб. см, растворяют в 50 куб. см гексана, переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, добавляют 40 куб. см смеси ацетонитрил - вода - соляная кислота (189:10:1, по объему). Воронку интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в химический стакан вместимостью 250 куб. см. Экстракцию повторяют дважды смесью ацетонитрил - вода - соляная кислота (189:10:1, по объему), порциями по 30 куб. см.

Объединенный экстракт переносят в круглодонную колбу на 250 куб. см, упаривают до водного остатка (~ 15 - 20 куб. см) на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C. Водный экстракт переносят в делительную воронку на 250 куб. см, добавляют 90 - 100 куб. см воды, предварительно ополоснув ею колбу, в которой находится остаток, и подвергают очистке по п. 9.1.2.

В колбу с сухим остатком вносят 2 куб. см 2%-го раствора серной кислоты в н-бутаноле, плотно закрывают пробкой, укрепляемой фиксатором. Помещают в термостат, нагретый до 100 °C, выдерживают 1 ч. Далее колбу охлаждают до комнатной температуры, вносят 5 куб. см гексана и 15 - 20 куб. см дистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают и выдерживают до полного разделения фаз. С помощью пипетки отбирают верхний гексановый слой, переносят в пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 5 - 10 куб. см, анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию МЦПА в хроматографируемом растворе.

Хроматограф газовый с электронно-захватным детектором.

Колонка капиллярная HP-5ms длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 150 °C, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 10 °/мин. до температуры 200 °C, выдержка 2 мин., затем нагрев колонки со скоростью 40 °/мин. до 280 °C, выдержка 4 мин.

Газ 1 (азот): давление 125,0 кПа, 34,101 см/с, поток 1,2 куб. см/мин.

Газ 2 (азот): деление потока 1:3; сброс 3,6 куб. см/мин.

Хроматографируемый объем - 2 куб. мм.

Ориентировочное время удерживания бутилового эфира МЦПА - 8,2 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,2 - 2,0 нг.

Содержание МЦПА в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где:

X - содержание МЦПА в пробе, мг/кг;

A - концентрация МЦПА, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика бутилового эфира МЦПА, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание МЦПА в пробе семян и масла льна менее 0,02 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения МЦПА в пробах семян и масла льна соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание МЦПА в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/куб. см.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где:

X - концентрация МЦПА в пробе при контрольном измерении, мкг/куб. см;

C - известная концентрация градуировочного раствора МЦПА, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/куб. см;

5 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 5%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тиабендазола, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.6.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

где:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

где:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R)

ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора.