"МУК 4.1.2938-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств бифентрина в капусте, зерне гороха, сои и соевом масле методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений Россельхозакадемии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в капусте, зерне гороха, сои и соевом масле массовой концентрации бифентрина в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Бифентрин (ISO).

Структурная формула (не приводится).

СА: (2-метил[1,1'-дифенил]-3-ил)метил-3-(2-хлор-3,3,3-трифтор-1-пропенил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.

Мол. масса: 422,9.

Гигиенические нормативы: ВМДУ бифентрина в капусте 1,0 мг/кг, для гороха и сои не установлены.

Область применения: инсектицид широкого спектра действия для борьбы с тлей, клещом, щитовкой, белокрылкой и другими на фруктовых, овощных, бахчевых, бобовых и зерновых культурах.

Метод определения бифентрина в растительных объектах основан на экстракции пестицида органическим растворителем и очистке перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и, при необходимости, на колонке с силикагелем. Количественное определение бифентрина в капусте и горохе проводят методом газожидкостной хроматографии на насадочной колонке, в зерне и масле сои - на капиллярной колонке с использованием электроннозахватного детектора (ДПР).

Идентификация бифентрина проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Отбор проб капусты проводят в соответствии с ГОСТ 1724-85 "Капуста белокочанная свежая. Заготовка и поставка" или ГОСТ 7967-87 "Капуста краснокочанная свежая. Заготовка и поставка".

Отбор проб зерна гороха проводят в соответствии с ГОСТ 28674-90 "Горох. Требования по заготовке и поставке". Для длительного хранения аналитические пробы капусты и зерна гороха помещают в герметично закрытый двойной полиэтиленовый пакет и хранят в морозильной камере с температурой -18 °C.

Отбор проб зерна сои для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

Пробы зерна просушивают до стандартной влажности и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Пробы растительного масла хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в закрытой стеклянной таре не более 2 месяцев.

Капиллярную и/или насадочную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C до установления нулевой линии.

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с типовыми методиками.

8.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см: точную навеску бифентрина (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки гексаном.

Градуировочные растворы бифентрина с концентрациями 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления основного раствора 1 по объему, используя гексан.

8.3.2. Раствор N 1 с концентрацией бифентрина 0,5 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,1 куб. см основного раствора и доводят объем до метки гексаном.

8.3.3. Раствор N 2 с концентрацией бифентрина 0,25 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.3.4. Раствор N 3 с концентрацией бифентрина 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 2 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.3.5. Раствор N 4 с концентрацией бифентрина 0,05 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 1 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют основной раствор бифентрина, разбавленный гексаном до соответствующей концентрации.

Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации бифентрина в градуировочном растворе (мкг/куб. см).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, вносят суспензию 8 г силикагеля в 40 куб. см гексана и насыпают 2,5 г безводного сернокислого натрия, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 40 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

В подготовленную колонку вносят 1 куб. см стандартного раствора бифентрина с концентрацией 0,1 мкг/куб. см, раствору дают впитаться, после чего через колонку пропускают 20 куб. см гексана, элюат отбрасывают. Затем пропускают 80 куб. см смеси гексан-этилацетат (95:5), отбирая фракции по 10 куб. см каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 куб. см гексана и анализируют на содержание бифентрина по п. 2.6.8. Фракции, содержащие бифентрин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 куб. см гексана и анализируют по п. 2.6.8. Рассчитывают содержание бифентрина в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: профиль вымывания бифентрина может меняться при использовании новой партии сорбента.

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

Анализируемые объекты измельчают, берут навеску (10 +/- 0,1) г, помещают в коническую колбу на 250 куб. см, проводят экстракцию 50 куб. см 60%-го водного ацетона на ультразвуковой бане в течение 15 мин., экстракцию повторяют дважды порциями по 40 куб. см. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр "красная лента", фильтр обмывают 10 куб. см водного ацетона, половину объединенного экстракта отбрасывают. Оставшуюся часть экстракта (эквивалентную 5 г образца) упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до водного остатка, который переносят в делительную воронку на 250 куб. см и добавляют равный объем 10%-го раствора хлорида натрия, после чего проводят экстракцию бифентрина хлороформом трижды порциями по 30 куб. см. После полного расслоения жидкостей <*> водную фазу отбрасывают, хлороформные экстракты фильтруют через слой безводного сульфата натрия (10 г) в колбу-концентратор объемом 250 куб. см, осушитель промывают 10 - 15 куб. см хлороформа. Экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре 50 - 60 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в испаритель хроматографа. При наличии на хроматограмме пиков коэкстрактивных веществ, мешающих определению бифентрина, проводят очистку по п. 9.5.

--------------------------------

<*> При образовании сравнительно стойких эмульсий для ускорения расслаивания добавляют 10 - 15 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия и/или 2 - 5 куб. см метанола.

Навеску зерна гороха массой (10 +/- 0,1) г, размолотого на лабораторной мельнице, помещают в коническую колбу на 100 куб. см и экстрагируют бифентрин 40 куб. см ацетона на ультразвуковой бане в течение 15 мин., гомогенат фильтруют через фильтр "красная лента" в мерный цилиндр на 250 куб. см, экстракцию повторяют дважды по 30 куб. см ацетона. Фильтр обмывают 10 куб. см ацетона. Объединенные экстракты перемешивают и количественно переносят в коническую колбу, которую помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C на 2 - 3 ч. После вымораживания экстракт фильтруют через бумажный фильтр "красная лента", фильтр и колбу обмывают по 10 куб. см охлажденного ацетона. К содержимому колбы добавляют 40 куб. см воды так, чтобы соотношение растворителей ацетон-вода составляло 3:2. Экстракцию пестицида хлороформом проводят трижды порциями по 40 куб. см в делительной воронке на 500 куб. см. После полного разделения фаз хлороформный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (10 г) в колбу-концентратор на 250 куб. см, осушитель промывают 10 - 15 куб. см хлороформа. Полученный экстракт выпаривают на роторном испарителе при температуре 50 - 60 °C. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см гексана на ультразвуковой бане и хроматографируют. При необходимости проводят очистку по п. 9.5.

Берут навеску зерна сои (10 +/- 0,1) г, измельчают его в фарфоровой ступке и количественно переносят в коническую колбу на 300 куб. см, добавляют 100 куб. см 80%-го водного ацетонитрила и экстрагируют бифентрин на ультразвуковой бане в течение 5 мин. Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 куб. см. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" в чистую колбу на 250 куб. см, фильтр обмывают дважды 20 куб. см водного ацетонитрила. Фильтрат переносят в делительную воронку на 500 куб. см, добавляют 30 куб. см гексана и встряхивают воронку в течение 2 - 3 мин. После разделения фаз гексан отбрасывают, ацетонитрильный слой возвращают в делительную воронку и повторяют промывку гексаном дважды порциями по 30 куб. см. Водно-ацетонитрильный экстракт переносят в колбу-концентратор объемом 250 куб. см и упаривают на роторном испарителе при температуре 50 - 60 °C до водного остатка. Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, колбу обмывают 30 куб. см 10%-го хлористого натрия и смыв добавляют к водному остатку. Затем в делительную воронку добавляют 50 куб. см дихлорметана, встряхивают 2 - 3 мин. и оставляют до полного разделения фаз. Органическую фазу фильтруют в колбу-концентратор через фильтр "красная лента" со слоем безводного сернокислого натрия. Экстракцию бифентрина из водной фазы повторяют дважды порциями дихлорметана по 30 куб. см. Объединенный экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до сухого остатка. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в испаритель хроматографа. При наличии на хроматограмме пиков коэкстрактивных веществ, мешающих определению бифентрина, проводят очистку по п. 9.5.

Навеску масла (10 +/- 0,1) г растворяют в 100 куб. см гексана в плоскодонной колбе объемом 250 куб. см в ультразвуковой ванне в течение 5 мин. и оставляют на час. Затем экстракт количественно переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, добавляют 100 куб. см ацетонитрила и встряхивают воронку в течение 2 - 3 мин. После разделения фаз ацетонитрильный слой собирают, пропуская через фильтр "красная лента" со слоем безводного сульфата натрия в мерный цилиндр на 250 куб. см. Экстракцию ацетонитрилом повторяют дважды порциями по 50 куб. см. Объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку объемом 250 куб. см и ацетонитрильный слой трижды промывают гексаном порциями по 15 - 20 куб. см. Гексановый слой отбрасывают, а промытый ацетонитрильный экстракт упаривают до сухого остатка на роторном испарителе при температуре не выше 50 - 60 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и хроматографируют. При наличии мешающих примесей дополнительную очистку проводят на колонке с силикагелем по п. 9.5.

Количественно переносят в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 8.5) 1 куб. см полученного по п. п. 9.1 - 9.4 экстракта, дают впитаться, после чего через колонку пропускают 20 куб. см гексана, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (95:5). Первые 20 куб. см элюата отбрасывают, следующие 10 куб. см собирают в колбу-концентратор на 50 куб. см, выпаривают досуха на роторном испарителе, растворяют в 1 куб. см гексана и хроматографируют.

Хроматограф Цвет-550М с ДПР. Колонка насадочная стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм. Температура колонки 205 °C, испарителя 230 °C, детектора 300 °C. Расход газа-носителя (азот) через колонку 43,5 куб. см/мин. Навеска 10 г. Конечный объем экстракта 2 куб. см. Дозируемый объем 1 куб. мм. Время удерживания бифентрина (3,35 +/- 0,01) мин.

Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с ДЭЗ.

Колонка капиллярная кварцевая длиной 10 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1, толщина слоя 1,5 мкм.

Температура колонки 200 °C, температура испарителя 230 °C, детектора 300 °C.

Время удерживания бифентрина (4,97 +/- 0,08) мин.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание бифентрина в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 01.5.04.008) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10398).