"МУК 4.1.2954-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.07.2011)

1. Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Роспотребнадзора.

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации" Г.Г. Онищенко 27 июля 2011 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации N 223.1.0244/01.00258/2010.

1.1. Методические указания по определению массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче предназначены для использования органами, осуществляющими государственный санитарно-эпидемиологический надзор и организациями Роспотребнадзора, лечебными и научными учреждениями, осуществляющими деятельность в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием диметилового эфира терефталевой кислоты в биологических средах (моче) у населения, проживающего в условиях с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

1.2. Физико-химические и токсические свойства диметилового эфира терефталевой кислоты.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса 194,19.

Диметилтерефталат обладает умеренно выраженным кумулятивным и слабым раздражающим действиями, вызывает умеренную анемию и ретикулоцитоз, лейкопению, лимфоцитоз, влияет на сердечно-сосудистую систему.

2.1. Метод измерений массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) основан на извлечении диметилтерефталата из мочи твердофазной экстракцией на полимерном сорбенте Oasis HLB и анализе экстракта на жидкостном хроматографе в градиентном режиме элюирования с использованием флуориметрического детектора.

2.2. Определению не мешают диметиловый эфир фталевой кислоты, диметиловый эфир изофталевой кислоты, монометиловые эфиры изомеров фталевой кислоты, диэтиловые эфиры изомеров фталевой кислоты, фталевая, изофталевая и терефталевая кислоты.

2.3. Диапазон измерений массовой концентрации диметилового эфира терефталевой кислоты в моче - 0,001 - 1,0 мкг/куб. см.

Погрешность измерений, соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерении, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

Примечания.

1. Допускается использование других средств измерений утвержденных типов, обеспечивающих измерения с установленной точностью.

2. Допускается использование другого оборудования, материалов и реактивов с метрологическими и техническими характеристиками, аналогичными указанным.

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-76 и 12.1.005-88.

5.2.1. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают меры безопасности, указанные в "Руководстве по правилам эксплуатации" прибора, правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79, противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, и имеют средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

5.2.2. Помещение оборудуется приточно-вытяжной вентиляцией.

5.2.3. При работе с биологическими средами необходимо соблюдать правила в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08.

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоившие метод анализа и получившие удовлетворительные результаты оперативного контроля процедуры выполнения измерений.

7.1. При подготовке к проведению измерений и приготовлении растворов соблюдают следующие условия (ГОСТ 15150):

- температура воздуха (20 +/- 5) °С, влажность (80%);

- атмосферное давление (630 - 800) мм рт. ст.

7.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

Используемую посуду вымыть мыльным раствором, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой, обработать этиловым спиртом и высушить при температуре 50 °С.

8.2.1. Элюент для хроматографии. Смесь ацетонитрила с дистиллированной водой в соотношении 25:75 (объемная доля). Состав элюента задают на двух каналах насоса.

8.2.2. Раствор ацетонитрила 20%-й (объемная доля). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 20,0 куб. см ацетонитрила, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и дегазируют содержимое колбы барботированием гелия в течение 2 - 3 мин. со скоростью 50 - 60 куб. см/мин. Срок хранения раствора 5 дней.

8.2.3. Исходный раствор диметилового эфира терефталевой кислоты для градуировки (раствор N 1). Навеску диметилтерефталата массой (50,0 +/- 0,12) мг вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят метанолом до метки. Массовая концентрация диметилтерефталата в исходном растворе составляет 0,5 мг/куб. см. Срок хранения раствора 7 суток при комнатных условиях.

8.2.4. Рабочий раствор диметилового эфира терефталевой кислоты для градуировки (раствор N 2). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,1 куб. см раствора N 1 и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в разбавленном растворе составляет 0,5 мкг/куб. см. Используют свежеприготовленный раствор.

8.2.5. Стандартный раствор для идентификации диметилтерефталата. В мерную колбу вместимостью 25 куб. см вносят 10 куб. мм исходного раствора диметилового эфира терефталевой кислоты для градуировки (раствор N 1) и доводят содержимое колбы ацетонитрилом до метки. Концентрация диметилтерефталата составляет 0,2 мкг/куб. см. Срок хранения раствора 7 суток при комнатных условиях.

Колонку устанавливают в хроматограф и подают элюент со скоростью 1,0 куб. см/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.

8.4.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от массовой концентрации диметилтерефталата в моче в диапазонах 0,001 - 0,020 мкг/куб. см и 0,02 - 1,00 мкг/куб. см. Градуировочную характеристику в каждом диапазоне устанавливают по шести сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из трех растворов, готовят из растворов для градуировки (N 1 и 2), приготовленных по пунктам 8.2.3 - 8.2.4 настоящих МУ.

8.4.2. Для приготовления градуировочных смесей отбирают пробу мочи объемом не менее 900 куб. см. В соответствии с п. 9 проводят анализ пробы мочи на содержание диметилтерефталата. При наличии анализируемого вещества в холостой пробе вычитают его фоновое содержание при построении градуировочного графика.

8.4.3. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах вместимостью 25,0 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят растворы для градуировки N 1 и 2 в соответствии с табл. 2, доводят объем колбы до метки мочой и перемешивают. Одновременно готовят холостую пробу, не содержащую исследуемого вещества. Анализируют свежеприготовленные растворы.

8.4.4. Переносят 15,0 куб. см каждого градуировочного раствора в коническую пробирку вместимостью 15 куб. см и центрифугируют со скоростью 2000 об./мин. в течение 5 мин. Для получения одного измерения отбирают 3 куб. см верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию. Для этого пропускают под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3cc 1 куб. см ацетонитрила, 1 куб. см дистиллированной воды, 3 куб. см отцентрифугированной мочи, 3 куб. см дистиллированной воды, 2 куб. см 20%-го раствора ацетонитрила. Скорость потока не должна превышать 1 куб. см/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 куб. см ацетонитрила. Полученный экстракт фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц "Луер", в стеклянную виалу и аликвотную часть (10 куб. мм) анализируют на приборе.

8.4.5. Условия хроматографирования:

подвижная фаза - смесь ацетонитрила и воды в соотношении 25:75;

градиент: 10 мин. подача подвижной фазы (25% ацетонитрила и 75% воды), увеличение ацетонитрила с 25 до 90% в течение 5 мин., 5 мин. подача 90% ацетонитрила, снижение ацетонитрила до 25% в течение 5 мин., подача 25% ацетонитрила до уравновешивания колонки (10 мин.);

8.4.6. Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:

8.4.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация диметилтерефталата соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:

где:

C - заданная массовая концентрация диметилтерефталата в градуировочном растворе;

X - результат измерения массовой концентрации диметилтерефталата в градуировочном растворе.

При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики.

Отбирают мочу объемом не менее 20 куб. см в стеклянную посуду с крышкой. Срок хранения проб в холодильнике 6 ч.

Выполняют два параллельных измерения образца мочи. В коническую пробирку вместимостью 15 куб. см переносят 5,0 куб. см мочи и центрифугируют со скоростью 2000 об./мин. в течение 5 мин., отбирают 3 куб. см верхнего слоя и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3cc 1 куб. см ацетонитрила, 1 куб. см дистиллированной воды, 3 куб. см мочи, 3 куб. см дистиллированной воды, 2 куб. см 20%-го водного раствора ацетонитрила. Скорость потока не должна превышать 1 куб. см/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 куб. см ацетонитрила. Полученный экстракт фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский шприц типа "Луер", в стеклянную виалу и аликвотную часть (10 куб. мм) анализируют в условиях, указанных в п. 8.4.5 настоящих МУ.

Идентификацию диметилтерефталата проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и стандартном растворе.

10.1. Массовую концентрацию диметилтерефталата в моче (мкг/куб. см) вычисляют по формуле:

При невыполнении условия (2) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия (1).

10.3. Расхождение между результатами измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости:

При выполнении условия (3) приемлемы оба результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости приведены в табл. 3.

Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории организуют и проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и РМГ 76-2004 ГСИ.

Периодичность получения результатов контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

При невыполнении условия (4) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

Контрольные процедуры при контроле промежуточной прецизионности получают с использованием рабочих проб мочи.

"Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Роспотребнадзора.