"МУК 4.1.2781-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств напропамида в семенах и масле рапса и плодах томатов методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 24.11.2010)

1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации методики N 01.5.04.672 от 25.06.2010.

Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения в семенах и масле рапса и плодах томатов массовой концентрации напропамида в диапазоне концентраций 0,025 - 0,4 мг/кг.

Название действующего вещества по номенклатуре ICO: напропамид.

Название по номенклатуре IUPAC: (RS)-N,N-dieihy1-2-(1-naphthyloxy)propionamide.

Структурная формула: (не приводится).

Молекулярная масса: 271,4.

Химически чистое вещество: кристаллы буроватого цвета.

Температура плавления: 75 °С.

Растворимость при 20 °С (г/л): в воде - 0,73, хорошо растворим в ацетоне, этаноле, ксилоле. Устойчив в нейтральной среде, гидролизуется при кипячении в кислой и щелочной средах.

Область применения: гербицид для борьбы с одно- и двудольными однолетними сорными растениями.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений (табл. 1) для соответствующих диапазонов концентраций.

Метод основан на извлечении остаточных количеств напропамида из анализируемого объекта органическими растворителями и проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и использованием пламенно-ионизационного детектора.

Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование капиллярной колонки позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже указанных.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать правила техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников по безопасности труда (ГОСТ 12.0.004).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.019 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности (ГОСТ 12.1.004) и иметь средства пожаротушения (ГОСТ 12.4.009). Содержание вредных веществ в воздухе лабораторного помещения не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом капиллярной газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации газового хроматографа, освоивший данный метод и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерения выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха лабораторного помещения (20 +/- 5) °С и относительной влажности воздуха не более 80%;

- выполнение измерения на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.1979, а также в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб" и ГОСТ 1725-85 "Томаты свежие. Требования при заготовках и поставках".

Для исследовательских целей допускается получение в лаборатории масла из проб измельченных семян методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше 40 °С. Пробы масла хранят при 4 - 6 °С в закрытой стеклянной таре не более 30 суток. Пробы плодов томатов помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в закрытой полиэтиленовой таре.

Капиллярную хроматографическую колонку устанавливают в газовый хроматограф и перед анализом кондиционируют при температуре 280 °С до установления нулевой линии.

Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

Основной раствор напропамида с содержанием 100 мкг/куб. см готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта напропамида в мерной колбе объемом 100 куб. см. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 4,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/куб. см готовят из основного стандартного раствора напропамида последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С не более месяца. В модельных опытах при изучении полноты извлечения напропамида используют ацетоновые растворы стандартного вещества.

Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа (п. 9.4) вводят по 2,0 куб. мм приготовленных по п. 8.3 растворов, содержащих напропамид в концентрациях 0,5; 1,0; 2,0 и 4,0 мкг/куб. см. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации напропамида в градуировочном растворе в мкг/куб. см. Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, изменении условий хроматографирования, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

Пробы семян рапса перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пинцетом удаляют включения. Семена измельчают на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу. Замороженные плоды томатов измельчают и готовят усредненную аналитическую пробу.

Аналитическую пробу семян массой (20 +/- 0,1) г помещают в плоскодонную колбу объемом 300 куб. см, добавляют 150 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-ванне в течение 10 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор объемом 250 куб. см. Содержимое колбы с пробой промывают 50 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 150 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10) и встряхивают в течение 60 минут. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор объемом 250 куб. см. Содержимое колбы с пробой промывают 50 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10 - 20 куб. см при температуре 40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 куб. см дистиллированной воды и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре 4 - 6 °С в течение 30 минут. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку объемом 500 куб. см. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 - 10, 30 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (50:50). Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 - 1,5 см) в колбу-концентратор объемом 250 куб. см. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир 50:50). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре 40 °С до объема 3 - 5 куб. см. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом объемом 5,0 куб. см и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 0,5 куб. см ацетона и проводят газохроматографический анализ по п. 9.4.

Аналитическую пробу масла массой (10,0 +/- 0,1) г растворяют в 50 куб. см н-гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе объемом 100 куб. см и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Колбу промывают 50 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в химический стакан объемом 100 куб. см. Гексановый слой отбрасывают. Содержимое химического стакана переносят в рабочую делительную воронку объемом 250 куб. см. Стакан промывают 25 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и также переносят в делительную воронку. В воронку вносят 50 куб. см н-гексана (насыщенного ацетонитрилом) и содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой сливают в колбу-концентратор объемом 250 куб. см, а верхний гексановый слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель досуха при температуре +50 °С. Сухой остаток растворяют в 20 куб. см ацетона и добавляют 200 куб. см дистиллированной воды. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4 - 6 °С в течение 30 минут. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку объемом 500 куб. см. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 - 10, 30 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (50:50). Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 - 1,5 см) в колбу-концентратор объемом 250 куб. см. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (50:50). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре 40 °С до объема 3 - 5 куб. см. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом объемом 5,0 куб. см и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 0,5 куб. см ацетона и проводят газохроматографический анализ по п. 9.4.

Аналитическую пробу плодов массой (20 +/- 0,1) г помещают в плоскодонную колбу объемом 300 куб. см, добавляют 150 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-ванне в течение 10 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор объемом 250 куб. см. Содержимое колбы с пробой промывают 50 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 150 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10) и встряхивают в течение 60 минут. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор объемом 250 куб. см. Содержимое колбы с пробой промывают 50 куб. см смеси ацетон - дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10 - 20 куб. см при температуре 40 °С. В колбу-концентратор добавляют 200 куб. см дистиллированной воды и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в делительную воронку объемом 500 куб. см. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 - 10, 30 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (5:50). Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 - 1,5 см) в колбу-концентратор объемом 250 куб. см. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (5:50). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре 40 °С до объема 3 - 5 куб. см. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом объемом 5,0 куб. см и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 0,5 куб. см ацетона и проводят газохроматографический анализ по п. 9.4.

Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором и хроматографической кварцевой капиллярной колонкой длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52, толщина пленки 0,4 мкм.

Температура колонки: программирование от 80 °С (1 мин.) до 280 °С (20 мин.) со скоростью 10,0 °С/мин. Температура испарителя - 250 °С, детектора - 300 °С. Расход газов: газа-носителя (гелий) - 2,0 куб. см/мин., водорода и воздуха к детектору - 30 и 300 куб. см/мин. соответственно. Количество аликвоты, вводимое в хроматограф, - 2,0 куб. мм. Время удерживания напропамида: (19,2 +/- 0,03) мин.

Количественное определение напропамида проводят методом абсолютной калибровки и вычисляют по формуле:

Содержание остаточных количеств напропамида в анализируемом образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений. При получении зашкаленных пиков анализируемый экстракт разбавляют ацетоном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг <*>".

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения напропамида в анализируемых объектах.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):