"МУК 4.1.2935-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств этаметсульфурон-метила в воде и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 0083.20.04.11 от 25.04.2011.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций этаметсульфурон-метила в воде и почве в диапазонах 0,0005 - 0,005 мг/куб. дм и 0,01 - 0,1 мг/кг соответственно.

Этаметсульфурон-метил

2-[[[[(4-Этокси-6-метиламино-1,3,5-триазин-2-ил)амино]карбонил]амино]сульфонил]-бензойная кислота, метиловый эфир (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Область применения: Этаметсульфурон-метил - гербицид класса сульфонилмочевин, рекомендуется к применению на посевах озимого и ярового рапса, подсолнечника для подавления роста однолетних и многолетних двудольных сорняков.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении этаметсульфурон-метила с использованием обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения вещества из анализируемого образца почвы смесью ацетон - вода, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, затем на концентрирующем патроне C18 Sep Pak Classic. Для концентрирования и очистки пробы воды использованы патроны для твердофазной экстракции C18 Sep Pak Vac 6cc.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения п. 7.1 (очистка растворителей).

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, приготовление растворов, концентрирующих патронов, проверка хроматографического поведения этаметсульфурон-метила на патроне C18 Sep Pak Classic.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 куб. дм ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 куб. дм ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.2.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 куб. см, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.2.2. Очистка растворителя. Растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,1% (0,1%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 250 - 300 куб. м бидистиллированной воды, вносят 1 куб. см ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

7.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 350 куб. см ацетонитрила, вносят 650 куб. см 0,1%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 0,8 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

7.4.1. Исходный раствор этаметсульфурон-метила для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,0100 г этаметсульфурон-метила, растворяют в 50 - 60 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 3 месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.4.2. Раствор N 1 этаметсульфурон-метила для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора этаметсульфурон-метила с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.4.3. Рабочие растворы N 2 - 5 этаметсульфурон-метила для градуировки (концентрация 0,05 - 0,5 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией этаметсульфурон-метила 0,05; 0,1; 0,2 и 0,5 мкг/куб. см соответственно.

Рабочие растворы готовят непосредственно в день проведения анализа.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мЕА x с) от концентрации этаметсульфурон-метила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки N 2 - 5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующего вещества, на основании которых строят градуировочную зависимость.

Градуировочный график проверяют перед проведением измерения по анализу одного из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

Для приготовления раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/куб. дм (1 М раствор) в мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 6,9 куб. см ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Для приготовления раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,005 моль/куб. дм (0,005 М раствор) в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 5 куб. см 1 М раствора ортофосфорной кислоты, доводят до метки водой, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1,0 куб. см ледяной уксусной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Получают раствор уксусной кислоты с массовой долей 1,0%.

Для приготовления 0,005%-го раствора уксусной кислоты в мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 2,5 куб. см раствора с массовой долей 1,0%, доводят до метки водой, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 250 куб. см, содержащую 100 - 150 куб. см бидистиллированной воды, помещают (10 +/- 0,1) г натрия гидроксида, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Контролируют pH буферного раствора с помощью pH-метра, доводят значение до pH 10, применяя 1 М растворы едкого натра или ортофосфорной кислоты.

Патроны C18 Sep Pak Classic или Vac 6cc устанавливают на алонж с прямым отводом для вакуума <*>. Сверху в патрон C18 Sep Pak Classic устанавливают медицинский шприц объемом не менее 10 куб. см, используемый в качестве емкости для элюента.

--------------------------------

<*> В отсутствие специального алонжа жидкость продавливают через патрон с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 2 - 3 кап./с.

Концентрирующие патроны промывают последовательно 10 куб. см ацетонитрила, затем 15 куб. см бидистиллированной воды. Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителей через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин., при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

В круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора N 1 этаметсульфурон-метила с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), растворитель упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, остаток растворяют в 10 куб. см буферного раствора с pH 10 (п. 7.10) и вносят на концентрирующий патрон, подготовленный по п. 7.11. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 2 - 3 кап./с. Элюат отбрасывают.

Промывают патрон 10 куб. см 0,005% уксусной кислоты (п. 7.7), затем 15 куб. см смеси ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота (15:85, по объему). Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 2 мин. Этаметсульфурон-метил элюируют с патрона 10 куб. см ацетонитрила, собирая 2 порции элюата по 5 куб. см каждая непосредственно в круглодонные колбы. Растворы в колбах упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Остаток в каждой колбе растворяют в 2 куб. см подвижной фазы (приготовленной по п. 7.2) и анализируют содержание этаметсульфурон-метила по п. 9.3. При обнаружении вещества только в первой фракции элюирование этаметсульфурон-метила с патрона осуществляют 5 куб. см ацетонитрила; при наличии его в обеих объем элюента увеличивают до 10 куб. см.

Примечание: Проверку хроматографического поведения этаметсульфурон-метила следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ: вода - Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб"; почва - 17.4.3.01-83 "Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб", 28168-89 "Почвы. Отбор проб" и "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы воды хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более суток. Почву подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C. Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, почвы просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм.

Образец отфильтрованной воды объемом 100 куб. см помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 - 300 куб. см с пришлифованной пробкой, вносят 1,89 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного, тщательно перемешивают.

Подготовленную пробу вносят на концентрирующий патрон C18 Sep Pak Vac 6cc, подготовленный по п. 7.11, со скоростью пропускания раствора 2 - 3 кап./с, используя разряжение, создаваемое водоструйным насосом. После нанесения пробы патрон промывают 10 куб. см 0,005% уксусной кислоты (п. 7.11), затем 15 куб. см смеси ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота (15:85, по объему), элюат отбрасывают. Вещество элюируют с патрона 10 куб. см ацетонитрила, собирая элюат в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 50 куб. см. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха, остаток растворяют в 1 куб. см подвижной фазы, приготовленной по п. 7.2, и анализируют содержание этаметсульфурон-метила по п. 9.3.

Образец воздушно-сухой почвы массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 - 300 куб. см, вносят 100 куб. см смеси ацетон-вода (9:1, по объему) и экстрагируют 15 мин. на ультразвуковой бане.

Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента". Почвенный остаток повторно экстрагируют 50 куб. см смеси ацетон-вода (9:1, по объему) на ультразвуковой бане в течение 15 мин., раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в колбу для упаривания на 250 куб. см и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до водного остатка (объем 10 - 15 куб. см). Очищают перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.2.2, затем на концентрирующем патроне C18 Sep Pak Classic по п. 9.2.3.

Водный остаток в колбе, полученный по п. 9.2.1, переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 90 куб. см 0,1 М раствора натрия фосфорнокислого двузамещенного (п. 7.9), предварительно обмыв им колбу, в которой находилась проба, перемешивают, вносят в воронку 20 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин., после полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой отбрасывают. Водную фазу обрабатывают хлористым метиленом еще 2 раза, используя по 20 и 15 куб. см растворителя, при встряхивании 1 - 2 мин. Нижний дихлорметановый слой отбрасывают.

Затем водную фазу подкисляют 1 М ортофосфорной кислотой до pH 3 (контроль по индикаторной бумаге), вносят 20 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем в воронку вносят 30 куб. см дихлорметана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в коническую колбу на 250 - 300 куб. см. Экстракцию этаметсульфурон-метила повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 30, затем 20 куб. см. Для обеспечения лучшего расслаивания проб раствор переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. при 3000 об./мин. Объединенный дихлорметановый экстракт фильтруют через слой (около 2 см) безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в химическую воронку, в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 куб. см, упаривают досуха. Остаток растворяют в 10 куб. см фосфатного буферного раствора, pH 10 (п. 7.10), и дополнительно очищают на концентрирующем патроне C18 Sep Pak Classic по п. 9.2.3.

Водный раствор, полученный по п. 9.2.2, вносят на концентрирующий патрон C18 Sep Pak Classic, подготовленный по п. 7.11. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 2 - 3 кап./с. Элюат отбрасывают.

Промывают патрон 10 куб. см 0,005%-й уксусной кислоты (п. 7.7), затем 15 куб. см смеси ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота (15:85, по объему). Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 2 мин. Этаметсульфурон-метил элюируют с патрона 5 или 10 куб. см (в соответствии с п. 7.12) ацетонитрила, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы и анализируют содержание этаметсульфурон-метила по п. 9.3.

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны.

Рабочие длины волн: 230 и 245 нм <*>.

--------------------------------

<*> Хроматографирование пробы при двух длинах волн повышает надежность идентификации.

Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB C18, зернение 5 мкм.

Температура колонки: 25 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1% ортофосфорная кислота (35:65, по объему).

Скорость потока элюента: 0,8 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.

Ориентировочное время выхода этаметсульфурон-метила: 12,66 - 12,86 мин.

Линейный диапазон детектирования 1 - 10 нг.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков вещества (в мЕА x с), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию этаметсульфурон-метила в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, не более чем в 50 раз.

Содержание этаметсульфурон-метила в пробе (X, мг/куб. дм, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где:

C - концентрация этаметсульфурон-метила, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - объем (масса) анализируемого образца, куб. см (г).

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где U - граница расширенной неопределенности (табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание этаметсульфурон-метила в пробе менее воды - 0,0005 мг/куб. дм, почвы - 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,0005 мг/куб. дм, 0,01 мг/кг - предел обнаружения этаметсульфурон-метила в пробах воды и почвы соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R)

ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора.