"МУК 4.1.2693-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций 3-[3-(4-бром-1,1-бифенил-4-ил)-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталенил]-4-гидрокси-2H-1-бензопиран-2-он (бродифакум) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

--------------------------------

<*> Методика разработана взамен МУК 4.1.1353-03, утв. 16.05.2003 Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко.

1. Методические указания подготовлены коллективом авторов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10 июня 2010 г. N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем бродифакума методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,005 - 0,05 мг/куб. м. Погрешность измерений соответствует характеристикам, приведенным в табл. 1.

Методические указания аттестованы в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 с изм. N 1, 2 и ГОСТ Р ИСО 5725-2002.

Аттестация МВИ проведена во ФГУП Всероссийском научно-исследовательском институте метрологической службы Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии. Свидетельство N 66-09.

2.1. Структурная формула (не приводится).

2.3. Молекулярная масса 523,45.

2.4. Регистрационный номер CAS 56073-10-0.

2.5. Физико-химические свойства

Бродифакум - белое кристаллическое вещество, температура плавления 228 - 232 °C, нерастворим в воде, гексане, эфире, хорошо растворим в ацетоне, хлороформе, этаноле.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика

Бродифакум является антикоагулянтом (нарушает свертываемость крови, повышает проницаемость сосудов).

Предельно допустимая концентрация (ПДК) бродифакума в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м. Первый класс опасности.

При соблюдении всех регламентных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности измерений (и ее составляющих) не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Измерение массовой концентрации бродифакума выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием.

Измерение проводят при длине волны 280 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерений содержания бродифакума в анализируемом объеме пробы - 0,01 мкг.

Нижний предел измерения концентрации бродифакума в воздухе - 0,005 мг/куб. м (при отборе 80 куб. дм воздуха).

Измерению не мешают сопутствующие вещества: триэтаноламин, триэтиленгликоль, а также сахар, мука.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы.

Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 5.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

6.5. Обучение работающих безопасности труда по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц, имеющих высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедших обучение и владеющих техникой хроматографического анализа, освоивших метод анализа в процессе тренировки и уложившихся в нормативы контроля.

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовку проб к анализу проводят в следующих условиях:

- температура воздуха (20 +/- 5) °C,

- атмосферное давление (84 - 106) кПа,

- относительная влажность воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовку посуды, приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Стеклянную посуду ополаскивают ацетоном для удаления органических примесей, несколько раз промывают водопроводной водой, заливают хромовой смесью и выдерживают один час. После этого посуду извлекают из хромовой смеси, ополаскивают несколько раз водопроводной, а затем дистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу. Чистую посуду для анализа хранят в закрытом виде.

9.2.1. Основной стандартный раствор бродифакума в хлороформе с массовой концентрацией 1 мг/куб. см готовят растворением 0,0263 +/- 0,0001 г бродифакума (с учетом % содержания основного вещества) в мерной колбе вместимостью 25 куб. см. Раствор устойчив в течение трех дней при хранении в холодильнике.

9.2.2. Рабочие стандартные растворы бродифакума N 1, 2, 3, 4, 5 и 6 с массовой концентрацией 40,0; 80,0; 160,0; 240,0; 320,0 и 400,0 мкг/куб. см готовят разбавлением основного стандартного раствора бродифакума хлороформом в мерных колбах вместимостью 25 куб. см. Объем основного стандартного раствора (V, куб. см), необходимый для приготовления рабочих стандартных растворов бродифакума N 1, 2, 3, 4, 5 и 6, рассчитывают по формуле (1):

Растворы устойчивы в течение трех дней при хранении в холодильнике.

9.2.3. Приготовление элюента

Состав элюента: А - ацетонитрил:метанол = 1:1.

В - ортофосфорная кислота 0,1%-ная (по объему), готовят в мерной колбе вместимостью 100 куб. см следующим образом: к 99,9 куб. см бидистиллированной воды приливают 0,1 куб. см ортофосфорной кислоты.

Элюент хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение месяца.

Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по эксплуатации.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания бродифакума в градуировочном объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки по шести сериям растворов, по пять параллельных определений в каждой серии, согласно таблице 2 следующим образом: на фильтры "синяя лента", помещенные в стаканчики, наносят по 0,1 куб. см каждого стандартного раствора с массовой концентрацией 40,0; 80,0; 160,0; 240,0; 320,0 и 400,0 мкг/куб. см, что соответствует 4,0 мкг, 8,0 мкг, 16,0 мкг, 24,0 мкг, 32,0 мкг и 40,0 мкг. После чего фильтры подсушивают при комнатной температуре, затем заливают 5,0 куб. см хлороформа и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают, раствор сливают в пробирку, а фильтр повторно заливают 5,0 куб. см хлороформа и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают. Экстракты объединяют. Объем растворов доводят до 10,0 куб. см хлороформом. Инжектируют в хроматограф по 0,025 куб. см каждого из градуировочных растворов.

Градуировочные растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике.

Инжектируют в хроматограф по 0,025 куб. см каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (усл. ед. x c) от содержания бродифакума в хроматографируемом объеме (мкг).

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с прописью методики.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (2):

где +/- дельта - границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Воздух с объемным расходом 10 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения 1/2 ПДК бродифакума необходимо отобрать 80 куб. дм воздуха. Фильтры с отобранной пробой хранят в бюксах в холодильнике в течение недели.

После отбора пробы фильтр помещают в химический бюкс вместимостью 25 куб. см и добавляют 5,0 куб. см хлороформа, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут, затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс. Фильтр повторно обрабатывают 5,0 куб. см хлороформа, снова тщательно отжимают и удаляют. Экстракты объединяют и переносят в остродонную колбу со шлифом. Колбу присоединяют к ротационному испарителю и упаривают растворитель при температуре не выше 50 °C досуха. Сухой остаток в колбе растворяют в 1,0 куб. см хлороформа. Для анализа отбирают 0,025 куб. см полученного раствора. Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой пробы.

Количественное определение бродифакума (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной зависимости.

11.1. Массовую концентрацию бродифакума в воздухе рабочей зоны C, (мг/куб. м) вычисляют по формуле (3):

где:

а - содержание бродифакума в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

В - общий объем раствора пробы, куб. см (1 куб. см);

б - хроматографируемый объем раствора пробы, куб. см;

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (4):

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (4) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

+/- дельта - границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация бродифакума менее 0,005 мг/куб. м (более 0,05 мг/куб. м)".

13.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

13.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 (5.3.4).

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Для проведения серии анализов из шести проб требуется 2 часа.

Методические указания разработаны НИИ медицины труда РАМН.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре 293 K (20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.):

Атропина сульфат

Бродифакум

Бромадиолон

Гексаметилентетрамин

Диоксид циркония

Пиретрум

Ритонавир

Ставудин

Уротропин

ЭП

Этилпрокситол