"МУК 4.1.2933-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств биспирибака кислоты в воде, почве, зерне и соломе риса хроматографическими методами. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 0079.23.03.11 от 24.03.2011.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций биспирибака кислоты в воде в диапазоне 0,0005 - 0,005 мг/дм³, методы высокоэффективной жидкостной и газожидкостной хроматографии для определения массовых концентраций биспирибака кислоты в почве, зерне риса в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, соломе риса в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг.

2,6-Бис[(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)окси]бензойная кислота (IUPAC).

C₁₉H₁₈N₄O₈.

Мол. масса 430,4.

Белое порошкообразное вещество без запаха. Температура плавления 148 - 150 °C. Давление паров при 25 °C: 6,47 x 10^-6 мПа. Растворимость в органических растворителях при 20 °C (г/дм³): метанол - 23; тетрагидрофуран - 61; этанол - 9,5. Растворимость в воде при 20 °C - 0,4 г/дм³.

Биспирибак стабилен в водной среде при pH 5 - 7, при pH 9 переходит в соответствующие соли.

Область применения: биспирибак кислота рекомендуется в качестве послевсходового гербицида на посевах риса для борьбы с широким спектром однолетних и многолетних сорняков.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении биспирибака кислоты в воде с использованием обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором; почве, зерне и соломе риса с использованием ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором и капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором после извлечения вещества из анализируемых образцов почвы и растительного материала смесью ацетонитрил-вода, очистки экстрактов перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, затем на концентрирующем патроне C18 Sep Pak. Газохроматографическому измерению предшествует стадия дериватизации вещества в метиловый эфир.

Для концентрирования и очистки проб воды использованы патроны для твердофазной экстракции C18 Sep Pak.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих выполнения п. 7.1 (очистка растворителей).

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный и газовый хроматографы.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе на должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном и газовом хроматографах, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

выполнение измерений на жидкостном и газовом хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, раствора внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, концентрирующих патронов, проверка хроматографического поведения биспирибака кислоты на патроне C18 Sep Pak Classic.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.2.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%. Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.2.2. Очистка растворителя. Растворитель промывают последовательно 5%-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают (50 +/- 0,1) г гидрокарбоната натрия и растворяют в 500 - 600 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают (20 +/- 0,1) г гидроксида калия, растворяют в 25 - 30 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки.

В отсутствие коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.

Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1 дм³, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 см³ воды и кипятят 3 ч с обратным холодильником на водяной бане. Раствор в колбе охлаждают до комнатной температуры и добавляют в него 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом, содержащим хлорид натрия, до 0 °C и медленно при перемешивании вливают в смесь 600 г льда и 60 см³ концентрированной серной кислоты, помещенную в стакан вместимостью 2 дм³, охлаждаемый снаружи смесью льда с хлоридом натрия. Выпавшие кристаллы нитрозометилмочевины немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.

Внимание! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, так как под действием света и тепла она может взорваться.

В коническую колбу на 100 см³ вносят 20 см³ 40%-го раствора гидроксида калия и 50 см³ диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 - 5 °C. В охлажденную смесь порциями при перемешивании на магнитной мешалке или путем встряхивания вносят 5 г нитрозометилмочевины. Реакционную смесь выдерживают на холоду 10 мин. Затем эфирный слой сливают в чистую коническую колбу вместимостью 100 см³, добавляют 10 - 15 гранул гидроксида калия и колбу оставляют в бане со льдом на 2,5 - 3,0 ч для осушения раствора.

Раствор диазометана в эфире годен к употреблению при хранении в холодильнике в течение 1 - 2 суток. При хранении сосуды с диазометаном нельзя плотно закрывать!

7.6.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,2% (0,2%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 250 - 300 м³ бидистиллированной воды, вносят 2 см³ ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

7.6.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 350 см³ ацетонитрила, вносят 650 см³ 0,2%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.6) при скорости подачи растворителя 0,8 см³/мин. до установления стабильной базовой линии.

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,0100 г биспирибака кислоты, растворяют в 50 - 60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 3 месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.8.2.1. Раствор N 1 биспирибака кислоты для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора биспирибака кислоты с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.8.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.8.2.2. Рабочие растворы N 2 - 5 биспирибака кислоты для градуировки (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.8.2.1), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.6, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией биспирибака кислоты 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 2 недель.

7.8.3.1. Исходный раствор метилового эфира биспирибака кислоты для градуировки (соответствует концентрации биспирибака кислоты 50 мкг/см³). В круглодонную колбу вместимостью 50 см³ помещают 5 см³ исходного раствора биспирибака с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.8.1), растворитель отдувают потоком теплого воздуха, вносят 5 см³ раствора диазометана, выдерживают 30 мин. при комнатной температуре. Вносят в колбу 0,1 см³ н-пропанола, отдувают растворитель потоком теплого воздуха (не помещая колбу на подогретую водяную баню) до влажного остатка. Вносят в колбу 1 см³ гексана и вновь отдувают растворитель до влажного остатка (отсутствие запаха эфира).

Остаток растворяют в 10 см³ этилацетата, перемешивают. Раствор метилового эфира биспирибака кислоты с концентрацией 50 мкг/см³ хранится в холодильнике не более 10 дней.

Растворы N 2 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.8.3.2. Рабочие растворы N 2 - 5 метилового эфира биспирибака кислоты для градуировки (концентрация биспирибака кислоты 0,25 - 2,5 мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 0,5; 1,0; 2,5 и 5,0 см³ исходного раствора метилового эфира биспирибака кислоты (приготовленного по п. 7.8.3.1), доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией биспирибака кислоты 0,25; 0,5; 1,25 и 2,5 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 10 дней.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мЕА·с или мВ·с) от концентрации биспирибака кислоты в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки N 2 - 5.

В инжектор жидкостного хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 7.8.2.2, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1, в испаритель газового хроматографа - по 2 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 7.8.3.2, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующего вещества (или его метилового эфира), на основании которых строят градуировочную зависимость.

Градуировочный график проверяют перед проведением измерения по анализу одного из градуировочных растворов. Если значение площади отличается более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

Для приготовления раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/дм³ (1 М раствор) в мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 6,9 см³ ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Для приготовления раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,05 моль/дм³ (0,05 М раствор) в мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 50 см³ 1 М раствора ортофосфорной кислоты, доводят до метки водой, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 250 см³, содержащую 100 - 150 см³ бидистиллированной воды, помещают (10 +/- 0,1) г натрия гидроксида, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают (17,9 +/- 0,1) г двузамещенного фосфорнокислого натрия (Na₂HPO₄·12H₂O), растворяют в 700 - 800 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят при комнатной температуре.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают (7,8 +/- 0,1) г однозамещенного фосфорнокислого натрия (NaH₂PO₄·2H₂O), растворяют в 700 - 800 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят при комнатной температуре.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 800 см³ 0,05 М раствора натрия фосфорнокислого двузамещенного и 216 см³ 0,05 М раствора однозамещенного фосфорнокислого натрия, перемешивают. Контролируют pH буферного раствора с помощью pH-метра, доводят значение до pH 7,4, применяя 1 М растворы едкого натра или ортофосфорной кислоты. Хранят при комнатной температуре.

В мерную колбу вместимостью 500 см³, содержащую 100 - 150 см³ бидистиллированной воды, помещают (21 +/- 0,1) г натрия углекислого кислого, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят при комнатной температуре.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают (27,2 +/- 0,1) г ацетата натрия триводного (Na₂C₂H₃O₂·3H₂O), растворяют в 700 - 800 см³ дистиллированной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят при комнатной температуре.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³, содержащую 100 - 150 см³ бидистиллированной воды, помещают 11,4 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят при комнатной температуре.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 180 см³ 0,2 М раствора натрия уксуснокислого и 820 см³ 0,02 М раствора уксусной кислоты, перемешивают. Контролируют pH буферного раствора с помощью pH-метра, доводят значение до pH 4,0, применяя 1 М раствор едкого натра или 0,2 М раствор уксусной кислоты. Хранят при комнатной температуре.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 50 см³ 0,2 М ацетатного буферного раствора, доводят водой до метки, перемешивают.

Патрон устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума <*>. Сверху в патрон устанавливают медицинский шприц объемом не менее 10 см³, используемый в качестве емкости для элюента.

--------------------------------

<*> В отсутствие специального аллонжа, жидкость продавливают через патрон с помощью шприца, скорость продавливания раствора не должна превышать 2 - 3 кап./с.

Концентрирующий патрон промывают последовательно метанолом, бидистиллированной водой, затем 0,05 М раствором ортофосфорной кислоты порциями по 3 см³. Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителей через патрон не должна превышать 5 см³/мин., при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

В круглодонную колбу вместимостью 50 см³ помещают 0,1 см³ градуировочного раствора N 1 биспирибака кислоты с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.8.2.1), растворитель упаривают досуха при температуре не выше 35 °C, остаток растворяют в 10 см³ 0,05 М раствора ортофосфорной кислоты и вносят на концентрирующий патрон, подготовленный по п. 7.15. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 2 - 3 кап./с. Элюат отбрасывают.

Промывают патрон 10 см³ смеси ацетонитрил-вода (15:85, по объему). Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 5 мин. Биспирибак кислоту элюируют с патрона 4 см³ смеси дихлорметан-метанол (65:35, по объему), собирая 2 порции элюата по 2 см³ каждая непосредственно в круглодонные колбы. Растворы в колбах упаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Остаток в каждой колбе растворяют в 2 см³ подвижной фазы (приготовленной по п. 7.6) и анализируют содержание биспирибака кислоты по п. 9.3.1. При обнаружении вещества только в первой фракции элюирование биспирибака кислоты с патрона осуществляют 2 см³ смеси дихлорметан-метанол (65:35, по объему), при наличии его в обеих объем элюента увеличивают до 4 см³.

Примечание: Проверку хроматографического поведения биспирибака кислоты следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ: вода - Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб"; почва - 17.4.3.01-83 "Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб", 28168-89 "Почвы. Отбор проб", рис - 6293-90 "Рис. Требования при заготовках и поставках" и "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79).

Отобранные пробы воды хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более суток. Почву, зерно и солому риса подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре не более месяца. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °C. Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, почвы - просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, зерна и соломы - измельчают.

Образец отфильтрованной воды объемом 100 см³ помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 - 300 см³ с пришлифованной пробкой, доводят pH раствора до 2 (контроль по pH-метру) с помощью ортофосфорной кислоты, 85%-й раствор.

Подготовленную пробу вносят на концентрирующий патрон C18 Sep Pak, подготовленный по п. 7.15, со скоростью пропускания раствора 2 - 3 кап./с, используя разряжение, создаваемое водоструйным насосом. Промывают патрон 10 см³ смеси ацетонитрил-вода (15:85, по объему), элюат отбрасывают. Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 5 мин. Биспирибак кислоту элюируют с патрона 2 см³ или 4 см³ (в соответствии с п. 7.16) смеси дихлорметан-метанол (65:35, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 50 см³, Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха, остаток растворяют в 0,5 см³ подвижной фазы, приготовленной по п. 7.6, и анализируют содержание биспирибака кислоты по п. 9.3.1.

Образец воздушно-сухой почвы массой 50 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 400 - 500 см³, вносят 200 см³ смеси ацетонитрил-вода (9:1, по объему) и экстрагируют 15 мин. на ультразвуковой бане, затем помещают на механический встряхиватель на 30 мин.

Образец измельченного зерна массой 50 г или соломы риса массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 400 - 500 см³, вносят 200 см³ смеси ацетонитрил-вода (4:1, по объему) и экстрагируют 15 мин. на ультразвуковой бане, затем помещают на механический встряхиватель на 30 мин.

Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр "красная лента". Почвенный и растительный остаток промывают на фильтре дважды по 50 см³ ацетонитрила. Объединенный отфильтрованный экстракт и промывки переносят в колбу для упаривания на 500 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до объема 30 - 40 см³. Очищают перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.2.2, затем на концентрирующем патроне C18 Sep Pak Classic по п. 9.2.3.

Водный остаток в колбе, полученный по п. 9.2.1, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 25 см³ фосфатного буферного раствора (pH 7,4), предварительно обмыв им колбу, в которой находилась проба, вносят 10 см³ насыщенного раствора хлористого натрия и 50 см³ 0,5 М раствора гидрокарбоната натрия, встряхивают воронку 1 мин. Вносят в воронку 70 см³ этилацетата, интенсивно встряхивают в течение 2 мин., после полного разделения фаз верхний органический слой отбрасывают. Водную фазу обрабатывают этилацетатом еще 2 раза, используя по 50 см³ растворителя, при встряхивании 1 - 2 мин. Верхний органический слой отбрасывают.

Водную фазу возвращают в делительную воронку, вносят 2 см³ 85%-й ортофосфорной кислоты и 20 см³ 0,01 М ацетатного буферного раствора (pH 4), встряхивают воронку 1 мин. Затем в воронку вносят 50 см³ этилацетата, интенсивно встряхивают в течение 1 мин., после полного разделения фаз верхний органический слой переносят в коническую колбу на 250 - 300 см³. Экстракцию биспирибака кислоты повторяют еще дважды порциями этилацетата объемом 50 см³. Для обеспечения лучшего расслаивания проб, раствор переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. при 3000 об./мин. Объединенный этилацетатный экстракт фильтруют через слой (около 60 г) безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в химическую воронку, в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 250 см³, упаривают досуха. Остаток растворяют в 10 см³ 0,05 М раствора ортофосфорной кислоты (pH 2) и дополнительно очищают на концентрирующем патроне C18 Sep Pak Classic по п. 9.2.3.

Водный раствор, полученный по п. 9.2.2, вносят на концентрирующий патрон C18 Sep Pak Classic, подготовленный по п. 7.15. Скорость прохождения раствора через патрон не должна превышать 2 - 3 капли в секунду. Элюат отбрасывают.

Промывают патрон 10 см³ смеси ацетонитрил-вода (15:85, по объему), элюат отбрасывают. Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 5 мин. Биспирибак кислоту элюируют с патрона 2 или 4 см³ (в соответствии с п. 7.16) смеси дихлорметан-метанол (65:35, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 50 см³. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха, для полного удаления следов влаги вносят в колбу 3 - 5 см³ ацетонитрила и вновь упаривают. При измерении уровней действующего вещества методом ВЭЖХ остаток растворяют в 5 см³ подвижной фазы, приготовленной по п. 7.6, и анализируют содержание биспирибака кислоты по п. 9.3.1. При определении вещества методом ГЖХ (по п. 9.3.2) остаток в колбе обрабатывают диазометаном для превращения биспирибака кислоты в соответствующий метиловый эфир по п. 9.2.4.

В колбу с сухим остатком вносят 3 см³ раствора диазометана, выдерживают 30 мин. при комнатной температуре. Вносят в колбу 0,1 см³ н-пропанола, отдувают растворитель потоком теплого воздуха (не помещая колбу на подогретую водяную баню) до влажного остатка. Вносят в колбу 1 см³ гексана и вновь отдувают растворитель до влажного остатка (отсутствие запаха эфира).

Остаток растворяют в 2 см³ этилацетата и анализируют методом ГЖХ в условиях хроматографирования по п. 9.3.2.

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны.

Рабочая длины волн: 247 нм.

Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB C18, зернение 5 мкм.

Температура колонки: 25 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,2% ортофосфорная кислота (45:55, по объему).

Скорость потока элюента: 0,8 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 20 мм³.

Ориентировочное время выхода биспирибака кислоты: 10,63 - 10,75 мин.

Линейный диапазон детектирования: 1 - 10 нг.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков вещества (в мЕА·с), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию биспирибака кислоты в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.6, не более, чем в 50 раз.

Хроматограф газовый с термоионным детектором.

Колонка капиллярная VF-5ms длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки сорбента 0,5 мкм.

Температура: детектора 320 °C, испарителя 250 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 230 °C, выдержка 2 мин., нагрев колонки со скоростью 20 град./мин. до температуры 270 °C, выдержка 10 мин., нагрев колонки со скоростью 10 град./мин. до температуры 280 °C.

Скорость газа 1 (азот): давление 87,70 кПа.

Газ 2 (азот): деление потока 1:3,5; сброс 5,3 см³/мин.

Водород - 11 см³/мин.

Воздух - 200 см³/мин.

Хроматографируемый объем 2 мм³.

Ориентировочное время удерживания метилового биспирибака кислоты - 17,77 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,5 - 5,0 нг.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков метилового эфира действующего вещества (в мВ·с), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию биспирибака кислоты в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 2,5 мкг/см³, разбавляют этилацетатом, не более чем в 50 раз.

Содержание биспирибака кислоты в пробе (X, мг/дм³, мг/кг) рассчитывают по формуле:

C - концентрация биспирибака кислоты, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - объем (масса) анализируемого образца, см³ (г).

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/дм³, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

, мг/дм³, мг/кг, при вероятности P = 0,95,

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дм³, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/дм³, мг/кг;

U - граница расширенной неопределенности (табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

--------------------------------

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/дм³, мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/дм³, мг/кг;

U - граница расширенной неопределенности (табл. 1), %.

Контрольный параметр процедуры (K_к) рассчитывают по формуле:

, , - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/дм³, мг/кг;

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию (2):

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁, X₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/дм³, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном определяемых концентраций, табл. 1), %.

ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора.