"МУК 4.1.2664-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций аминопиралида в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором РФ 02.08.2010)

1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены имени Ф.Ф. Эрисмана.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 02.08.2010.

4. Вводятся в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для измерения концентрации аминопиралида в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов в диапазонах 0,1 - 1,0 мг/куб. м; 0,2 - 2,0 мкг/смыв соответственно.

4-Амино-3,6-дихлорпиридин-2-карбоновая кислота (ИЮПАК).

Структурная формула (не приводится).

Область применения:

Аминопиралид - гербицид системного ауксиноподобного действия из группы пиридинкарбоновых кислот. Рекомендуется для послевсходовой обработки зерновых культур и пастбищ против широкого спектра широколистных сорняков.

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,3 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения концентраций аминопиралида выполняют методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД) после дериватизации кислоты в метильное производное (воздух рабочей зоны) и в бутиловый эфир (смывы с кожных покровов).

Концентрирование аминопиралида из воздушной среды осуществляют на фильтр "синяя лента", экстракцию с фильтров проводят солянокислым ацетонитрилом, смыв с кожных покровов - этиловым спиртом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,02 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 83,5%, поверхности кожи - 94,2%.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Возможно использование реактивов более высокой квалификации, которые не требуют выполнения п. 7.1 (очистка).

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-88, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе на должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), получение N-нитрозо-N-метилмочевины (при необходимости), приготовление 0,1 N раствора соляной кислоты, 40%-ного раствора гидроокиси калия, раствора диазометана, бутилирующей смеси, приготовление градуировочных растворов и раствора внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и салфеток для отбора проб, отбор проб.

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшим количеством марганцовокислого калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.2. Очистка гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.3. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.4. Очистка н-бутанола

Растворитель перегоняют с дефлегматором над небольшим количеством оксида бария. Используют свежеперегнанным.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, содержащую 300 - 400 куб. м деионизованной воды, помещают 8,3 куб. см концентрированной соляной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 20 г гидроксида калия, растворяют в 25 - 30 куб. см дистиллированной воды, доводят водой до метки, перемешивают.

В отсутствии коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.

Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1 куб. дм, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 куб. см воды и кипятят 3 ч с обратным холодильником на водяной бане. Раствор охлаждают до комнатной температуры и добавляют в него 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом, содержащим хлорид натрия, до 0 °С и медленно при перемешивании добавляют в смесь 600 г льда и 60 куб. см концентрированной серной кислоты, помещенной в стакан вместимостью 2 куб. дм, охлаждаемый снаружи смесью льда с хлористым натрием.

Выпавшие кристаллы нитрозометилмочевины немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.

Внимание! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, так как под действием света и тепла она взрывоопасна.

Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В коническую колбу на 100 куб. см вносят 20 куб. см 40%-ного водного раствора гидроксида калия и 50 куб. см диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 - 5 °С. В охлажденную смесь порциями при перемешивании на магнитной мешалке или путем встряхивания вносят 5 г нитрозометилмочевины. Реакционную смесь выдерживают на холоде 10 минут. Затем эфирный слой сливают в чистую коническую колбу вместимостью 100 куб. см, добавляют 10 - 15 гранул гидроксида калия и оставляют со льдом на 2,5 - 3 часа для осушения раствора.

Раствор диазометана в эфире годен к употреблению при хранении в холодильнике в течение 1 - 2 суток. При хранении сосуды с диазометаном нельзя плотно закрывать!

Бутилирущую смесь готовят в мерной колбе на 100 куб. см в вытяжном шкафу. Вносят 50 - 60 куб. см н-бутанола, осторожно приливают пипеткой 2 куб. см концентрированной серной кислоты. Доводят объем до метки н-бутанолом и перемешивают содержимое.

В мерную колбу на 1000 куб. см вносят 200 куб. см дистиллированной воды, приливают 20 куб. см концентрированной соляной кислоты, доводят до метки этанолом, перемешивают.

7.8.1. Исходный раствор аминопиралида для градуировки (концентрация 200 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,02 г аминопиралида, растворяют в 50 - 60 куб. см ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 6 месяцев.

7.8.2. Исходный раствор N 1 аминопиралида для градуировки (концентрация 20 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора аминопиралида для градуировки с концентрацией аминопиралида 200 мкг/куб. см, доводят ацетоном до метки, получают исходный раствор N 1 аминопиралида для градуировки. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

7.8.3. Раствор N 2 аминопиралида для внесения (концентрация 2 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора аминопиралида для градуировки с концентрацией 200 куб. см, растворяют в 50 - 60 куб. см ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Этот раствор аминопиралида используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.8.4. Исходный раствор метильного производного аминопиралида для градуировки (соответствует концентрации аминопиралида 2 мкг/куб. см). В круглодонную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора аминопиралида для градуировки с концентрацией 200 мкг/куб. см, вносят 2 куб. см диазометана, выдерживают 30 мин. при комнатной температуре. Отдувают растворитель потоком теплого воздуха (помещая колбу на слабо подогретую водяную баню) досуха. Остаток растворяют порциями в 10 - 15 куб. см ацетона, переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, доводят ацетоном до метки, перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

7.8.5. Рабочие растворы N 3 - 6 метильного производного аминопиралида для градуировки (соответствуют концентрациям аминопиралида 0,02 - 0,2 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,5; 5 и 10 куб. см исходного раствора метильного производного с концентрацией аминопиралида 2 мкг/куб. см (п. 7.8.4), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 6 с концентрацией аминопиралида 0,02; 0,05; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см соответственно. Используются для установления градуировочной характеристики при исследовании воздушной среды.

Растворы N 3 - 6 хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 10 дней.

7.8.6. Раствор бутилового эфира аминопиралида для градуировки (соответствует концентрации аминопиралида 2,0 мкг/куб. см). В круглодонную колбу на 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора аминопиралида N 1 для градуировки с концентрацией 20 мкг/куб. см (п. 7.8.2), удаляют растворитель током теплого воздуха или азота. Проводят бутилирование по п. 7.8.6.1. Полученный гексановый раствор имеет концентрацию 2,0 мкг/куб. см.

7.8.6.1. Бутилирование

Бутилирование проводят в вытяжном шкафу. К сухому остатку в колбе добавляют 2 куб. см 2%-ного раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле (п. 7.6). Плотно закрывают колбу крышкой, помещают на 30 мин. в сушильный шкаф, нагретый до 100 °С. После этого содержимое охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 куб. см гексана и 25 - 30 куб. см дистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают и декантируют верхний гексановый слой.

7.8.7. Рабочие растворы N 3 - 6 бутилового эфира аминопиралида для градуировки (соответствуют концентрации аминопиралида 0,02 - 0,2 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,5; 5 и 10 куб. см раствора бутилового эфира для градуировки с концентрацией 2 мкг/куб. см (п. 7.8.6), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 6 с концентрацией аминопиралида 0,02; 0,05; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см соответственно. Используются для установления градуировочной характеристики при исследовании смывов с кожных покровов.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 10 дней.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х сек.) от концентрации аминопиралида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.9.1. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений. Устанавливают площади пиков соответствующего производного (мВ х сек.).

Градуировочную характеристику проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более чем на 9% (воздух рабочей зоны) или 6% (смывы с кожных покровов) от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.9.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Газовый хроматограф "Кристалл-2000М", снабженный электронозахватным детектором.

Колонка капиллярная VF-5 ms длиной 15 м, внутренним диаметром 0,53 мм, толщина пленки сорбента 0,5 мкм.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 140 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 150 °С, выдержка 1 мин., нагрев колонки со скоростью 30 градусов в минуту до температуры 210 °С, выдержка 2 мин., нагрев колонки со скоростью 30 градусов в минуту до температуры 270 °С, выдержка 2 мин.

Скорость газа 1 (азот): 30 см/сек., давление 12,62 кПа, поток 4,0779 куб. см/мин.

Газ 2: деление потока 1:4; сброс 16,49 куб. см/мин.

Хроматографируемый объем: 1 куб. мм.

Ориентировочное время выхода:

Метального производного аминопиралида: 5,59 мин.

Бутилового эфира аминопиралида: 7,31 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,2 нг.

Диаметр бумажного фильтра "синяя лента" должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетоном порциями 25 - 30 куб. см, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 х 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-ным раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

Отбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". Воздух с объемным расходом 2 куб. дм/мин. аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации аминопиралида на уровне предела обнаружения для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 2,0 куб. дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре 4 - 6 °С - 30 дней.

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, спина, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 кв. см). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 куб. см в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в морозильной камере при температуре -15 °С - 30 дней.

Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 куб. см, заливают 10 куб. см смеси ацетонитрил:0,1 N раствор соляной кислоты (1:1, по объему), в течение 5 мин. держат на ультразвуковой бане и помещают на встряхиватель на 60 мин. Экстракционную смесь сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями смеси объемом 10 куб. см, выдерживая на встряхивателе по 60 мин.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 45 °С досуха, сухой остаток дериватизируют диазометаном. Остатки диазометана отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 10 куб. см ацетона и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.9.1.

К отобранной пробе смыва прибавляют 2 куб. см 0,1 N раствора соляной кислоты, встряхивают в течение 1 часа, помещают в ультразвуковую баню на 5 минут, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную воронку, установленную в муфту колбы для упаривания и переносят содержимое в круглодонную колбу на 100 куб. см. Салфетку тщательно отжимают и промывают 12 куб. см подкисленного этанола. После встряхивания экстракт также переносят в ту же колбу для упаривания. Операцию повторяют дважды. Объединенный экстракт упаривают досуха. Сухой остаток подвергают бутилированию в соответствии с п. 7.8.6.1. После бутилирования к содержимому колбы добавляют 25 куб. см дистиллированной воды и 10 куб. см н-гексана, встряхивают. Верхний гексановый слой отделяют и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.9.1.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика бутилового эфира действующего вещества (мВ х сек.), с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию аминопиралида в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют гексаном (не более чем в 50 раз).

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированных фильтров и тканевых салфеток.

Массовую концентрацию аминопиралида в пробе воздуха (X), мг/куб. м, рассчитывают по формуле:

где:

T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), град. С;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t - длительность отбора пробы, мин.;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Массовую концентрацию аминопиралида в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

где:

C - концентрация аминопиралида в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика бутилового эфира, мкг/куб. см;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

Результат количественного анализа представляют в виде:

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание аминопиралида в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,1 мг/куб. м; смыва - менее 0,2 мкг/смыв".

--------------------------------

<*> 0,1 мг/куб. м; 0,2 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 2 куб. дм воздуха рабочей зоны; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва 200 кв. см) соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Если выполняется условие (3), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.

При превышении норматива контроля воспроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.

ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора".