"МУК 4.1.2478-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств мефенпир-диэтила в масле кукурузы методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 09.02.2009)

1. Разработаны Всероссийским НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 февраля 2009 г.

4. Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации мефенпир-диэтила в масле кукурузы в диапазоне 0,1 - 1,0 мг/кг.

Название вещества по ИСО: мефенпир-диэтил.

Название вещества по ИЮПАК: Диэтил(RS)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-метил-2-пиразолин-3,5-дикарбоксилат.

Структурная формула (не приводится).

Гигиенические нормативы для мефенпир-диэтила в России: ДСД - 0,1 мг/кг массы тела человека; МДУ в масле кукурузы - 0,2 мг/кг.

Область применения

Мефенпир-диэтил является антидотом и используется для ослабления фитотоксического действия некоторых гербицидов (в том числе сульфонилмочевин) на культурные растения. Применяется в России в качестве антидота в составе смесевых гербицидных препаратов, предназначенных для борьбы с однолетними и многолетними двудольными сорными растениями в посевах зерновых колосовых культур и кукурузы, с нормой расхода 12,5 - 25 г д.в./га.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Методика основана на определении мефенпир-диэтила с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД). Контроль мефенпир-диэтила в образцах кукурузного масла осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из масла водным метанолом, очистки экстракта путем распределения действующего вещества между несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими веществами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем.

7.1.1. Очистка н-гексана. Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания ее в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.2. Очистка этилацетата. Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

7.1.3. Очистка силикагеля. Силикагель 60 (0,063 - 0,20 мм) для колоночной хроматографии встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 5 ч.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля I степени активности в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему) и 20 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в сек., после чего она готова к работе.

В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора N 1 мефенпир-диэтила с концентрацией 10 мкг/куб. см в гексане (п. 7.5.2), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Промывают колонку 50 куб. см смеси гексан - этилацетат (95:5, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 60 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему). Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают досуха, остатки растворяют в 2 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по п. 9.4. Фракции, содержащие мефенпир-диэтил, объединяют и вновь анализируют по п. 9.4. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания мефенпир-диэтила может меняться при использовании новой партии сорбента или растворителей.

Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 270 °С и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 ч.

7.5.1. Исходный раствор мефенпир-диэтила для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,010 г мефенпир-диэтила, растворяют в 40 - 50 куб. см гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца.

7.5.2. Раствор мефенпир-диэтила N 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора мефенпир-диэтила с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют гексаном до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N 2 - 5.

Для приготовления проб масла с внесением при оценке полноты извлечения мефенпир-диэтила из исследуемых образцов используют гексановый раствор мефенпир-диэтила с концентрацией 2 мкг/куб. см.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца.

7.5.3. Рабочие растворы N 2 - 5 мефенпир-диэтила для градуировки (концентрация 0,02 - 0,20 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 0,20; 0,4; 1,0 и 2,0 куб. см градуировочного раствора N 1 мефенпир-диэтила с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.5.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией мефенпир-диэтила 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/куб. см соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ х с) от концентрации мефенпир-диэтила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора (п. 7.5.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 3-х месяцев. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

К образцу масла массой 5 г, внесенного в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 40 куб. см смеси метанол - вода (8:2, по объему) и колбу помещают на встряхиватель на 30 мин. Эмульсию центрифугируют 5 мин. при 6000 g и отделяют водно-метанольную фазу. Операцию экстракции масляной фазы повторяют, используя 40 куб. см смеси метанол - вода (8:2, по объему), и отделяют водно-метанольную фазу центрифугированием. Измеряют объем объединенной водно-метанольной фазы, отбирают 1/5 объема этой фазы (эквивалентна 1 г образца) и переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

Экстракт, полученный по п. 9.1 и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (1,5 - 2 куб. см) при температуре 40 °С. К водному остатку прибавляют 15 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 10 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 10 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °С и подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем по п. 9.3.

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 3 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 5 куб. см смеси гексан - этилацетат (95:5, по объему), которые также наносят на колонку. Колонку промывают 45 куб. см смеси гексан - этилацетат (95:5, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Мефенпир-диэтил элюируют с колонки 50 куб. см смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по п. 9.4.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, длина 20 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex (США)

Температура термостата испарителя - 250 °С, детектора - 320 °С, термостата колонки (программа: от 180 °С (2 мин.) со скоростью 20 °С/мин. до 220 °С (0 мин.); со скоростью 5 °С/мин. до 240 °С (4 мин.); со скоростью 20 °С/мин. до 260 °С (7 мин.))

Газовый режим: газ-носитель - азот, расход 3,5 куб. см/мин.

Деление потока: 1:1,8

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм

Время удерживания мефенпир-диэтила: около 7 мин. 30 с

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,4 нг

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика мефенпир-диэтила.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/куб. см, разбавляют гексаном.

Содержание мефенпир-диэтила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" менее 0,1 мг/кг для кукурузного масла <*>.

--------------------------------

<*> 0,1 мг/кг - предел обнаружения для масла кукурузы.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):